王婷 肖慧琳 唐美玲 盧建聲 劉萬好 鄭秋玲 劉珅坤 張超杰* 譚洋洋

(1山東省煙臺市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，煙臺 265500；2蓬萊國賓葡萄酒莊有限公司，蓬萊 265600）

‘黑虎香’葡萄別名紫殼園、藥香，歐美雜種，漿果著生緊，粒小，具草莓香味。植株生長勢強，萌芽率高，抗病性與適應(yīng)性均強，鮮食、制汁兩用品種[1]。目前，國內(nèi)外對于葡萄再生體系建立工作已取得了較大的進(jìn)展，許多鮮食葡萄品種、砧木都已獲得組培苗[2-5]，并且許多研究以組培苗為試驗材料進(jìn)行植物生理、生化方面的研究[2-3]。本試驗通過探索啟動培養(yǎng)、生根培養(yǎng)環(huán)節(jié)的關(guān)鍵技術(shù)，初步建立‘黑虎香’葡萄離體快繁體系，使其種質(zhì)資源得到保存與繁殖。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料采集自山東省煙臺市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院葡萄資源圃。

1.2 試驗方法

5月份采集溫室內(nèi)萌發(fā)的‘黑虎香’新梢，帶回試驗室消毒。剪取單芽莖段，置于75%的酒精中消毒15 s，然后用0.1%的HgCl2（升汞）消毒 8 min、10 min、12 min，用無菌水沖洗干凈，接種到9種啟動培養(yǎng)基上（WPM、GS和MS三種基本培養(yǎng)基，分別添加 2.0 mg/L、1.0 mg/L、0.5 mg/L的6-BA，同時添加0.2 mg/L的IBA），20 d后統(tǒng)計不定芽形成率和不定芽生長情況，從中篩選出適宜的啟動培養(yǎng)基。待初代苗生長至高2 cm以上時，將不定芽移至3種生根培養(yǎng)基中。3 種培養(yǎng)基配方為，T1:1/2MS+IBA（0.2mg/L）；T2:1/2MS+IBA（0.2 mg/L）+KT(0.5 mg/L)；T3:1/2MS+IBA（0.2 mg/L）+KT(1.0 mg/L)。 45 d 后統(tǒng)計調(diào)查組培苗的苗高、增殖倍數(shù)和生根情況，從中篩選出適宜增殖生根的培養(yǎng)基配方。

2 結(jié)果與分析

2.3 不同培養(yǎng)基與激素配比對‘黑虎香’葡萄芽誘導(dǎo)的影響

表1 不同配方的啟動培養(yǎng)基對‘黑虎香’葡萄不定芽再生的影響

5 6 GS GS 1 2 14 20 12 18 75.0 87.5葉色淡綠，生長勢弱。葉色淡綠，生長勢弱。7 MS 0.5 18 14 77.8 長勢不整齊，部分芽隨生長逐漸褐化、死亡。8 MS 1 15 9 60.0 生長健壯，多數(shù)芽生長后期褐化、死亡。9 MS 2 10 4 45.0 隨著生長，許多芽褐化、死亡，存活的芽生長勢強。

由表1可知，WPM基本培養(yǎng)基的不定芽萌芽率最高，都在90%以上。其次是GS培養(yǎng)基，萌芽率為72.2%～87.5%，MS培養(yǎng)基總體上不定芽形成率最低，為45%～77.8%。多數(shù)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)的不定芽生長勢弱，葉色淡綠，且隨生長不定芽褐化嚴(yán)重，只有1、8、9培養(yǎng)基上的不定芽生長旺盛，而8和9培養(yǎng)基上的不定芽生長后期出現(xiàn)褐化并逐漸死亡。綜合比較，配方1，即WPM+6-BA(0.5 mg/L)+IBA（0.2 mg/L）為‘黑虎香’最適宜的啟動培養(yǎng)基。

表2 不同濃度激素配比培養(yǎng)基對‘黑虎香’增殖與根系生長的影響

由表2可知，3種培養(yǎng)基都能使‘黑虎香’莖段增殖生根。T1和T3培養(yǎng)基中的根系萌發(fā)較晚，且根系萌發(fā)過程中產(chǎn)生大塊的愈傷組織。T2培養(yǎng)基中的根系萌發(fā)早，且無大塊愈傷組織形成，根系生長快速，須根多，根系發(fā)達(dá)。3種培養(yǎng)基中T1的增殖倍數(shù)最低，T2增殖倍數(shù)最高（為2.44），且T2培養(yǎng)基中的組培苗45 d后平均苗高3.38 cm。因此，T2：1/2MS+IBA（0.2 mg/L）+KT(0.5 mg/L）為最適宜‘黑虎香’增殖生根的培養(yǎng)基配方。

3 結(jié)論

培養(yǎng)基與激素種類、濃度共同影響著不定芽的再生，對某一特定的基因型來說，不定芽的再生依賴于細(xì)胞分裂素和生長素的種類及比值[4]。植物生長調(diào)節(jié)劑對不同植物的敏感性不同，因此植物生長調(diào)節(jié)劑的選擇應(yīng)因植物基因型而異[5-6]。通過試驗確定了‘黑虎香’葡萄的最適啟動培養(yǎng)基為WPM+6-BA(0.5mg/L)+IBA（0.2 mg/L），增殖生根的最適宜培養(yǎng)基：1/2MS+IBA(0.2 mg/L)+KT(0.5 mg/L)。