王文欣 劉永

摘要：目的：觀察復合應激因素刺激對大鼠行為學改變的影響，對CFS動物模型的制作提供實驗依據(jù)。方法：運用情志刺激與過度勞累相結合的復合應激因素，觀察大鼠在接受刺激后懸掛不動和力竭游泳時間的變化。結果：造模后大鼠懸掛不動時間明顯增加、力竭游泳時間明顯減少。結論：復合應激因素刺激使大鼠體力明顯下降，產(chǎn)生了類似CFS的臨床癥狀。

關鍵詞：復合應激;大鼠;行為學能力

慢性疲勞綜合征（Chronic fatigue syndrome，CFS）是人群亞健康的主要表現(xiàn)形式之一，于1988年由美國疾病控制與預防中心正式確定病名及診斷標準。隨著社會高速發(fā)展，在快節(jié)奏生活、高壓力工作環(huán)境中，以慢性疲勞為主訴的患者日益增多，CFS已成為當今威脅人類健康的重大問題，成為國內外醫(yī)者關注和研究的熱點。動物實驗作為研究CFS的重要途徑，模型制備成功與否對研究有重大影響。本研究應用情志刺激與過度勞累相結合的復合應激刺激，制作慢性疲勞大鼠模型，并觀察大鼠行為學的改變，為CFS的動物實驗研究提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

健康清潔級（Ⅱ）雄性Wistar大鼠20只，體重（160±10）g。標準飼料喂養(yǎng)，室溫15～25℃，相對濕度45%～60%，自由攝食、飲水。

1.2 實驗器材

硬塑料束縛筒：管狀，長20cm，筒口外徑6cm，內徑5.3cm，筒內前端置一直徑略小于筒的內徑、并可以前后調節(jié)的無底、圓嘴玻璃瓶，其瓶口為通氣口（距離筒口5cm左右），后端為可開關閘門。

游泳箱：規(guī)格為185cm×58cm×70cm。

秒表，溫度計。

2 實驗方法

2.1 分組方法

20只大鼠適應性飼養(yǎng)一周后，隨機分為正常組和模型組，每組10只。

2.2 造模方法

采用慢性束縛加強制冷水游泳的復合應激因素刺激制作模型。規(guī)定單號日期進行束縛，雙號日期進行冷水游泳，造模時間為4周。在造模的整個過程中，正常組大鼠處于同一環(huán)境中，但不予以進食和飲水。

（1）慢性束縛：造模期間，模型組隔日束縛一次，每天束縛時間不同，隨機確定。束縛時，使大鼠鉆進束縛筒內，并調節(jié)到不產(chǎn)生強烈反抗的緊張程度，限制其活動，1h后取出放回籠中。

（2）強制冷水游泳：隔日令模型組大鼠在不同時間于冷水（水中置溫度計，視水溫變化調節(jié)放入冰塊的數(shù)量，使水溫維持在12℃左右）中游泳，期間防止大鼠團抱自救或因力竭沉人水中。每次一組，游泳持續(xù)7分鐘，然后將動物撈出，用布擦拭、吹風機吹干皮毛后放回籠中。

2.3 指標測定

（1）一般情況觀察

造模期間，每天觀察大鼠的飲水量、進食量、體重、糞便、鼠毛色澤、爬行動作及對外界刺激敏感度等情況。

（2）鼠尾懸掛實驗

本實驗在造模結束后第2天進行。使大鼠呈倒掛狀，大鼠為克服不正常的體位而掙扎活動，但活動一定時間后，出現(xiàn)間斷性“不動”，顯示“失望”狀態(tài)。觀察5min內的不動時間（大鼠處于完全靜止不動狀態(tài)的總時間）。

（3）力竭游泳實驗

本實驗在造模結束后第2天進行。游泳時水深為5Ocm，水溫為室溫。將事先標記好的大鼠同時置入游泳池，記錄大鼠從入水到游泳至力竭（頭部沉入水中10秒中不能浮出水面為力竭標準）的時間。

3 統(tǒng)計學分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，各組數(shù)據(jù)均以“均數(shù)±標準差（）”的形式表示，采用單因素方差分析法進行組間比較。

4 實驗結果

4.1 一般情況觀察

造模前，各組大鼠的飲水量、進食量、體重、大鼠糞便、皮毛色澤、瞇眼等均無明顯差異。隨著造模時間的推移，正常組大鼠神態(tài)安靜，時而活潑好動，皮毛光潔整齊，眼睛有神，體重正常增長;模型組大鼠飲水量、進食量略有減少，體型瘦弱，體重增加不明顯，精神倦怠，皮毛失去光澤、稀疏，眼神黯淡無光，活動減少，瞇眼明顯，糞便稀，愛扎堆，反應力降低。

4.2 鼠尾懸掛實驗時間測定

結果顯示：模型組大鼠懸尾后不動時間明顯長于正常組，具有顯著差異（P<0.05），表明復合應激因素刺激導致大鼠體力明顯下降，有“抑郁”情緒傾向，具有軀體和心理疲勞。

4.3 力竭游泳實驗測定

結果顯示，模型組大鼠游泳至力竭的時間低于正常組，具有極顯著差異，表明復合應激因素刺激導致大鼠體力明顯下降，力竭游泳時間明顯減少，具有軀體疲勞。

5 討論

本研究通過慢性束縛和冷水游泳相結合的方法建立CFS模型，模仿人類因長期心理應激和軀體應激而誘發(fā)產(chǎn)生的煩躁、絕望以及免疫功能低下等CFS癥狀。在實驗中，大鼠在束縛筒中所產(chǎn)生的煩躁、絕望等狀態(tài)與人類抑郁、心理壓力增大等精神狀態(tài)很相似。同時，根據(jù)大鼠游泳喜歡溫水的習慣，選擇冷水游泳，既是對大鼠體力的巨大消耗，也對大鼠精神狀態(tài)造成一定壓力。造模結束后，模型組大鼠身體消瘦，體重增加不明顯，反映雙重刺激引起大鼠產(chǎn)生CFS的相應癥狀，導致大鼠體力和精神狀態(tài)下降。我們還選擇了比較經(jīng)典的鼠尾懸掛實驗和力竭游泳實驗評價其行為學能力。通過測定發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠懸掛不動時間明顯增加、力竭游泳時間明顯減少，說明復合應激因素刺激使大鼠體力明顯下降，其表現(xiàn)出的與人類CFS類似的“抑郁”、“失望”情緒明顯增加。

綜上所述，本研究中的慢性復合刺激所引起的體力和精神損害與臨床的CFS癥狀相似，故認為本模型是可行的。

參考文獻：

[1] Holmes GP，，Kaplan JE，，Gantz NM，et al.Chronic fatigue syndrome：a working case definition[J].Ann Intern Med，1988（10）.

[2] 王天芳，劉雁峰，楊維益，等.消疲怡神口服液治療慢性疲勞綜合征的臨床研究[J].北京中醫(yī)藥大學學報，1999（04）.