朱思敏 歐陽麗敏 王新宏 安 叡 崔 波 尤麗莎

（上海中醫(yī)藥大學(xué)， 上海201203）

蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodes lancea（Thunb.） DC.或北蒼術(shù)Atractylodes chinensis（DC.） Koidz.的干燥根莖，具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒明目的功效［1］。《500 味常用中藥材的經(jīng)驗鑒別》 中記載：“2 種蒼術(shù)商品均以個大、形如連珠狀、質(zhì)堅實、有油性、斷面朱砂點(diǎn)或雄黃點(diǎn)多，折斷或切片后放置生白霜，及香氣濃郁者為佳”［2］。

目前，茅蒼術(shù)大多為人工栽培，主要供出口日、韓等國，國內(nèi)市場上流通的主要為野生北蒼術(shù)。北蒼術(shù)為我國商品藥材的主流品種，主產(chǎn)于秦嶺以北的內(nèi)蒙、河北、東三省、山東等地，其中以河北、內(nèi)蒙產(chǎn)量最大，為主產(chǎn)區(qū)。北蒼術(shù)商品藥材在市場上被分為毛貨（未撞皮）、半光半毛貨（半撞皮）、光貨（撞皮） 3個等級［3］，毛貨及半光半毛貨往往未經(jīng)撞皮或僅粗略去皮，雜質(zhì)含有量極高。光貨殘根殘莖去除較為干凈，主要供飲片廠切制成飲片，銷往各地藥房。這種分級方法僅依據(jù)藥材的外觀、形態(tài)等，不一定能體現(xiàn)北蒼術(shù)藥材的內(nèi)在質(zhì)量，缺乏科學(xué)性?！吨兴幉纳唐芬?guī)格等級團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)》 中規(guī)定了北蒼術(shù)的等級標(biāo)準(zhǔn)［4］，但其僅以頭數(shù)及是否可見殘莖和碎屑為分級標(biāo)準(zhǔn)，將北蒼術(shù)分為2個等級（選貨和統(tǒng)貨），考察指標(biāo)較少，也未結(jié)合內(nèi)在有效成分進(jìn)行分析，存在一定的局限性。本研究通過對北蒼術(shù)藥材的外在及內(nèi)在質(zhì)量綜合研究分析，制定了較規(guī)范合理的北蒼術(shù)商品藥材等級標(biāo)準(zhǔn)，從而避免以個頭論質(zhì)量的弊端，以期促進(jìn)北蒼術(shù)商品藥材優(yōu)質(zhì)優(yōu)價體系的建立，為下游企業(yè)的優(yōu)質(zhì)飲片生產(chǎn)和中成藥投料奠定堅實的基礎(chǔ)，同時也為廣大人民群眾的用藥療效和安全提供保障。

1 材料

1.1 藥材 本研究收集了36 批河北、山西、內(nèi)蒙等地的北蒼術(shù)藥材，經(jīng)九州天潤（武漢） 中藥研究院藥材研發(fā)工程師楊群鑒定，憑證標(biāo)本存放于上海中醫(yī)藥大學(xué)。

1.2 儀器與試劑 Agilent-1260 高效液相色譜儀、Agilent-7890B 氣相色譜儀、氫火焰離子檢測器（FID）（美國Agilent 公司）；BT125D 準(zhǔn)微量天平（德國Sartorius 公司）；SB-5200D-250型超聲清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；5424R型冷凍離心機(jī)（德國Eppendorf 公司）；400 A型仙桃多功能粉碎機(jī)（浙江永康市紅太陽機(jī)電有限公司）；173618 電熱套（鄭州科泰實驗設(shè)備有限公司）。

蒼術(shù)素對照品（批號17-2001，純度＞98%，上海中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究中心）；β-桉葉醇（批號P24O8F46474，純度≥95%，上海源葉生物科技有限公司）；甲醇（國藥試劑股份有限公司）；娃哈哈純凈水、1-十六醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 市場調(diào)查及分級依據(jù) 本研究調(diào)查了安國藥材市場、荷花池藥材市場、亳州藥材市場上北蒼術(shù)藥材目前的分級情況，各市場分級方式較為一致，結(jié)果見表1。

表1 北蒼術(shù)市場分級情況Tab.1 Market classification of A.chinensis

由于市場上半撞皮貨和未撞皮貨雜質(zhì)灰分過多，不滿足2015 年版《中國藥典》 要求，因此，本研究只對撞皮貨（即光貨） 進(jìn)行分級，同時考慮到大生產(chǎn)可操作性，采用過篩法按大小對北蒼術(shù)藥材首先進(jìn)行傳統(tǒng)分級，見表2。

表2 北蒼術(shù)傳統(tǒng)分級方法Tab.2 Traditional classification method of A.chinensis

2.2 外觀性狀指標(biāo)選擇及測定

2.2.1 方法 在傳統(tǒng)“辨狀論質(zhì)” 的基礎(chǔ)上，結(jié)合2015 年版《中國藥典》 對北蒼術(shù)性狀的描述以及本草記載、市場調(diào)查等，選擇北蒼術(shù)的長度、單個質(zhì)量、質(zhì)地、每1 kg 的頭數(shù)為指標(biāo)進(jìn)行測定。結(jié)果見表3。

2.2.2 測定數(shù)量指標(biāo)選擇 隨機(jī)選擇北蒼術(shù)一等一份，5 批藥材為一組，測定數(shù)量依次遞增到50個，每組3 次重復(fù)，計算每組的RSD。以長度及單個藥材質(zhì)量為測定指標(biāo)，繪制RSD 隨測量個數(shù)改變的變化曲線。結(jié)果見圖1，北蒼術(shù)一等藥材的長度與單個質(zhì)量RSD 在測量30個之后趨于平穩(wěn)，因此在測量北蒼術(shù)藥材的長度及單個質(zhì)量時每份樣本隨機(jī)選擇30個重復(fù)測定。

圖1 長度及單個質(zhì)量RSD 與測量個數(shù)的變化曲線Fig.1 Change curve of RSD and measurement numbers of length and single weight

2.2.3 外觀性狀等級指標(biāo)篩選 北蒼術(shù)藥材外觀性狀統(tǒng)計分析結(jié)果見表4～5。

由表5 可知，北蒼術(shù)藥材質(zhì)地與長度、單個質(zhì)量、頭數(shù)都無相關(guān)，但頭數(shù)與長度、單個質(zhì)量的相關(guān)系數(shù)分別為-0.868、-0.835，為極顯著負(fù)相關(guān)。

北蒼術(shù)藥材的質(zhì)地、長度、單個質(zhì)量及每1 kg頭數(shù)都是其外觀性狀的重要指標(biāo)，長度和單個質(zhì)量可集中反映在頭數(shù)上，結(jié)合實際測定過程中的可操作性，選擇每1 kg 頭數(shù)作為外觀性狀評價的指標(biāo)。

2.3 北蒼術(shù)藥材內(nèi)在指標(biāo)選擇及測定 相關(guān)文獻(xiàn)研究表明［5-12］，蒼術(shù)的藥理活性與其所含的揮發(fā)油有關(guān)。蒼術(shù)揮發(fā)油中含有β-桉葉醇、β-芹子烯、茅術(shù)醇、α-愈創(chuàng)木烯、蒼術(shù)酮等萜類成分，其中β-桉葉醇含有量較高；此外還含有蒼術(shù)素、（4E，6E，12E） -十四碳三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯等聚炔類成分，其中蒼術(shù)素含有量最高。本研究在進(jìn)行等級研究時，選擇了萜類中含有量最高的成分β-桉葉醇和聚炔類中含有量最高的成分蒼術(shù)素，作為北蒼術(shù)藥材含有量測定的指標(biāo)成分。同時，參照2015 年版《中國藥典》 四部，測定北蒼術(shù)藥材的雜質(zhì)（附錄2301 雜質(zhì)檢查法）、水分（附錄0832水分測定法第四法甲苯法）、總灰分及酸不溶性灰分（附錄2302 灰分測定法）、水溶性浸出物及醇溶性浸出物（附錄2201 浸出物測定法）、總揮發(fā)油的含有量（附錄2204 揮發(fā)油測定法甲法）。結(jié)果見表6。

表3 北蒼術(shù)樣本信息及外觀性狀指標(biāo)測定結(jié)果Tab.3 Sample information and appearance index measurement results of A.chinensis

表4 北蒼術(shù)外觀性狀統(tǒng)計分析Tab.4 Statistical analysis of appearance index of A.chinensis

表5 北蒼術(shù)外觀性狀Pearson 相關(guān)性分析Tab.5 Pearson correlation analysis of appearance index of A.chinensis

表6 北蒼術(shù)內(nèi)在指標(biāo)測定結(jié)果（%）Tab.6 Measurement results of internal quality index of A.chinensis（%）

2.3.1 蒼術(shù)素含有量測定 參照2015 年版《中國藥典》 蒼術(shù)“含有量測定” 項下方法進(jìn)行［1］，結(jié)果見表6。

2.3.2 β-桉葉醇含有量測定 本研究前期在參考文獻(xiàn)［13-17］的基礎(chǔ)上，對β-桉葉醇的含有量測定的方法進(jìn)行摸索，并進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)考察，建立了穩(wěn)定可靠的分析方法，結(jié)果見表6。

2.3.2.1 色譜條件 HP-INNOWAX 毛細(xì)管柱（30 m×320 μm，0.25 μm）；FID 檢測器溫度270℃；進(jìn)樣口溫度270℃；載氣壓力42.865 psi（1 psi＝6.895 kPa）；尾吹氣N2（99.999%），載氣比例Air-H2-N2＝380∶40∶25；進(jìn)樣量1 μL；分流比1∶1。升溫程序見表7。

2.3.2.2 對照品貯備液及內(nèi)標(biāo)溶液制備 取β-桉葉醇對照品適量，精密稱定，加甲醇配制成1.017 mg／mL的對照品溶液。取1-十六醇適量，精密稱定，加甲醇配制成0.4 mg／mL 對照品溶液。

表7 GC 程序升溫方法Tab.7 Program heating method of GC

2.3.2.3 供試品溶液制備 取蒼術(shù)粉末0.4 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入25 mL 甲醇，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，取出放冷，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL 置10 mL 量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 軟件針對影響北蒼術(shù)藥材外觀及內(nèi)在質(zhì)量的10個指標(biāo)（頭數(shù)、雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、蒼術(shù)素含有量、β-桉葉醇含有量、揮發(fā)油含有量），對36 批北蒼術(shù)藥材進(jìn)行Pearson 相關(guān)性客觀分析，同時結(jié)合主觀分析，綜合判定北蒼術(shù)商品藥材等級劃分指標(biāo)。

3 規(guī)格等級劃分

3.1 等級劃分指標(biāo)篩選 北蒼術(shù)Pearson組間相關(guān)性分析見表8。

表8 北蒼術(shù)各指標(biāo)Pearson組間相關(guān)性分析Tab.8 Pearson correlation analysis of various index of A.chinensis

表8 表明，頭數(shù)與其他因素都無相關(guān)，表明傳統(tǒng)按大小進(jìn)行藥材等級劃分的依據(jù)與其內(nèi)在質(zhì)量無必然聯(lián)系。但是頭數(shù)是反映北蒼術(shù)藥材外觀的重要參數(shù)之一，也是實際生產(chǎn)、交易中的重要等級依據(jù)，一般藥材個大易切片，銷往飲片廠切成飲片，價格也較高，個頭小的一般銷往制藥廠或提取車間，價格較低。因此在劃分等級時頭數(shù)應(yīng)列為重要參考依據(jù)。

雜質(zhì)與蒼術(shù)素含有量、β-桉葉醇含有量、揮發(fā)油含有量的相關(guān)系數(shù)分別為-0.415、-0.363、-0.410，有顯著負(fù)相關(guān)，表明雜質(zhì)越高各項含有量測定指標(biāo)越低。總灰分與酸不溶性灰分相關(guān)系數(shù)為0.690，有極顯著正相關(guān)，表明總灰分越高酸不溶性灰分越高。統(tǒng)計結(jié)果與實際情況比較吻合，北蒼術(shù)藥材中含有較多的泥沙雜質(zhì)，實際生產(chǎn)中如果不充分去除泥沙雜質(zhì)，往往會引起總灰分超出藥典的限度要求。目前市場上也有按雜質(zhì)的多少對北蒼術(shù)藥材進(jìn)行分級，雜質(zhì)含有量不同價格也相差很大，因此本研究將雜質(zhì)作為北蒼術(shù)等級劃分的重要依據(jù)。

水分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物與其他指標(biāo)都無顯著相關(guān)。故不作為等級劃分的依據(jù)。水分是蒼術(shù)藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)，水分過高易發(fā)霉變質(zhì)，因此需控制其含有量限度，但在儲存、運(yùn)輸過程中水分含有量易發(fā)生動態(tài)變化，故不作為等級劃分的依據(jù)。根據(jù)客觀分析的結(jié)果水溶性浸出物、醇溶性浸出物也可不作為等級劃分的依據(jù)。

蒼術(shù)素含有量與揮發(fā)油含有量之間的相關(guān)系數(shù)為0.383，為顯著性正相關(guān)，β-桉葉醇含有量與揮發(fā)油含有量之間的相關(guān)系數(shù)為0.425，為極顯著正相關(guān)，表明一般揮發(fā)油含有量越高，蒼術(shù)素及β-桉葉醇含有量也越高。然而北蒼術(shù)中β-桉葉醇的含有量波動較大，變異范圍較寬，揮發(fā)油含有量測定也存在較大誤差，而蒼術(shù)素含有量為藥典中蒼術(shù)含有量測定的指標(biāo)，因此，三者權(quán)衡，本研究選擇蒼術(shù)素作為北蒼術(shù)商品藥材等級劃分的重要依據(jù)。

3.2 等級劃分指標(biāo)值確定 對北蒼術(shù)商品藥材等級劃分指標(biāo)進(jìn)行描述性統(tǒng)計分析，并采用Excel 中t-test 工具對各組之間的定級指標(biāo)進(jìn)行組間雙尾t檢驗，以驗證各等級之間的分級指標(biāo)是否存在顯著性差異，結(jié)果見表9～10。

表9 北蒼術(shù)定級指標(biāo)統(tǒng)計分析Tab.9 Statistical analysis of classification index of A.chinensis

表10 北蒼術(shù)定級指標(biāo)組間t 檢驗分析Tab.10 t-test analysis of classification index of A.chinensis

3.2.1 頭數(shù) 由等級之間頭數(shù)的顯著性分析可知，北蒼術(shù)藥材經(jīng)過篩后，一等與二等，一等與統(tǒng)貨之間的頭數(shù)有極顯著差異，但是二等與統(tǒng)貨之間的頭數(shù)無顯著差異。因此可通過頭數(shù)來區(qū)分一等品，但不能區(qū)分二等與統(tǒng)貨。

3.2.1.1 一等 經(jīng)傳統(tǒng)過篩法（2.5 cm×2.5 cm方孔篩） 分級后，北蒼術(shù)一等品每千克頭數(shù)在115～157 之間，均值134，其中頭數(shù)在115～130 之間有3個樣本；頭數(shù)在131～140 之間有7個樣本；頭數(shù)在140 以上的有1個樣本。因此北蒼術(shù)一等品的頭數(shù)不得過140 頭／kg 較為合理。同時為避免人為地在特大貨中摻小，可限定能過2.5 cm×2.5 cm方孔篩的部分不得過5%。

3.2.1.2 二等 經(jīng)傳統(tǒng)過篩（1.5 cm×1.5 cm 方孔篩） 后，頭數(shù)在217～390 之間，均值311，為了在大小上與一等品有區(qū)別，北蒼術(shù)可限定二等品的頭數(shù)大于140 頭／kg，同時限定能過1.5 cm ×1.5 cm方孔篩的部分不得過5%。

3.2.1.3 統(tǒng)貨 統(tǒng)貨對應(yīng)為目前市場上的撞皮統(tǒng)貨，是自然采收混合未經(jīng)任何大小篩選的貨。個頭上大小不一，有大有小，有的批次大貨多質(zhì)量較好，有的批次小貨多，質(zhì)量較差，但不宜將過篩后的碎末子充當(dāng)統(tǒng)貨。本研究前期考察了28 批蒼術(shù)統(tǒng)貨能過1.5 cm×1.5 cm 方孔篩部分的比例，結(jié)果在0.950%～34.9%之間，因此本研究初步規(guī)定統(tǒng)貨中能過1.5 cm×1.5 cm 方孔篩的部分不得超過35%。

3.2.2 雜質(zhì) 由等級之間雜質(zhì)的顯著性分析可知，北蒼術(shù)藥材一等與統(tǒng)貨，二等與統(tǒng)貨之間的雜質(zhì)有極顯著差異，但是二等與一等之間的雜質(zhì)無顯著差異。藥材經(jīng)過篩后一些莖基、殘根、皮屑以及灰塵、泥沙等雜質(zhì)大部分都被篩去，因此與統(tǒng)貨相比選貨的雜質(zhì)含有量明顯降低。北蒼術(shù)一等品、二等品、統(tǒng)貨的雜質(zhì)含有量均值分別為1.27%、1.11%、2.02%，結(jié)合2015 年版《中國藥典》 中的“藥屑雜質(zhì)通常不得過3%” 的一般規(guī)定，最終定為北蒼術(shù)藥材一等品及二等品的雜質(zhì)含有量不得過1.5%，統(tǒng)貨雜質(zhì)含有量不得過3%。

3.2.3 蒼術(shù)素含有量 蒼術(shù)素含有量為劃分北蒼術(shù)藥材的重要指標(biāo)，組間t檢驗表明，按過篩法分級后，一等與二等之間，一等與統(tǒng)貨之間蒼術(shù)素含有量無顯著性差異。二等與統(tǒng)貨之間蒼術(shù)素含有量有顯著性差異，但若除去三批人工栽培品（CS32-CS34） 后，二等與統(tǒng)貨之間則無顯著性差異，表明差異來源為人工栽培的北蒼術(shù)，人工栽培品的樣本數(shù)量有限，缺乏代表性，但通過文獻(xiàn)［18］可知人工栽培北蒼術(shù)的蒼術(shù)素含有量普遍低于野生品。

近年來野生北蒼術(shù)資源枯竭，人工栽培品初現(xiàn)市場，由于人工催長，其個頭較大，按傳統(tǒng)定級可列為一等品，但其中一部分有效成分含有量較低，不應(yīng)列入一等品中，制定合理的一等品的蒼術(shù)素含有量限度，可防止劣質(zhì)栽培品混入一等品中。

一等北蒼術(shù)藥材中蒼術(shù)素含有量范圍為0.426%～0.742%，均值0.588%，人工栽培品蒼術(shù)素含有量范圍為0.316%～0.375%，結(jié)合藥典中蒼術(shù)素限定的最低值為0.30%，本研究最終規(guī)定一等北蒼術(shù)藥材中蒼術(shù)素含有量不得低于0.45%，二等品及統(tǒng)貨藥材中蒼術(shù)素含有量不得低于0.30%。

4 討論

本研究確定的等級劃分標(biāo)準(zhǔn)基本體現(xiàn)了本草記載及市場上北蒼術(shù)藥材以“個大、雜質(zhì)少、有效成分含有量高” 為優(yōu)的分級觀點(diǎn)，在把控外觀性狀的同時，對北蒼術(shù)藥材的內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)行控制，能較好地體現(xiàn)北蒼術(shù)藥材的綜合質(zhì)量，更具科學(xué)性，在大生產(chǎn)上也具有較強(qiáng)的可操作性，以期為北蒼術(shù)商品藥材的市場定級提供一定依據(jù)，并進(jìn)一步促進(jìn)其優(yōu)質(zhì)優(yōu)價體系的形成。