許亦峰 王和壽 蔡振輝

摘 要：為建立草莓中5種農(nóng)藥殘留QuEChERS氣相色譜檢測(cè)方法。用乙腈對(duì)草莓中的農(nóng)藥進(jìn)行提取，選取適量的乙二胺N丙基硅烷（PSA）、無水硫酸鎂、石墨炭黑（GCB）進(jìn)行分散固相萃取，凈化液過濾膜后上GCECD檢測(cè)，利用SPSS statistics version 19軟件進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及方差分析。結(jié)果表明：最優(yōu)的凈化組合為A3B3C2，即乙二胺N丙基硅烷（PSA）125 mg、石墨炭黑（GCB）50 mg、無水硫酸鎂250 mg，腐霉利、咪鮮胺、百菌清、毒死蜱、氟氯氰菊酯回收率分別為96.5%、94.8%、97.6%、99.1%、97.9%。通過優(yōu)化QuECHERS氣相色譜測(cè)定的凈化劑組合，該檢測(cè)方法適用于草莓中腐霉利等5種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：草莓;農(nóng)藥殘留;QuEChERS;正交試驗(yàn);氣相色譜

Abstract： In order to establish a method for the determination of 5 kinds of pesticide residues in strawberries by QuEChERSgas chromatography， the acetonitrile was used to extract the pesticide from strawberries， and the appropriate amount of ethylenediaminenpropylsilane （PSA）， anhydrous magnesium sulfate， and graphitized carbon black （GCB） were selected for the dispersive solidphase extraction. GCECD detection was conducted on the filtering membrane of the purification solution. The orthogonal test design and variance analysis were conducted by using the software of SPSS statistics version 19. The results showed that the optimal purification combination was A3B3C2， that was， ethylaminenpropylsilane （PSA） 125 mg， graphite carbon black （GCB） 50 mg， and anhydrous magnesium sulfate 250 mg， and the recoveries of procymidone， prochloraz， chlorothalonil， chlorpyrifos and cyfluthrin were 96.5%， 94.8%， 97.6%， 99.1% and 97.9%， respectively. The method was suitable for the detection of 5 kinds of pesticide residues such as procymidone in strawberries by optimizing the combination of purification agent measured by QuEChERSgas chromatography.

Key words： Strawberry; Pesticide residues; QuEChERS; Orthogonal test; Gas chromatography

草莓營養(yǎng)價(jià)值非常豐富，被譽(yù)為“水果皇后”，含有豐富的維生素C、維生素E、維生素PP、維生素B2、胡蘿卜素、天冬氨酸、草莓胺、果膠、葉酸、鈣、鞣花酸與花青素等營養(yǎng)物質(zhì)，維生素C是蘋果的11.7倍、葡萄的10倍、柑橘的2～3倍[1]，蘋果酸、檸檬酸、維生素B1、胡蘿卜素以及磷含量也比蘋果高3～4倍[2]。

草莓是寧德地區(qū)比較有代表性的農(nóng)產(chǎn)品之一，但是在日常監(jiān)測(cè)中發(fā)現(xiàn)草莓農(nóng)殘經(jīng)常超標(biāo)，例如腐霉利、咪鮮胺、百菌清、毒死蜱、氟氯氰菊酯等農(nóng)藥是草莓種植過程中常用的農(nóng)藥。QuEChERS方法是一種簡(jiǎn)便、快捷、經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)方法，已廣泛應(yīng)用于農(nóng)殘檢測(cè)工作中[3]。為進(jìn)一步提高QuEChERS方法的準(zhǔn)確度和可靠性，本試驗(yàn)利用正交試驗(yàn)對(duì)QuEChERS檢測(cè)方法中凈化劑的組合進(jìn)行優(yōu)化，并確定各因素對(duì)回收率的顯著性水平，最終得出草莓最佳凈化劑組合，從而提高農(nóng)產(chǎn)品日常監(jiān)管的精確度。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

1.1.1 儀器 島津GC2010plus（日本島津）;氮吹儀NEVAP 111（美國Organomation）;PL602E百分之一分析天平（德國梅特勒）;KQ500E數(shù)據(jù)超聲波清洗器（昆山舒美）;MILLIPORE DirectQ 5超純水機(jī)（法國默克）、VortexGenie 2渦旋振蕩器（美國SI）。

1.1.2 試劑 農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)樣品：腐霉利、咪鮮胺、百菌清、毒死蜱、氟氯氰菊酯純度均≥95%，濃度均為100 μg·mg-1，均購自于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：將上述5種農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)樣品用正己烷稀釋，并配制成約10 ug·mL-1的中間儲(chǔ)存液，用時(shí)再用正己烷稀釋到需要的工作濃度。

乙腈（色譜純）、氯化鈉（AR級(jí)）、無水硫酸鎂（AR級(jí)）、乙二胺N丙基硅烷（PSA）、石墨炭黑（GCB），均購置于上海安譜科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在QuEChERS農(nóng)殘檢測(cè)方法中，常用于凈化的材料主要有PSA、無水硫酸鎂、GCB（石墨炭黑）以及C18[4]。其中PSA的作用是能夠?qū)⑻崛∫褐性S多極性基質(zhì)的成分進(jìn)行吸附，例如糖類、脂肪酸、有機(jī)酸和極性親脂性色素等，無水硫酸鎂的作用是除去提取液中多余的水分，GCB（石墨炭黑）則能夠?qū)⑻崛∫褐械暮}卜素、葉綠素等色素類雜志去除，C18可以將提取液中非極性物質(zhì)吸附[5]。由于本試驗(yàn)材料為草莓，非極性物質(zhì)極少，不作為本次試驗(yàn)因素。

在不考慮各因素的交互作用情況下，選定PSA、GCB、無水硫酸鎂作為A、B、C 3個(gè)因素，對(duì)每個(gè)因素取不同的4個(gè)水平（表1），以農(nóng)殘的加標(biāo)回收率作為考察指標(biāo)，選用L16（43）正交表選擇最優(yōu)的凈化組合。

1.2.2 樣品前處理 稱取5 g草莓陰性樣品于50 mL離心管中，根據(jù)草莓樣品量按照0.1 mg·kg-1加標(biāo)量加入農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品，然后加入20 mL乙腈，充分漩渦振蕩，置于30℃水中超聲30 min，加入5 g氯化鈉，充分渦旋振蕩，于4000 r·min-1下離心3 min;取5 mL上清液加入至預(yù)先裝有所選凈化劑的離心管中，渦旋振蕩1 min，于4000 r·min-1下離心3 min;取1 mL上清液過膜，上機(jī)測(cè)定。

1.3 檢測(cè)條件

色譜柱：SHRtx5 （30 m×0.25 mm×0.25 μm）;進(jìn)樣口溫度280℃;檢測(cè)器溫度300℃;載氣量1 mL·min-1;進(jìn)樣量1 μL;進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比10∶1;升溫程序：初始溫度80℃保持2 min，以20℃·min-1升至200℃，保持3 min，再以3℃·min-1升至250℃，保持4 min，以20℃·min-1升至280℃，保持3 min。

1.4 數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用SPSS statistics version 19軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)條件優(yōu)化

結(jié)合5種農(nóng)藥在氣相色譜儀中的分離效果，不斷對(duì)檢測(cè)器溫度、進(jìn)樣口溫度、載氣流速以及柱溫箱升溫程序進(jìn)行優(yōu)化。最終選用SHRtx5 （30 m×0.25 mm×0.25 μm）石英毛細(xì)管柱，利用1.3中的檢測(cè)條件，5種農(nóng)藥能夠得到較好的分離效果，色譜圖見圖1。

2.2 利用正交試驗(yàn)選擇最佳凈化組合

凈化組合正交試驗(yàn)結(jié)果見表2，每個(gè)試驗(yàn)組重復(fù)3次。

表3方差分析結(jié)果表明：因素A（PSA）P=0.004<0.05，因素B（GCB）P=0.033<0.05，兩個(gè)因素差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明因素A和B對(duì)腐霉利回收試驗(yàn)結(jié)果作用顯著。而因素C（無水硫酸鎂）P=0.781>0.05，說明因素C對(duì)于該試驗(yàn)結(jié)果作用不顯著。

從表4分析得到因素A（PSA）在水平3（125 mg）時(shí)腐霉利的回收率最高，為87.5%。而且其與水平1（75 mg）、水平2（100 mg）、水平4（150 mg）的P值分別為0.001、0.019、0.016，均小于0.05，差異顯著，所以因素A（PSA）選擇水平3。因素B（GCB）在水平3（添加量為50 mg）時(shí)回收率最高，為82.7%。多重比較分析可以發(fā)現(xiàn)，因素B（GCB）在水平3時(shí)，與添加水平1（30 mg）、4（60 mg）的P值分別為0.016、0.027，都小于0.05，具有顯著差異。與添加水平2（40 mg）的P值為0.071 9，大于0.05，不具有顯著性差異。但是本次試驗(yàn)最優(yōu)組合的選擇取決于試驗(yàn)結(jié)果的取值方向，即回收率越高越好，所以因素B選擇水平3。因素C（無水硫酸鎂）對(duì)于試驗(yàn)結(jié)果作用不顯著，且各水平之間差異不顯著。根據(jù)最優(yōu)組合的選擇取決于試驗(yàn)結(jié)果的取值方向原則，從表6可以看出在水平2（250 mg）時(shí)，腐霉利回收率最高，為78.9%，所以因素C（無水硫酸鎂）選擇水平2（250 mg）。綜合上述分析可得，腐霉利最優(yōu)的凈化組合為A3B3C2，即PSA為125 mg、GCB為50 mg、無水硫酸鎂250 mg。

以同樣的統(tǒng)計(jì)分析方法分析得到其他農(nóng)藥最優(yōu)的凈化組合均為A3B3C2，即為L16（43）正交試驗(yàn)表中第14種組合，腐霉利、咪鮮胺、百菌清、毒死蜱、氟氯氰菊酯回收率分別為96.5%、94.8%、97.6%、99.1%、97.9%。

2.3 方法的適用性

取草莓陰性樣品，往樣品中分別加入0.01、0.05、0.1 mg·kg-1的農(nóng)藥，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)。樣品按照1.2.2方法進(jìn)行處理，凈化劑組合為PSA為125 mg、GCB為50 mg、無水硫酸鎂250 mg，每個(gè)水平平行測(cè)定6次。5種農(nóng)藥的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果見表5。

從表5可以看出，3個(gè)濃度的加標(biāo)回收率均在80%～100%，RSD<15%，符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[6]。

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙二胺N丙基硅烷（PSA）添加量在75～125 mg，回收率隨著PSA的增加而增加，而當(dāng)添加量達(dá)150 mg時(shí)，農(nóng)殘的回收率有不同層次的降低，這說明當(dāng)PSA過量添加時(shí)，除了吸附雜質(zhì)外同時(shí)也會(huì)吸附目標(biāo)農(nóng)殘，降低回收率[7-8];石墨炭黑（GCB）添加量超過50 mg后，不同農(nóng)殘回收率出現(xiàn)不同層次的降低，這是因?yàn)镚CB對(duì)具有平面結(jié)構(gòu)的非極性化合物有將強(qiáng)的吸附能力[9];無水硫酸鎂對(duì)于回收率沒有顯著的影響，但是如果待測(cè)液的水分沒有充分進(jìn)行脫水，會(huì)使得ECD檢測(cè)器的信號(hào)迅速達(dá)到飽和，直接影響檢測(cè)器的靈敏度，而且還對(duì)色譜柱中的固定相造成損傷[10-11]。

QuEChERS方法是一種簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、可靠的檢測(cè)方法，可以加快實(shí)際的農(nóng)殘檢測(cè)工作進(jìn)度[12]。近年來，研究人員對(duì)該方法不斷進(jìn)行優(yōu)化，也做了大量的研究。王連珠等[13]在考察乙腈和乙酸乙腈兩種體系下，吸附劑對(duì)農(nóng)殘的吸附情況時(shí)發(fā)現(xiàn)，在加入250 mg PSA? 12 h后，以乙腈為介質(zhì)的體系中甲胺磷、氧樂果、內(nèi)吸磷砜、甲基毒死蜱、殺蟲畏、丙溴磷較乙酸乙腈下降了50%，從而得出用乙腈體系進(jìn)行前處理時(shí)，樣品凈化后需及時(shí)與吸附劑分離，否則一定時(shí)間內(nèi)部分目標(biāo)農(nóng)殘將被PSA所吸附;Lehotay等[14]采用QuEChERS方法對(duì)萵苣中229種農(nóng)殘進(jìn)行回收，凈化體系為PSA 300 mg、無水硫酸鎂1.8 g，待測(cè)液經(jīng)GC/LCMS檢測(cè)，結(jié)果表明206種農(nóng)殘回收率在90%～110%，而磺草靈、噠草快、三氯殺螨醇、福美雙、百菌清回收率小于50%，表明PSA對(duì)于這些農(nóng)殘的吸附能力較強(qiáng);Nguyen等[15]運(yùn)用QuEChERS方法對(duì)大米中109中農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，以0.5%乙酸乙腈進(jìn)行提取，加入50 mg PSA 、20 mg GCB 、300 mg無水硫酸鎂，待測(cè)液經(jīng)GC/MS檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)QuEChERS方法較于傳統(tǒng)方法，提高了對(duì)于熱不穩(wěn)定農(nóng)殘的回收率，所有農(nóng)殘的加標(biāo)回收均在80%～115%。

本試驗(yàn)利用正交試驗(yàn)優(yōu)化QuEChERS方法中的凈化劑組合，最終選出最佳的凈化劑組合A3B3C2，即乙二胺N丙基硅烷（PSA）125 mg、石墨炭黑（GCB）50 mg、無水硫酸鎂250 mg，腐霉利、咪鮮胺、百菌清、毒死蜱、氟氯氰菊酯回收率分別為96.5%、94.8%、97.6%、99.1%、97.9%。在3個(gè)水平的加標(biāo)試驗(yàn)中，各農(nóng)殘的回收率均在80%～100%，RSD小于15%，符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，表明該方法適用于草莓中腐霉利、咪鮮胺、百菌清、毒死蜱、氟氯氰菊酯5種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。本試驗(yàn)選擇的樣品及農(nóng)藥種類較少，在今后的研究中，將不斷擴(kuò)大研究的樣品及農(nóng)藥種類，繼續(xù)對(duì)QuEChERS方法進(jìn)行調(diào)整優(yōu)化，不斷提高檢測(cè)工作的效率和準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)：

[1]萬清林，趙書清.草莓果實(shí)營養(yǎng)成分的分析[J].北方園藝，1990（6）：34-35.

[2]羅學(xué)兵， 賀良明. 草莓的營養(yǎng)價(jià)值與保健功能[J].中國食物與營養(yǎng)， 2011（4）：76-78.

[3]楊洋，田黎.QuEChERS法在果蔬食品農(nóng)殘檢測(cè)中的優(yōu)化改進(jìn)研究[J].商丘師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2015（3）：72-75.

[4]LEHOTAY S J， SON K A， KWON H， et al.Comparison of QuEChERS sample preparation methods for the analysis of pesticide residues in fruits and vegetables[J].Journal of Chromatography A， 2010， 1217（16）：2548-2560.

[5]劉滿滿，康澍，姚成.QuEChERS方法在農(nóng)藥多殘留檢測(cè)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2013，15（1）：8-22.

[6]中國人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 27404-2008 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[7]王正瑋，黎其萬，梅文泉，等.新型農(nóng)藥殘留凈化材料的篩選研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，46（35）：165-168.

[8]張婷亭，王靜靜，鞏志國，等.分散固相萃取超高效液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜法測(cè)定干果果肉中56種農(nóng)藥殘留[J].分析試驗(yàn)室，2016，35（3）：287-292.

[9]張媛媛，張卓，陳忠正，等.QuEChERS方法在茶葉農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2014，5（9）：2711-2716.

[10]黃誠，郭梅，張懷宇，等.茶葉中8種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留QuEChERS氣相色譜檢測(cè)法[J].職業(yè)與健康，2012，28（1）：43-45.

[11]黃誠，郭梅.正交試驗(yàn)法優(yōu)選黃瓜中擬除蟲菊酯類農(nóng)殘檢測(cè)的凈化劑組合[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2012，24（5）：438-440.

[12]任婷婷.QuEChERS方法在食品中多組分農(nóng)殘檢測(cè)中的研究[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù)，2017，37（12）：34.

[13]王連珠，周昱，黃小燕，等.基于QuEChERS提取方法優(yōu)化的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜中51種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].色譜，2013，31（12）：1167-1175.

[14]LEHOTAY J，DE KOK ANDR，HIEMSTRA MAURICE，et al.Validation of a fast and easy method for the determination of residues from 229 pesticides in fruits and vegetables using gas and liquid chromatography and mass spectrometric detection[J].Journal of AOAC International，2005，88（2）：595-614.

[15]NGUYEN T D，LEE B S，LEE B R，et al.A multiresidue method for the determination of 109 pesticides in rice using the Quick Easy Cheap Effective Rugged and Safe （QuEChERS） sample preparation method and gas chromatography/mass spectrometry with temperature control and vacuum concentration[J].Rapid Communications in Mass Spectrometry，2007，21（18）：3115-3122.

（責(zé)任編輯：柯文輝）