楊 芹，朱鳳姝，邵長(zhǎng)冰，李祥群

（江蘇豪森藥業(yè)集團(tuán)有限公司，江蘇連云港 222000）

鹽酸二甲雙胍是目前主要用于治療單純飲食療法控制血糖效果不佳的2型糖尿病，在臨床應(yīng)用時(shí)具有較為滿意的治療效果[1]。二甲胺作為鹽酸二甲雙胍藥物的主要原料之一[2]，其對(duì)于機(jī)體具有較強(qiáng)烈的刺激作用，如長(zhǎng)期接觸二甲胺極易導(dǎo)致眼角膜損傷、皮膚壞死等情況，因此在鹽酸二甲雙胍的生產(chǎn)過程中，應(yīng)嚴(yán)格控制二甲胺的殘留量，以免增加藥物的不良反應(yīng)[3]。雖然目前可用于二甲胺檢測(cè)的方法較多，但其中氣相色譜法對(duì)色譜柱有著較大的損傷，因此應(yīng)用受限。而液相色譜法由于需先行住前衍生，且各項(xiàng)操作較為復(fù)雜，使其應(yīng)用也受到一定限制。而離子色譜法以其較高的靈敏度、優(yōu)異的重復(fù)性和操作便捷等優(yōu)勢(shì)，被廣泛用于多個(gè)領(lǐng)域[4]。本文將通過對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行整理，總結(jié)離子色譜法在用于二甲胺殘留檢測(cè)時(shí)的應(yīng)用效果。

1 材料與方法

1.1 儀器

主要設(shè)備及儀器見表1。

表1 設(shè)備儀器

1.2 試劑

研究所用試劑見表2。

表2 研究試劑

1.3 方法

1.3.1 配制對(duì)照品溶液

精準(zhǔn)稱取二甲胺鹽酸鹽16.56mg，將其裝入10mL量瓶?jī)?nèi)，加入少許制備好的超純水，使其溶解并定容。按照1∶1000的比例配制二甲胺鹽酸鹽溶液，并放置在4℃冰箱內(nèi)冷藏備用。在實(shí)驗(yàn)需要時(shí)將其加入適量超純水配制成研究所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為對(duì)照品溶液使用。

1.3.2 配置供試品溶液

精準(zhǔn)稱取10mg的鹽酸二甲雙胍置入到10ml玻璃量瓶中，向其內(nèi)加入適量的超純水震蕩使鹽酸二甲雙胍藥物充分溶解，然后定容。再按照每1ml溶液中含有4μg二甲胺鹽酸鹽和1mg鹽酸二甲雙胍的比例配置溶液，用作系統(tǒng)適用性溶液備用。所有配置好的溶液均采用0.22μm水系濾膜過濾后進(jìn)行色譜分析。

1.3.3 色譜條件

研究采用戴安lonpac CS12A（4mm*250mm）陽(yáng)離子交換柱作為色譜柱，以甲磺酸溶液作為流動(dòng)相，其濃度為20mmol/L-1，柱溫設(shè)定為30℃，流速為1.0mL/min。采用抑制電導(dǎo)法見檢測(cè)，抑制電流控制為60mA，電動(dòng)池溫度設(shè)定為35℃，進(jìn)樣時(shí)的體積為25μL。

2 結(jié)果

2.1 色譜條件優(yōu)化

研究可見，二甲胺相對(duì)密度為0.680，易溶于水。本次研究采用不同的流速和不同濃度的淋洗液作為色譜條件，分別考察了二甲胺峰以及其他離子峰的分離度，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，以1.0mg/min作為流速，以20mmol/L作為甲磺酸淋洗液濃度時(shí)，物質(zhì)的分離度最好，因此本次研究以該條件作為色譜條件。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

將制備好的系統(tǒng)適用性溶液、對(duì)照品溶液以及空白水，分別按照設(shè)計(jì)好的色譜方法注入到離子色譜儀內(nèi)，觀察色譜圖，結(jié)果可見，二甲胺峰型較好，約在5.5min時(shí)出峰。

2.3 定量限以及檢測(cè)限

精準(zhǔn)稱取適量二甲胺鹽酸鹽置入量瓶?jī)?nèi)，加入適量超純水后溶解定容，對(duì)其檢測(cè)限和定量限進(jìn)行分析，定量限和檢測(cè)限的分別為0.032 8μg/ml和0.120μg/ml。

2.4 線性關(guān)系

分 別 配 制0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.50μg/ml、1.0μg/ml以及5.0μg/ml和10.0μg/ml濃度的二甲胺對(duì)照品溶液，將不同濃度的對(duì)照品溶液注入到離子色譜儀內(nèi)。根據(jù)峰值面積計(jì)算出濃度曲線，線性回歸方程為Y=0.825X-0.036 1，r=0.9994。結(jié)果顯示，當(dāng)二甲胺鹽酸鹽的濃度在0.1～10.0μg/mL時(shí)，線性關(guān)系良好。

2.5 回收率試驗(yàn)

在不含有二甲胺的鹽酸二甲雙胍空白品內(nèi)加入不同限定濃度的二甲雙胍對(duì)照品溶液開展回收率測(cè)定實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明其具有著良好的回收率，平均回收率在97.7%-99.5%，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)

3 討論

離子色譜-直接導(dǎo)電法是一種常用的檢測(cè)手段，其通過液相色譜法來(lái)檢測(cè)被檢測(cè)物中的陰陽(yáng)離子，進(jìn)而達(dá)到快速、準(zhǔn)確檢測(cè)的目的，且操作較為簡(jiǎn)便，使其應(yīng)用范圍較廣。本次研究為了能夠有效降低鹽酸二甲雙胍藥品中二甲胺的含量，進(jìn)而對(duì)離子色譜-直接導(dǎo)電法在二甲胺殘留檢測(cè)時(shí)的應(yīng)用情況進(jìn)行分析，并對(duì)該方案的線性、定量限、回收率以及重復(fù)性等問題進(jìn)行深入研究，通過研究結(jié)果可以看出，該方案在用于二甲胺殘留檢測(cè)時(shí)，具有較好分離度和靈敏度，且回收率、重復(fù)性以及定量等條件均可以滿足臨床檢測(cè)需求，故而是一種高效的鹽酸二甲雙胍藥物中二甲胺殘留檢測(cè)方案，適宜用于臨床分析和實(shí)驗(yàn)研究，也為鹽酸二甲雙胍合成反應(yīng)提供了有效的參考研究。

4 結(jié)論

鹽酸二甲雙胍藥物中二甲胺殘留量超標(biāo)將嚴(yán)重影響藥品質(zhì)量，利用離子色譜-直接導(dǎo)電法能夠有效、快速地檢測(cè)出其中二甲胺殘留情況，可良好地滿足實(shí)驗(yàn)和臨床需求。