晏家友，張錦秀，張 純，鄺聲耀，李書偉，刁 慧，毛 馳

（四川省畜牧科學(xué)研究院，動(dòng)物遺傳育種四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川成都 610066）

銅是動(dòng)物機(jī)體必需的一種微量元素，可以作為各種酶（如銅藍(lán)蛋白、銅鋅超氧化物歧化酶、賴氨酰氧化酶、酪氨酸酶等）的組成成分或激活劑，直接參與機(jī)體代謝，發(fā)揮重要的營(yíng)養(yǎng)功能[1-2]。植物性飼料原料中銅含量較低，以之為主的基礎(chǔ)飼糧不能滿足動(dòng)物對(duì)銅的營(yíng)養(yǎng)需要，所以要在配合飼料中額外補(bǔ)銅，才能避免銅缺乏癥的產(chǎn)生。無(wú)機(jī)銅是飼料中微量元素銅的主要添加形式，但是由于其吸收利用率低，高劑量使用是普遍現(xiàn)象[3]。然而養(yǎng)殖生產(chǎn)中，高劑量使用無(wú)機(jī)銅會(huì)對(duì)動(dòng)物自身、畜禽產(chǎn)品及生態(tài)環(huán)境構(gòu)成極大的安全威脅[4-5]。我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布的第2625 號(hào)公告《飼料添加劑安全使用規(guī)范》已經(jīng)對(duì)動(dòng)物飼料中銅的添加量作出進(jìn)一步限制，其中規(guī)定肉兔配合飼料或全混合日糧中，銅的最高限量為25 mg/kg（包含飼料原料本底值）。本試驗(yàn)旨在研究日糧中添加不同銅源對(duì)肉兔生產(chǎn)性能、腹瀉率及組織器官中銅沉積量的影響，為養(yǎng)兔生產(chǎn)中銅源的科學(xué)選擇和合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在四川省畜牧科學(xué)研究院肉兔科研基地進(jìn)行。選用240 只35 日齡斷奶的新西蘭仔兔，隨機(jī)分為5 個(gè)處理，每個(gè)處理8 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6 只兔（公、母各半）。試驗(yàn)兔在同一棟封閉式兔舍內(nèi)，放在不銹鋼籠子里飼養(yǎng)，每個(gè)籠子2 只兔（1 公1母）。4 個(gè)試驗(yàn)組添加的銅源分別為硫酸銅、堿式氯化銅、檸檬酸銅和甘氨酸銅，銅的添加水平均為20 mg/kg，對(duì)照組不加銅。預(yù)試期7 d，正試期49 d。每天08:00 和17:00 投喂2 次飼料，投料量以兔充分吃飽而幾乎不留料為準(zhǔn)。試驗(yàn)期間自由飲水。每日清掃兔舍1 次，每隔4 d 對(duì)兔舍進(jìn)行噴霧消毒1 次。仔兔免疫程序及其他飼養(yǎng)管理按兔場(chǎng)常規(guī)進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)材料 檸檬酸銅（銅含量34.5%～36.7%）由四川省畜科飼料有限公司生產(chǎn)，硫酸銅（銅含量≥25.1%）、堿式氯化銅（銅含量≥58.1%）和甘氨酸銅（銅含量≥21%）均從市場(chǎng)采購(gòu)。

1.3 試驗(yàn)日糧 試驗(yàn)日糧參照De Blas 等[6]《兔的營(yíng)養(yǎng)需要》配制。日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

表1 日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 樣品采集 試驗(yàn)結(jié)束后，從每個(gè)處理選取8 只（公、母各半）接近平均體重的兔，經(jīng)屠宰后，分別取心臟、肝臟、腎臟樣品各2 g，然后從第3～6 腰椎處取3 cm×1 cm×1 cm 背最長(zhǎng)肌組織一塊，液氮處理后，于-20℃冰箱冷凍保存，用于測(cè)定組織器官中銅含量。

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.5.1 生產(chǎn)性能 試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)，分別對(duì)每只兔進(jìn)行空腹稱重。試驗(yàn)期內(nèi)，以每3 個(gè)兔籠為1 個(gè)重復(fù)單位，記錄總投料量和總剩料量。根據(jù)平均日增重（ADG）和平均日采食量（ADFI）計(jì)算耗料增重比（F/G）。

1.5.2 腹瀉率 試驗(yàn)期內(nèi)，每天觀測(cè)兔的排糞情況，并對(duì)糞便進(jìn)行感觀評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為0 分：正常；1 分：不成形；2 分：輕度腹瀉；3 分：急性腹瀉，將得分為2 分和3分者判定為腹瀉[7]。統(tǒng)計(jì)整個(gè)試驗(yàn)期各處理兔的腹瀉率。

腹瀉率=各處理腹瀉只數(shù)/各處理兔的總數(shù)×100%

1.5.3 組織器官中銅沉積量 組織器官中銅沉積量指標(biāo)包括肌肉、心臟、肝臟和腎臟中銅含量，按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中銅的測(cè)定》（GB 5009.13-2017）中第二法進(jìn)行測(cè)定，使用儀器包含原子吸收分光光度計(jì)和電子天平等。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 利用SAS V8 軟件包編程進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，采用One-Way ANOVA 檢驗(yàn)，組間差異進(jìn)行Tukey 多重比較，腹瀉率差異顯著性采用U 檢驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。以P＜0.05為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同銅源對(duì)肉兔生產(chǎn)性能的影響 由表2 可以看出，檸檬酸銅組、甘氨酸銅組和堿式氯化銅組肉兔的ADG較對(duì)照組分別提高18.75%、15.63%和12.50%（P＜0.05），而硫酸銅組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。檸檬酸銅組、甘氨酸銅組和堿式氯化銅組肉兔的F/G 較對(duì)照組分別降低12.08%、10.39% 和8.71%（P＜0.05），而硫酸銅組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。各處理組肉兔ADFI 差異均不顯著。

表2 不同銅源對(duì)肉兔生產(chǎn)性能的影響

2.2 不同銅源對(duì)肉兔腹瀉率的影響 由圖1 可以看出，檸檬酸銅組肉兔的腹瀉率較對(duì)照組、硫酸銅組、堿式氯化銅組和甘氨酸銅組分別降低60.01%、55.57%、55.57%和50.03%（P＜0.05）。但硫酸銅組、堿式氯化銅組或甘氨酸銅組肉兔腹瀉率與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

2.3 不同銅源對(duì)肉兔組織器官中銅沉積量的影響 由表3 可以看出，檸檬酸銅組、甘氨酸銅組和堿式氯化銅組肉兔心臟中銅含量較對(duì)照組分別提高37.78%、31.11%和22.22%（P＜0.05），而硫酸銅組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。檸檬酸銅組、甘氨酸銅組、堿式氯化銅組和硫酸銅組肉兔肝臟中銅含量較對(duì)照組分別提高314.44%、251.11%、242.22% 和234.44%（P＜0.05）。檸檬酸銅組、甘氨酸銅組、堿式氯化銅組和硫酸銅組肉兔腎臟中銅含量較對(duì)照組分別提高52.94%、47.06%、41.18%和41.18%（P＜0.05）。但各處理組肉兔肌肉中銅含量差異均不顯著。

表3 不同銅源對(duì)肉兔組織器官中銅沉積量的影響 mg/kg

3 討 論

在動(dòng)物飼料“減銅限銅”的國(guó)家政策引領(lǐng)下，研制和應(yīng)用更加安全、有效、環(huán)保的新型銅源是當(dāng)今飼料行業(yè)必然的發(fā)展趨勢(shì)。Mcdowell[8]研究指出，動(dòng)物對(duì)日糧中不同銅源的吸收率各有差異。這說(shuō)明各類銅源對(duì)肉兔的促生長(zhǎng)效果可能存在不同。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在日糧中添加20 mg/kg 檸檬酸銅、甘氨酸銅或堿式氯化銅均可顯著提高肉兔的ADG 和飼料轉(zhuǎn)化率，而在日糧中添加20 mg/kg 硫酸銅對(duì)肉兔的生產(chǎn)性能卻無(wú)顯著影響。這證實(shí)了肉兔對(duì)硫酸銅的吸收利用率更低，在飼料中添加低劑量的硫酸銅只能滿足肉兔對(duì)銅的基本營(yíng)養(yǎng)需要，而達(dá)不到促進(jìn)肉兔生長(zhǎng)的作用，與連繼勤等[9]研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)結(jié)果還表明，較對(duì)照組、硫酸銅組、堿式氯化銅組和甘氨酸銅組，在日糧中添加20 mg/kg 檸檬酸銅可以顯著降低肉兔的腹瀉率，而硫酸銅組、堿式氯化銅組或甘氨酸銅組肉兔的腹瀉率并無(wú)顯著變化，提示實(shí)際生產(chǎn)中可以應(yīng)用檸檬酸銅來(lái)減少肉兔腹瀉。關(guān)于檸檬酸銅降低動(dòng)物腹瀉率的原因，可能與其提高了機(jī)體免疫力有關(guān)[10]，但具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

關(guān)于不同銅源在肉兔組織器官中銅沉積量的研究報(bào)道甚少。本試驗(yàn)結(jié)果表明，硫酸銅、堿式氯化銅、檸檬酸銅或甘氨酸銅在肉兔各組織器官中的銅沉積量從高到低依次為肝臟、心臟、腎臟和肌肉，與李宏等[11]研究結(jié)果一致。以上結(jié)果提示，肝臟是肉兔主要的“儲(chǔ)銅庫(kù)”，可能起著一種濾過(guò)作用，防止血液中銅含量過(guò)高，所以銅容易在肝臟中積聚，因而肝銅濃度可以作為評(píng)價(jià)肉兔銅營(yíng)養(yǎng)狀況的敏感指標(biāo)之一[12]。本試驗(yàn)結(jié)果也表明，不同銅源在肉兔肌肉組織中銅含量差異不顯著。這可能是由于在一定銅水平范圍內(nèi)，為了保持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，機(jī)體組織的銅含量不會(huì)隨外界添加的銅水平的變化而變化[13]。本試驗(yàn)結(jié)果還表明，硫酸銅、堿式氯化銅、檸檬酸銅或甘氨酸銅在肉兔各組織器官中銅沉積量從高到低依次為檸檬酸銅、甘氨酸銅、堿式氯化銅和硫酸銅，總體來(lái)看，有機(jī)銅在肉兔組織器官中的銅沉積量高于無(wú)機(jī)銅。關(guān)于檸檬酸銅和甘氨酸銅在肉兔組織器官中銅沉積量更高的原因，可能與其生物學(xué)利用率有關(guān)，但具體作用機(jī)制也需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，在肉兔日糧中添加20 mg/kg 檸檬酸銅可以提高ADG 和飼料轉(zhuǎn)化率，降低腹瀉率，并且提高心臟、肝臟和腎臟中銅沉積量；檸檬酸銅組的腹瀉率較硫酸銅組、堿式氯化銅組或甘氨酸銅組也有顯著降低。本試驗(yàn)結(jié)果為實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用更加高效、環(huán)保的新銅源，既發(fā)揮肉兔的生長(zhǎng)潛力，又減少糞銅的排放量，提供了新的思路。