黃得棟　王黎　晉玲　馬秀娟　孫討軍　張勇

摘要 [目的]通過不同產地當歸質量的研究，探討當歸道地產區(qū)（岷縣）和新興產區(qū)（天祝縣、民樂縣）的質量差異性。[方法]以甘肅不同產地的15份當歸樣品為材料，采用HPLC法測定當歸樣品阿魏酸的含量;采用紫外分光光度法測定當歸多糖含量，根據(jù)2015版《中國藥典》第四部通則中浸出物的含量測定水溶性浸出物和醇溶性浸出物，通過SPSS 21.0軟件對其數(shù)據(jù)進行分析。[結果]新興產區(qū)和道地產區(qū)樣品水溶性浸出物、醇溶性浸出物無明顯差異（P>0.05）;道地產區(qū)當歸中阿魏酸含量高于新興產區(qū)，而當歸多糖含量低于新興產區(qū)。[結論]新興產區(qū)和道地產區(qū)當歸質量差異不大;該試驗為道地產區(qū)和新興產區(qū)當歸質量評價提供可靠、科學的依據(jù)。

關鍵詞 當歸;阿魏酸;當歸多糖;浸出物;新興產區(qū);道地產區(qū)

中圖分類號 R282.5文獻標識碼 A文章編號 0517-6611（2020）13-0195-03

Abstract [Objective] To study the quality differences of Angelica sinensis from genuine producing area （Minxian） and new producing area （Tianzhu and Minle counties）.[Method]The materials were 15 samples of Angelica sinensis from different areas of Gansu Province，the content of ferulic acid in Angelica sinensis samples was determined by HPLC; the polysaccharide content in Angelica sinensis was determined by ultraviolet spectrophotometry.According to the content of extracts in the fourth general rule of the Chinese Pharmacopoeia of the 2015 edition， watersoluble extracts and alcoholsoluble extracts were determined.The data were analyzed by SPSS 21.0.[Result]There was no significant difference in watersoluble extracts and alcoholsoluble extracts between new producing areas and genuine producing areas （P > 0.05）; the content of ferulic acid in genuine producing areas was higher than that in new producing areas， while the content of polysaccharides in Angelica sinensis was lower than that in new producing areas.[Conclusion]The quality of Angelica sinensis in new producing areas and genuine producing areas has little difference. This experiment provides reliable and scientific basis for the quality evaluation of Angelica sinensis in new producing areas and genuine producing areas.

Key words Angelica sinensis;Ferulic acid;Angelica sinensis polysaccharide;Extract;New producing areas;Genuine producing areas

當歸為常用中藥材，已有2 000多年的藥用歷史，素有“十方九歸”的美稱[1]，始載于《神農本草經》，為傘形科植物當歸Angelica sinensis（Oliv.）Diels的干燥根，具有補血活血、調經止痛、潤腸通便之功效[2]，主要成分有阿魏酸、藁本內酯及其異構體、多糖等[3]，分布于甘肅、云南、四川等地，其甘肅為道地產區(qū)，而岷縣的當歸已經形成了獨特的“岷歸”品牌，享譽海內外[4]。

研究表明，當歸質量的形成與其產地的環(huán)境因子和人文環(huán)境等因素密切相關，不同產地的生態(tài)環(huán)境的差異性是造成當歸藥材質量差異的重要原因[5]，不同產地的生態(tài)因子對當歸中有效物質如多糖、核苷、有機酸和揮發(fā)油的合成與積累具有重要影響[6]。高文遠等[7]采用隨機擴增多態(tài)性DNA標記（RAPD）技術研究了甘肅岷縣、漳縣、武都、四川南坪4個產地當歸基因組DNA的差異，結果表明，地理位置分布越近，當歸的遺傳差異越小，反之則大。嚴輝等[8]通過測定甘肅岷縣、云南、四川、湖北等地當歸中的揮發(fā)油、藁本內酯、阿魏酸、總多糖的含量，運用主成分分析法對當歸多指標進行綜合評價，結果顯示，甘肅產岷歸的質量最佳。王亞麗等[9]對甘肅36個產地（岷縣、漳縣不同產地、武都、康樂縣、宕昌縣、武山縣等）的當歸藥材進行比較分類，采用高效液相色譜法進行檢測，通過對不同產地當歸藥材的分類比較發(fā)現(xiàn)，當歸藥材質量與其種植環(huán)境密切相關。

近年來，隨著中藥產業(yè)的不斷發(fā)展，中藥材的種植已經成為中藥發(fā)展的必走之路，在傳統(tǒng)道地產區(qū)不能滿足市場需求的情況下尋找藥材種植的新興產區(qū)也已變得刻不容緩，在大力發(fā)展中藥材種植的同時如何保證優(yōu)質優(yōu)價，如何保證臨床療效這也是必須思考的問題。甘肅岷縣一帶作為我國當歸的道地產區(qū)已有近千年的種植歷史，但是隨著市場需求的不斷增大，岷縣一帶又因地勢地形的天然制約，再加之當歸病蟲害的不斷加重使得當歸的產量遭遇空前挑戰(zhàn)，在此環(huán)境下近年來逐漸出現(xiàn)了一些新興的當歸產區(qū)，以此來滿足當歸產量的市場需求。目前盡管對不同產地的當歸質量評價方面研究較多，但是對近年來新興產區(qū)（甘肅省民樂縣、天?？h）的研究還鮮見報道。因此，該試驗通過測定道地產區(qū)及新興產區(qū)當歸中阿魏酸、當歸多糖、浸出物（水溶性、醇溶性）的含量，對當歸的質量進行初步研究，探討當歸道地產區(qū)和新興產區(qū)的質量差異性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品收集。

樣品于2018年10—12月采自甘肅岷縣、民樂縣、天?？h，置通風陰涼處晾曬至干燥。樣品收集具體情況見表1。

1.1.2 儀器。

DGU-20A高效液相色譜儀、SPD-20A檢測器、SIL-20A自動進樣器、LC-20A泵、CTO-20A注溫箱（日本島津公司）;KQ-500E型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;電子天平FA2004（上海舜宇恒平科學儀器有限公司）;HK-10B型500 g搖擺式粉碎機（廣州市旭朗機械設備有限公司）;KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;KL05A型離心機（湖南凱達科學儀器有限公司）;202-0型電熱恒溫干燥箱（上海浦東榮豐科學儀器有限公司）;UV-2600 220 V紫外分光光度計（日本島津）;HHS-2S電子恒溫不銹鋼水浴鍋（上海宜昌儀器制造有限公司）;Mb可調式電熱板（北京科偉永興有限公司）;SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州南北儀器有限公司）。

1.1.3 試劑。

95%乙醇（分析級，萊陽市雙雙化工有限公司）;乙腈（山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司）;甲醇（分析級，國藥集團化學試劑有限公司）;苯酚（分析級，上海化學試劑有限公司）;濃硫酸（分析級，上?；瘜W試劑有限公司）;甲醇（色譜級，天津市科密歐化學試劑有限公司）;阿魏酸對照品（批號：1135-24-6，上海源葉生物科技有限公司）;葡萄糖對照品（批號：100082-201803，上海藥品生物制品鑒定所）。

1.2 方法

1.2.1 阿魏酸的含量測定。

1.2.1.1 色譜條件。色譜柱為ship-pack PV-ODS（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙睛-0.085%磷酸溶液（17∶83），流速為1.0 mL/min，柱溫為35 ℃，檢測波長為316 nm，進樣量10 μL。

1.2.1.2 對照品溶液的制備。精密稱定阿魏酸對照品3.43 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇定容至100 mL，再次稀釋，精密量取制備溶液50 mL于100 mL容量瓶中，加70%甲醇定容至100 mL，制成每1 mL含17 μg的溶液，即得。

1.2.1.3 供試品溶液的制備。取本品粉末（過三號篩）約02 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20 mL，密塞，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.1.4 方法學考察。對其線性關系、精密度、重復性、穩(wěn)定性、加樣回收率進行試驗，結果發(fā)現(xiàn)阿魏酸質量分數(shù)的 RSD 值均小于 0.5%，符合試驗要求。

1.2.1.5 含量測定。對15份當歸樣品中阿魏酸的含量進行測定，對照品與樣品色譜圖見圖1。

1.2.2 當歸多糖的測定。

1.2.2.1 測定條件及方法。參照陳麗萍等[10]正交設計優(yōu)化當歸多糖的定量分析方法進行測定。

1.2.2.2 對照品溶液的配制。精密稱取105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖0.101 6 g，置100 mL容量瓶，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，配成質量濃度為1.016 3 mg/mL的葡萄糖對照品溶液，吸取該葡萄糖對照品10 mL，于100 mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，即得質量濃度為0.101 6 mg/mL的葡萄糖對照品溶液，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2.3 供試品溶液的制備。取當歸的藥材粉末（過40目篩）約0.5 g，精密稱定，置于250 mL的錐形瓶中，加80%乙醇100 mL，加熱回流1 h，趁熱抽濾，將濾渣連同濾紙置于250 mL蒸餾瓶中加蒸餾水60 mL，繼續(xù)加熱回流2 h，抽濾，將濾液定容至100 mL容量瓶中，備用。

1.2.2.4 標準曲線的繪制。分別精密吸取葡萄糖對照品水溶液（0.101 6 mg/mL）0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL具塞試管中，加入濃硫酸7 mL、苯酚1 mL，以蒸餾水補足試液至刻度，搖勻，沸水浴加熱10 min后，立即至冰水中冷卻5 min。另以蒸餾水同上平行操作為空白對照組，于483 nm處測定吸光度（A）。以葡萄糖濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制標準曲線，得出回歸方程為Y=5.71x-0.005 9（R2=0.999 2），表明葡萄糖在0.010 16～0.101 60 mg/mL線性關系良好，見圖2。

1.2.2.5 樣品測定。精密量取1 mL供試品備用液，于483 nm處測定吸光度。

1.2.3 浸出物的含量測定。

按照2015版《中華人民共和國藥典》（四部）通則中水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量測定方法測定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)經Excel整理后導入SPSS 21.0軟件，經one-way ANOVA所得。

2 結果與分析

對新興產區(qū)和道地產區(qū)當歸樣品的阿魏酸、當歸多糖、水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量測定發(fā)現(xiàn)，新興產區(qū)和道地產區(qū)樣品水溶性浸出物、醇溶性浸出物無明顯差異（P>005）;道地產區(qū)當歸中阿魏酸含量高于新興產區(qū)，而當歸多糖含量低于新興產區(qū)（表2）。

3 結論與討論

道地產區(qū)所種藥材稱道地藥材，又稱地道藥材，是優(yōu)質純真藥材的專用名詞，它是指歷史悠久、產地適宜、品種優(yōu)良、產量宏豐、炮制考究、療效突出、帶有地域特點的藥材。岷縣是當歸的道地產區(qū)，試驗發(fā)現(xiàn)新興產區(qū)和道地產區(qū)樣品水溶性浸出物、醇溶性浸出物無明顯差異（P>0.05）;道地產區(qū)當歸中阿魏酸含量高于新興產區(qū)，而當歸多糖含量低于新興產區(qū)，均符合2015版《中華人民共和國藥典》相關項目的規(guī)定，該試驗從有效成分的角度初步研究了新興產區(qū)和道地產區(qū)的差異性，為新興產區(qū)當歸的生產提供了一定的試驗依據(jù)，具體療效差異還有待臨床試驗的進一步研究。

參考文獻

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