劉寅 程超 尹永祺

摘 要：研究了褪黑素聯(lián)合硫酸鋅處理下西藍(lán)花芽苗中異硫氰酸酯含量的變化，結(jié)果顯示：芽苗經(jīng)褪黑素聯(lián)合硫酸鋅處理后，其硫苷、異硫氰酸酯含量、黑芥子酶活性及總抗氧化能力均明顯增加。10 μmol·L-1褪黑素聯(lián)合4 mmol·L-1硫酸鋅處理4 d芽苗是最佳措施。

關(guān)鍵詞：西藍(lán)花;異硫氰酸酯;褪黑素;硫酸鋅

Abstract：The effects of exogenous melatonin combined with ZnSO4 on ITCs content in broccoli sprouts were studied. The results showed that glucosinolate and ITCs content， myrosinase activity and total antioxidant capacity in broccoli sprouts increased significantly under melatonin and ZnSO4 treatment. The best way was treated with 10 μmol·L-1 melatonin combined with 4 mmol·L-1 ZnSO4 fot 4 days.

Key words：Broccoli; ITCs; Melatonin; ZnSO4

西藍(lán)花（Brassica oleracea L.var.italic Planch）屬于一年兩生蕓薹屬植物，已證實(shí)其是富集異硫氰酸酯（ITCs）的良好試材[1]。ITCs是植物中天然的抗癌活性物質(zhì)，對各種癌癥都有較好的預(yù)防和抑制作用，受到國內(nèi)外的廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)非生物脅迫會增加西藍(lán)花芽苗中硫苷的含量，從而增加ITCs的含量，其中以ZnSO4脅迫效果最佳[2]。然而，雖然西藍(lán)花芽苗噴施ZnSO4后ITCs含量增加，但硫鹽脅迫環(huán)境會影響西藍(lán)花芽苗的生長。Zhao Y等[3]發(fā)現(xiàn)外源褪黑素作為植物生長的促進(jìn)劑，褪黑素能夠緩解其非生物脅迫[4]，使西藍(lán)花正常生長。本研究通過褪黑素緩解ZnSO4對西藍(lán)花芽苗的脅迫作用，分析其發(fā)芽期間芽苗ITCs含量變化。

1 材料與方法

1.1 材料與試材

西藍(lán)花籽粒，購于2019年，產(chǎn)自日本坂田公司。烯丙基硫苷，購自美國Sigma公司;1，2-苯二硫醇，購自東京化成工業(yè)株式會社;其余試劑均為國產(chǎn)分析純;總抗氧化能力試劑盒A015-1，購自南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-7504C型紫外可見分光光度計(jì)，購自上海欣茂儀器有限公司;DICO型臺式離心機(jī)，購自Thermo Fisher有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 西藍(lán)花發(fā)芽處理

西藍(lán)花籽粒經(jīng)去離子水沖洗后置于1%次氯酸鈉水溶液中浸泡消毒15 min，其后于30 ℃浸泡4 h;再置于鋪有蛭石的透明盒中，于30 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)發(fā)芽，每天光照16 h、黑暗8 h，分別進(jìn)行以下處理：對照（去離子水）;4 mmol·L-1ZnSO4;10 μmol·L-1褪黑素;4 mmol·L-1 ZnSO4+10 μmol·L-1褪黑素。在發(fā)芽4 d、6 d時取樣，速凍后于-20 ℃保藏待測。

1.3.2 ITCs、硫苷含量測定

ITCs含量參照J(rèn)iao D等[5]的方法測定;硫苷含量參照Wei J等[6]的方法測定。

1.3.3 黑芥子酶活力

參照Burow M等[7]的方法進(jìn)行測定。

1.3.4 總抗氧化能力

利用總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 西藍(lán)花芽苗形態(tài)特征

由圖1知，與對照相比，單獨(dú)使用ZnSO4處理抑制了西藍(lán)花芽苗的生長，而單獨(dú)使用褪黑素促進(jìn)了西藍(lán)花芽苗的生長，在ZnSO4處理中添加褪黑素處理可有效緩解該生長抑制作用，所以西藍(lán)花芽苗經(jīng)褪黑素聯(lián)合ZnSO4處理后，其芽苗長勢較好。

2.2 褪黑素聯(lián)合ZnSO4處理對西藍(lán)花ITCs代謝指標(biāo)的影響

2.2.1 ITCs含量

由圖2知，隨著發(fā)芽天數(shù)的增多，ITCs含量不斷下降，褪黑素與ZnSO4單獨(dú)處理及兩者共同處理西藍(lán)花芽苗均顯著提高了ITCs含量（P<0.05）。第4 d時，褪黑素與ZnSO4共同處理的西藍(lán)花中ITCs含量229.82 mg/100 gFW。

2.2.2 硫苷含量

由圖3知，與對照組相比，4 d下的各處理硫苷含量均顯著提高（P<0.05）。7 d下的ZnSO4處理顯著高于對照，第4 d時，ZnSO4與褪黑素聯(lián)合處理的西藍(lán)花芽苗中硫苷含量最高，為181.14 mg/g DW。

2.3 黑芥子酶活力

由圖4知，與對照組相比，其他各處理組西藍(lán)花芽苗中黑芥子酶活力均有所提高，其中ZnSO4處理的西藍(lán)花芽苗中黑芥子酶活力最高。4 d時，ZnSO4處理的西藍(lán)花芽苗中黑芥子酶活力為11 142.65 U·mg-1，褪黑素聯(lián)合ZnSO4處理的西藍(lán)花芽苗中黑芥子酶活力為10 414.69 U·mg-1。

2.4 總抗氧化能力

由圖5知。隨著發(fā)芽天數(shù)的增多總抗氧化能力顯著下降（P<0.05）;第4 d時，褪黑素與ZnSO4單獨(dú)處理及兩者共同處理西藍(lán)花芽苗均顯著提高了其總抗氧化能力。

3 結(jié)論

硫酸鋅處理抑制了西藍(lán)花芽苗的生長，而外源添加褪黑素可有效緩解該生長抑制作用，同時，西藍(lán)花芽苗的硫苷和異硫氰酸酯含量、黑芥子酶活性及總抗氧化能力均明顯增加。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，10 μmol·L-1褪黑素聯(lián)合4 mmol·L-1硫酸鋅處理4 d芽苗下其ITCs含量高達(dá)229.82 mg/100g FW。

參考文獻(xiàn)：

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