張雨晴 劉 野 曲春浦 劉關(guān)君 楊天天 楊成君*

(1.東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，哈爾濱 150040； 2.東北林業(yè)大學(xué)林木遺傳育種國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱 150040； 3.東北林業(yè)大學(xué)野生動(dòng)物與自然保護(hù)地學(xué)院，哈爾濱 150040)

在植物生長和發(fā)育的過程中，植物響應(yīng)各種環(huán)境、組織和發(fā)育信號，這就需要精準(zhǔn)調(diào)節(jié)的各種功能基因的表達(dá)。轉(zhuǎn)錄因子—反式作用因子是DNA結(jié)合蛋白。典型的轉(zhuǎn)錄因子由DNA結(jié)合區(qū)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)(包括激活區(qū)或抑制區(qū))、寡聚化位點(diǎn)和核定位信號區(qū)組成。轉(zhuǎn)錄調(diào)控農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，植物轉(zhuǎn)錄因子的典型DNA結(jié)合區(qū)有bZIP結(jié)構(gòu)域[1]、鋅指結(jié)構(gòu)域[2]、MADS結(jié)構(gòu)域[3]、MYC結(jié)構(gòu)域[4]、MYB結(jié)構(gòu)域[5]、Homeo結(jié)構(gòu)域以及AP2/EREBP結(jié)構(gòu)域[6]等。

轉(zhuǎn)錄因子已被證明是響應(yīng)脅迫應(yīng)答基因表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，如DREB、WRKY、NAC、bZIP和Dof。其中Dof蛋白是大型植物特異性轉(zhuǎn)錄因子家族[7]。目前已知Dof轉(zhuǎn)錄因子大多數(shù)是家族基因形式，例如擬南芥基因組中有37個(gè)Dof基因[8]，水稻基因組中有30個(gè)[9]，大麥中有26個(gè)[10]，大豆中有28個(gè)[11]，毛果楊中有44個(gè)[12]等。Dof轉(zhuǎn)錄因子家族成員的功能多樣，Corrales等在擬南芥中鑒定出一組Dof基因CDFs，在非生物脅迫響應(yīng)中具有重要作用[13]。并且當(dāng)植物受到鹽脅迫時(shí)，一些差異基因的表達(dá)會受到特定轉(zhuǎn)錄因子(如Dof)的調(diào)控，改變這些轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)可以增加植物耐鹽性[14]。其中Dof1也參與多種生物過程，如葉片特異性基因表達(dá)[15]、丙酮酸激酶(PK)和磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC)活性[16]、光敏色素和細(xì)胞色素信號傳導(dǎo)[17]、激素反應(yīng)[18]、種子成熟和萌發(fā)[19]、氣孔二氧化碳(CO2)吸收[20]、光周期開花[21]、硫代葡萄糖苷的生物合成[22]和光合作用和銨同化的效率[23]。此外，Dof基因參與其他轉(zhuǎn)錄因子如bZIP、MYB和WRKY的相互作用，表明它們參與植物生理過程的調(diào)控。

在植物生長過程中，會受到各種非生物脅迫，包括高鹽、干旱、低溫等，他們自身的生長和活力將受到嚴(yán)重威脅。當(dāng)植物受到這些條件脅迫時(shí)，將會激活調(diào)控途徑以響應(yīng)植物體內(nèi)該脅迫，使植物能抵抗該脅迫從而生存下去。為了探究小黑楊中的Dof30基因在脅迫條件下是如何響應(yīng)不同脅迫信號的。本研究以轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥和野生型WT擬南芥為材料，對其種子和幼苗進(jìn)行了干旱，鹽和滲透脅迫的處理，并將兩種材料的生長生理指標(biāo)的變化和脅迫后的擬南芥中PnDof30的相對表達(dá)量進(jìn)行比較，研究表明Dof轉(zhuǎn)錄因子家族參與植物發(fā)育的多種生理途徑，并為Dof在非生物脅迫耐受性方面提供重要理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

擬南芥生態(tài)型Col0來源于東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院森林植物資源學(xué)種質(zhì)資源保存庫。轉(zhuǎn)基因PnDof30(MK789595)擬南芥表達(dá)株系L2由東北林業(yè)大學(xué)林木遺傳育種國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室克隆小黑楊PnDof30基因并轉(zhuǎn)化至擬南芥生態(tài)型Col0中所得[24]。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 非生物脅迫下轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥的萌發(fā)能力分析

用75%乙醇對轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥種子和野生型擬南芥種子進(jìn)行表面消毒后，分別點(diǎn)在1/2MS和含有100、150 mmol·L-1NaCl和200、250 mmol·L-1Mannitol的1/2MS培養(yǎng)基平板上，在培養(yǎng)室中生長至第3天開始調(diào)查發(fā)芽勢，14 d后觀察長勢并計(jì)算萌發(fā)率。

1.2.2 非生物脅迫下轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥幼苗期的抗逆能力分析

擬南芥種子消毒后點(diǎn)在1/2MS培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)3 d后，將萌發(fā)的種子轉(zhuǎn)移到1/2MS和含有100、150 mmol·L-1NaCl和200、250 mmol·L-1Mannitol的培養(yǎng)基平板上，在培養(yǎng)室中豎直培養(yǎng)10 d后，分別從每個(gè)處理中取長勢一致的幼苗各5株，用分析天平(0.001 g)測得總重量后，再計(jì)算每株幼苗的平均重量，即鮮重；同時(shí)，用游標(biāo)卡尺測出其根長后求取平均值。

1.2.3 轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥脅迫灌根處理

待擬南芥生長4周后分別進(jìn)行干旱、鹽(100、150 mmol·L-1NaCl)、滲透(150、200 mmol·L-1甘露醇)處理，處理6 d，未做脅迫處理的苗作為對照。其中對照不做處理，每2 d澆水1次，每次500 mL；干旱處理方法為自然干旱法且時(shí)間為6 d；鹽處理方法則在每個(gè)大育苗盆里分別澆500 mL濃度為100、150 mmol·L-1NaCl，每隔1 d澆1次，處理6 d；滲透處理方法為在每個(gè)大育苗盆里分別澆500 mL濃度為150、200 mmol·L-1甘露醇，處理方法與時(shí)間同上；處理后調(diào)查表型，第7天上午用液氮收樣，放入-80℃冰箱中，用于后續(xù)生理指標(biāo)測定。

1.2.4 轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥脅迫處理后的生理表型和酶活測定

脅迫處理6 d后的擬南芥植株，觀察其表型，測定葉綠素含量，并利用試劑盒測定MDA、SOD、POD、脯氨酸等生理生化指標(biāo)[25]。

1.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量分析脅迫后的轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥中PnDof30基因的表達(dá)量

利用總RNA提取試劑盒pBIOZOL提取總RNA，之后利用TaKaRa公司提供的cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒和康為世紀(jì)生物技術(shù)有限公司提供的qRT-PCR試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)，其中PnDof30基因的上游引物5′-TACTTTCGCAACCACAGC-3′，下游引物5′-AAGTGCCACCTCTTGTCC-3′，內(nèi)參基因Ubiquitin的上游引物5′-TCACTGGAAAGACCATTACTCTTGAA-3′，下游引物5′-AGCTGTTTTCCAGCGAAGATG-3′，反應(yīng)體系均按照說明書提供加樣。實(shí)時(shí)熒光定量為相對定量，其計(jì)算方法是根據(jù)每個(gè)反應(yīng)得到的相應(yīng)CT值，采用2-△△CT法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 非生物脅迫下轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥的萌發(fā)能力分析

用75%乙醇對轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥(L2)和野生型擬南芥(WT)種子進(jìn)行表面消毒，分別點(diǎn)在1/2MS和含有100、150 mmol·L-1NaCl和200、250 mmol·L-1Mannitol的培養(yǎng)基平板上，在培養(yǎng)室中生長14 d后計(jì)算各株系在不同脅迫下的萌發(fā)率(如圖1所示)。在正常條件下，WT和L2的種子萌發(fā)率接近100%，且無顯著差異；脅迫條件下無論WT和L2的萌發(fā)率均有降低。其中100 mmol·L-1NaCl脅迫WT種子萌發(fā)率為83%、L2萌發(fā)率為95%，顯著高于WT；150 mmol·L-1NaCl WT的種子萌發(fā)率為43%、L2為48%，無顯著差異，且種子萌發(fā)時(shí)間較正常條件晚3～4 d。而200 mmol·L-1Mannitol脅迫的WT種子萌發(fā)率為82%、L2為94%，顯著高于WT；250 mmol·L-1Mannitol WT的種子萌發(fā)率為93%、L2為98%，無顯著差異，種子萌發(fā)時(shí)間較正常條件晚5 d左右。250 mmol·L-1Mannitol脅迫條件下L2的種子萌發(fā)率高于200 mmol·L-1Mannitol，并且與正常條件下培養(yǎng)的種子萌發(fā)率相差不大。

圖1 非生物脅迫下轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥的萌發(fā)率Fig.1 Germination rate of transgenic PnDof30 Arabidopsis under abiotic stress

2.2 非生物脅迫下轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥幼苗期的抗逆能力分析

用75%乙醇對轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥(L2)和野生型擬南芥(WT)種子進(jìn)行表面消毒，點(diǎn)在1/2MS的培養(yǎng)基平板上生長31d后，將萌發(fā)的幼苗轉(zhuǎn)移至1/2MS和分別含有100、150 mmol·L-1NaCl和200、250 mmol·L-1Mannitol的培養(yǎng)基平板上，在培養(yǎng)室中豎直生長10 d后觀察長勢并統(tǒng)計(jì)根長(如圖2所示)。結(jié)果表明：正常生長條件下的過表達(dá)株系L2的根長略長于WT，植株葉片為綠色；鹽脅迫條件下，WT根長明顯降低，L2根長雖較少但長于WT，尤其是150 mmol·L-1NaCl根長幾乎不可見，且植株葉片發(fā)白矮?。粷B透脅迫條件下，WT和L2的根長均有降低，但明顯長于鹽脅迫條件，且植株根系發(fā)達(dá)，側(cè)根增多，葉片為綠色。

進(jìn)一步對轉(zhuǎn)基因株系在各脅迫條件下的根長和鮮重進(jìn)行測量(如圖3所示)，在正常生長條件下，過表達(dá)株系L2的根長是WT的1.3倍；在非生物脅迫下WT和L2的根長均有降低。在鹽脅迫條件下，100 mmol·L-1NaCl L2的根長是WT的1.3倍；150 mmol·L-1NaCl L2是WT的1.6倍。在滲透脅迫條件下，200 mmol·L-1Mannitol L2的根長是WT的1.3倍；250 mmol·L-1Mannitol L2是WT的1.2倍。如圖4所示，正常生長條件下，過表達(dá)株系L2的鮮重是WT的1.3倍；在非生物脅迫下WT和L2的鮮重均有降低。在鹽脅迫條件下，100 mmol·L-1NaCl L2的鮮重是WT的1.3倍；150 mmol·L-1NaCl L2是WT的1.1倍。在滲透脅迫條件下，200 mmol·L-1Mannitol L2的鮮重是WT的1.1倍；250 mmol·L-1Mannitol L2是WT的1.2倍。

2.3 非生物脅迫下轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥蓮座期的表型

對生長1個(gè)月左右的轉(zhuǎn)基因和野生型擬南芥分別進(jìn)行干旱、鹽(100、150 mmol·L-1NaCl)、滲透(150、 200 mmol·L-1甘露醇)3種脅迫處理，處理6 d，未做脅迫處理的苗(水)作為對照，觀察植株變化(如圖5所示)。結(jié)果表明：在正常生長條件下，過表達(dá)株系L2與WT的外部形態(tài)、蓮座葉直徑和葉片數(shù)基本一致；在干旱、鹽、滲透脅迫條件下，過表達(dá)株系L2葉片有不同程度的卷曲，葉尖略有萎黃，而野生型擬南芥葉片有明顯萎縮、葉片枯黃部分變白現(xiàn)象。L2的蓮座葉直徑和葉片數(shù)也顯著高于野生型(如圖6所示)。3種脅迫處理后，過表達(dá)株系L2形態(tài)都明顯好于野生型，葉片更綠，生長狀態(tài)更加良好。

圖2 非生物脅迫下轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥幼苗的根長情況Fig.2 Root length of transgenic PnDof30 Arabidopsis seedlings under abiotic stress

圖3 非生物脅迫下轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥幼苗的根長Fig.3 Root growth of transgenic PnDof30 Arabidopsis seedlings under abiotic stress

圖4 非生物脅迫下轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥幼苗的鮮重Fig.4 Fresh weight of transgenic PnDof30 Arabidopsis seedlings under abiotic stress

圖5 非生物脅迫6 d后的轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥 A.對照條件(水)表型；B.干旱表型；C～D.100、150 mmol·L-1 NaCl表型；E～F.200、250 mmol·L-1 Mannitol表型Fig.5 Transgenic PnDof30 Arabidopsis after 6 d of abiotic stress A. Control condition phenotype; B. drought phenotype; Cand D. 100,150 mmol·L-1 NaCl phenotype; E-F. 200,250 mmol·L-1 mannitol phenotype

圖6 非生物脅迫6天后轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥的蓮座葉直徑、葉片數(shù)Fig.6 Rosette leaf diameter and leave number of transgenic PnDof30 Arabidopsis after 6 d of abiotic stress

圖7 非生物脅迫6天轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥的SOD、POD、MDA、脯氨酸、葉綠素Fig.7 SOD,POD,MDA,proline and chlorophyll of transgenic PnDof30 Arabidopsis after 6 d of abiotic stress

圖8 不同脅迫處理后PnDof30基因的表達(dá)Fig.8 Expression of PnDof30 gene after different stress treatments

2.4 非生物脅迫下轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥成苗的生理生化指標(biāo)分析

對處理6 d后的過表達(dá)和野生型擬南芥株系，取各株的葉片分別測定葉綠素、SOD、POD、MDA、脯氨酸等指標(biāo)進(jìn)行分析(每個(gè)處理每個(gè)株系3次生物學(xué)重復(fù))(詳見圖7)。由圖7可知：在正常生長條件下，WT與過表達(dá)株系L2的SOD活性基本相同；在干旱脅迫條件下，L2的SOD活性是WT的1.6倍；在鹽脅迫條件下，100 mmol·L-1NaCl L2的SOD活性是WT的1.6倍，150 mmol·L-1NaCl L2是WT的2.4倍；在滲透脅迫條件下，200 mmol·L-1Mannitol L2的SOD活性是WT的2.3倍，250 mmol·L-1Mannitol L2是WT的1.5倍。轉(zhuǎn)化株系在3種脅迫5個(gè)處理?xiàng)l件下SOD活性都有增加且顯著高于WT，特別是在150 mmol·L-1NaCl和200 mmol·L-1Mannitol處理時(shí)。由POD的數(shù)據(jù)結(jié)果可知：正常生長條件下，WT與過表達(dá)株系L2的POD活性基本相同；在干旱脅迫條件下，L2的POD活性是WT的1.2倍；在鹽脅迫條件下，100 mmol·L-1NaCl L2的POD活性是WT的1.8倍，150 mmol·L-1NaCl L2是WT的1.5倍；在滲透脅迫條件下，200 mmol·L-1Mannitol L2的POD活性是WT的1.7倍，250 mmol·L-1Mannitol L2是WT的1.2倍。轉(zhuǎn)化株系在3種脅迫下POD活性都有增加且略高于WT。圖中MDA結(jié)果表明正常生長條件下，WT與過表達(dá)株系L2的MDA含量基本相同；在干旱脅迫條件下，WT的MDA含量是L2的1.2倍；在鹽脅迫條件下，100 mmol·L-1NaCl WT的MDA含量是L2的2倍，150 mmol·L-1NaCl WT是L2的1.7倍；在滲透脅迫條件下，200 mmol·L-1Mannitol WT的MDA含量是L2的1.9倍，250 mmol·L-1Mannitol WT是L2的1.7倍。脯氨酸結(jié)果由圖7可知：正常生長條件下，WT與過表達(dá)株系L2的脯氨酸含量基本相同；在干旱脅迫條件下，L2的脯氨酸含量是WT的1.7倍；在鹽脅迫條件下，100 mmol·L-1NaCl脯氨酸含量最高，150 mmol·L-1NaCl時(shí)脯氨酸含量下降；在滲透脅迫條件下，200 mmol·L-1Mannitol L2的脯氨酸含量是WT的1.1倍，250 mmol·L-1Mannitol L2是WT的1.3倍，轉(zhuǎn)化株系在3種脅迫下脯氨酸活性都有增加且略高于WT。葉綠素的含量與植物的光合速率相關(guān)。由此可知：正常生長條件下，WT與過表達(dá)株系L2的葉綠素含量基本相同；在干旱、100 mmol·L-1NaCl、150 mmol·L-1NaCl、200 mmol·L-1Mannitol、250 mmol·L-1Mannitol脅迫條件下，WT和L2的葉綠素含量顯著降低說明植株受到了傷害，但是L2的降低幅度明顯小于WT并且葉綠素含量可達(dá)WT的1.6倍。

2.5 不同脅迫處理后轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥中PnDof30基因的相對表達(dá)分析

對生長4周的轉(zhuǎn)基因擬南芥分別進(jìn)行干旱、鹽(100、150 mmol·L-1NaCl)、滲透(150、200 mmol·L-1甘露醇)3種脅迫處理，處理6 d后提取總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA作為熒光定量PCR的模板。利用RT-PCR技術(shù)分析在各脅迫處理后PnDof30基因的表達(dá)量(如圖8所示)。結(jié)果表明：和對照(水)相比，3種脅迫處理后PnDof30基因表達(dá)量均顯著上調(diào)。其中，干旱脅迫下表達(dá)量是對照條件的4.6倍；鹽脅迫下，100 mmol·L-1NaCl的表達(dá)量是8.2倍，150 mmol·L-1NaCl表達(dá)量最高是對照的13.2倍；滲透脅迫下，200 mmol·L-1Mannitol的表達(dá)量是6.2倍，250 mmol·L-1Mannitol可達(dá)7.8倍。此外，不同的脅迫處理后PnDof30基因表達(dá)量不同，鹽脅迫較其他脅迫處理后的表達(dá)量更高，150 mmol·L-1NaCl時(shí)表達(dá)量最高，說明PnDof30基因在抗鹽脅迫時(shí)能力更強(qiáng)。

3 討論

不利于植物生長和發(fā)育的各種環(huán)境因素統(tǒng)稱為逆境，逆境對作物生長有很大影響，是限制作物生產(chǎn)的重要因素。Dof轉(zhuǎn)錄因子是植物中獨(dú)特的轉(zhuǎn)錄因子，在高等植物中，Dof家族轉(zhuǎn)錄因子也參與植物對脅迫的反應(yīng)[26]。

為了探究PnDof30基因的抗逆功能，我們分別用NaCl、Mannitol對過表達(dá)株系L2和WT擬南芥幼苗；干旱、NaCl、Mannitol對擬南芥成苗進(jìn)行脅迫處理，并統(tǒng)計(jì)種子萌發(fā)率、根長、鮮重及成苗生長狀態(tài)和理化指標(biāo)。結(jié)果顯示：幼苗在正常生長時(shí)種子萌發(fā)率相差不大，L2的根長和鮮重顯著高于WT；在脅迫處理后，WT和L2的萌發(fā)率、根長和鮮重都有下降，但是L2的下降幅度小于WT。觀察脅迫處理后的成苗發(fā)現(xiàn)，L2的生長狀態(tài)無明顯變化，而WT葉片卷曲萎黃。這些現(xiàn)象說明轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥幼苗和成苗有一定的抗逆能力，從而說明PnDof30基因有一定的抗逆功能。

超氧化物歧化酶(SOD)通過催化超氧離子自由基的歧化反應(yīng)清除自由基，抵御活性氧對細(xì)胞膜的損傷，從而提高植物的抗逆能力。轉(zhuǎn)化株系在5種脅迫處理?xiàng)l件下SOD活性都有增加且顯著高于WT，說明此時(shí)擬南芥株系受到脅迫的程度明顯提高，各轉(zhuǎn)化株系產(chǎn)生更多的SOD用以抵御脅迫保護(hù)細(xì)胞膜系統(tǒng)。由此說明，轉(zhuǎn)基因株系可以通過在逆境中提高SOD活性來增強(qiáng)清除氧自由基的能力從而表現(xiàn)出抗逆能力。過氧化物酶(POD)是清除植物體內(nèi)氧自由基傷害的重要酶。轉(zhuǎn)化株系脅迫下POD活性都有增加且略高于WT，說明轉(zhuǎn)基因株系可以通過增強(qiáng)POD活性來提高清除氧自由基的能力從而表現(xiàn)出抗逆能力。丙二醛(MDA)的含量可以反映植物在遇到逆境下的傷害程度。轉(zhuǎn)化株系在脅迫下MDA含量都低于WT，說明其在逆境中受到的傷害小于WT。脯氨酸能防止質(zhì)膜透性的變化，對質(zhì)膜的完整性有保護(hù)作用。轉(zhuǎn)化株系在脅迫下脯氨酸活性都有增加且略高于WT，說明轉(zhuǎn)基因株系可以通過提高脯氨酸含量來保護(hù)植株質(zhì)膜系統(tǒng)從而抵御脅迫傷害。在葉綠素含量的檢測結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)處理后L2的葉綠素含量有所降低，且降低趨勢小于WT，說明轉(zhuǎn)基因株系在逆境中受到的傷害小于WT，更能適應(yīng)逆境環(huán)境。在3種脅迫處理后，PnDof30基因表達(dá)量相比于對照均有顯著上調(diào)，說明PnDof30基因與抗逆脅迫應(yīng)答相關(guān)。綜上所述，轉(zhuǎn)基因PnDof30擬南芥株系L2通過調(diào)節(jié)一些與植物抗逆相關(guān)的生理生化指標(biāo)使植株具有抗逆功能，說明PnDof30基因具有抗干旱、鹽和滲透等非生物脅迫的功能。

Dof轉(zhuǎn)錄因子家族是植物中特異發(fā)現(xiàn)的一大組因子[8]。以前的研究表明，Dof蛋白在發(fā)育和激素調(diào)節(jié)以及應(yīng)激反應(yīng)中都起著非常重要的作用[27]。在檉柳的研究結(jié)果中表明，Dof基因的轉(zhuǎn)錄受鹽脅迫誘導(dǎo)，可能參與檉柳的耐鹽應(yīng)答[28]。Ma[27]等的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，大白菜中的Dof基因功能將有助于發(fā)展大白菜品種的特性，如耐鹽和耐旱。在楊樹的滲透脅迫中也有發(fā)現(xiàn)，PtrDof轉(zhuǎn)錄因子在植物中對滲透脅迫起著至關(guān)重要的作用[29]。當(dāng)對蘋果采取非生物脅迫處理后，MdDof基因表達(dá)立即增加，該結(jié)果也表明MdDof基因在植物適應(yīng)非生物脅迫中的潛在積極作用，即參與著非生物脅迫的反應(yīng)[30]。我們通過檢測轉(zhuǎn)基因擬南芥L2和WT在干旱、鹽和滲透三種脅迫下的生理生化指標(biāo)，探究PnDof30基因在抗逆方面的功能。實(shí)時(shí)熒光定量的結(jié)果顯示，PnDof30基因?qū)δ婢秤袘?yīng)答，逆境處理下的表達(dá)量都顯著低于對照。過表達(dá)株系L2在幼苗期(2周左右)的種子萌發(fā)率、根長和鮮重均高于WT；在成苗期(1個(gè)月左右)的表型比WT更大更綠，SOD、POD和脯氨酸含量高于WT，MDA含量少于WT。因此，PnDof30基因在擬南芥對干旱、鹽和滲透脅迫的抵御中可能起重要作用。