張潔 林靜 陳燕*

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)護(hù)理學(xué)院，湖南 長沙 410208 2.湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410006

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(postmenopausal osteoporosis，PMOP)其特征是骨量減少，骨組織結(jié)構(gòu)破壞。隨著社會老齡化進(jìn)程的加速，以老年人和絕經(jīng)后婦女多見的骨質(zhì)疏松癥患病人群逐漸增加，資料[1]顯示，我國骨質(zhì)疏松患病率在50歲以上女性人群中約為40.1%，超過20%的女性在圍絕經(jīng)期即會出現(xiàn)骨量減少。骨質(zhì)疏松所導(dǎo)致的骨折明顯加重了家庭與社會負(fù)擔(dān)，增加中老年的病殘率及病死率[2]。骨質(zhì)疏松發(fā)生后難以逆轉(zhuǎn)，加強(qiáng)預(yù)防則能更有效地降低骨折的發(fā)生率。隨著中醫(yī)理論的發(fā)展，有學(xué)者根據(jù)“腎主骨”理論進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，認(rèn)為導(dǎo)致PMOP癥的重要原因是天癸竭、腎氣衰、髓化生無源[3]?；谥嗅t(yī)藥食同源理論，中醫(yī)藥膳成為防控老年人常見病的應(yīng)用熱點(diǎn)，其中包括PMOP。已有研究表明，用羊肉、狗肉、羊腎、豬骨等食材輔以中藥可有效預(yù)防老年骨質(zhì)疏松癥[4]。2013年《國務(wù)院關(guān)于促進(jìn)健康服務(wù)業(yè)發(fā)展的若干意見》文件指出，要“加強(qiáng)藥食同用中藥材的種植及產(chǎn)品研發(fā)與應(yīng)用，推廣科學(xué)規(guī)范的中醫(yī)保健知識及產(chǎn)品”。2016年中華中醫(yī)藥學(xué)會發(fā)布《健康管理服務(wù)規(guī)范》、《藥食同源藥膳標(biāo)準(zhǔn)通則》兩項(xiàng)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，為藥膳食療有效與安全應(yīng)用提供依據(jù)。開展藥膳防控PMOP研究，為中醫(yī)食療養(yǎng)生與飲食預(yù)防疾病提供理論支持，為進(jìn)一步開發(fā)藥膳產(chǎn)品提供研究基礎(chǔ)，對促進(jìn)老年健康產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要作用。本文基于“腎主骨”、“藥食同源”等理論，結(jié)合前期課題組研究的自擬補(bǔ)腎藥膳方對常見骨形成代謝代表性指標(biāo)骨堿性磷酸酶(bone alkaline phosphatase，BALP)、I型原膠原N-端前肽(propeptide of type I Procollagen, PINP)等的影響，補(bǔ)充常見代謝代表性指標(biāo)骨鈣素(bone gla protein, BGP)水平的變化，綜合分析自擬補(bǔ)腎藥膳方影響卵巢去勢骨質(zhì)疏松模型大鼠骨形成機(jī)制，旨在為探索補(bǔ)腎藥膳方對PMOP模型大鼠骨形成的作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：60只SPF級雌性SD大鼠，初始體重200～220 g，喂養(yǎng)環(huán)境溫度為(25±1)℃，濕度70%，進(jìn)食大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料和凈化水。入選標(biāo)準(zhǔn)：SPF級4～5月齡雌性大鼠；未曾交配；體重200 g～220 g。排除標(biāo)準(zhǔn)：適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后體重>300 g或<200 g大鼠；出現(xiàn)毛發(fā)粗糙、無光澤等不健康表現(xiàn)。脫落標(biāo)準(zhǔn)：實(shí)驗(yàn)過程中各種原因?qū)е碌拇笫笏劳觥?/p>

1.1.2實(shí)驗(yàn)藥物：采用文獻(xiàn)法及德爾菲專家咨詢法對防治PMOP的補(bǔ)腎藥膳方進(jìn)行篩選[1]，確定補(bǔ)腎藥膳方由狗肉200 g(君藥)，羊腎150 g(臣藥)，山藥30 g(佐使藥)，枸杞30 g(佐使藥)組成。上述食材清洗后加水2 000 mL武火煮沸后文火煲煮1 h，取湯汁。分高劑量(第一次湯汁)和低劑量(2 000 mL水稀釋第一次湯汁)，冷藏備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1動(dòng)物造模及分組；對60只大鼠進(jìn)行編號，稱重后隨即分出正常組、假手術(shù)組。將剩余40只大鼠去卵巢，以建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠模型，再根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表進(jìn)行分組。共6組，每組10只，分別為正常組、假手術(shù)組、模型空白組、高劑量藥膳組(簡稱高劑量組)、低劑量藥膳組(簡稱低劑量組)、骨疏康顆粒組(簡稱骨疏康組)。

1.2.2動(dòng)物給藥方法及標(biāo)本采集：正常組、假手術(shù)組以及模型空白組大鼠選用一般飼料飼養(yǎng)，高劑量組、低劑量組與骨疏康組大鼠分別采用高劑量藥膳、低劑量藥膳、骨疏康進(jìn)行灌胃，劑量根據(jù)人體給藥劑量的6.0倍計(jì)算。連續(xù)給藥12周，從腹主動(dòng)脈取血低溫分離血清，存于-80 ℃冰箱。

1.3 指標(biāo)監(jiān)測

實(shí)驗(yàn)采用Elisa法檢測血清，按Elisa試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技有限公司提供，E-EL-R0113c)說明書進(jìn)行檢測血清BGP、BALP水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

通過單因素方差分析，6組大鼠的血清BGP水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型空白組、高劑量組、低劑量組、骨疏康組血清BGP水平顯著高于正常組(P<0.01)，認(rèn)為卵巢去勢骨質(zhì)疏松大鼠造模成功。假手術(shù)組血清BGP水平與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，認(rèn)為PMOP癥造模成功可排除手術(shù)的影響。模型空白組、高劑量組、低劑量組、骨疏康組血清BGP水平均顯著高于假手術(shù)組(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為摘除卵巢是影響骨質(zhì)疏松大鼠骨代謝指標(biāo)變化的因素。低劑量組與高劑量組與?？战M之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但血清BGP具有下降的趨勢，骨疏康組血清BGP水平高于模空組(P<0.05)，見表1。

項(xiàng)目BGPF值P值正常組(n=10)87.69±5.87假手術(shù)組(n=10)85.40±5.00a模空組(n=8)108.85±1.61b55.946<0.001高劑量組(n=9)105.41±3.14b低劑量組(n=10)105.47±2.69b骨疏康組(n=10)103.69±4.70b, c

注：與正常組比較，aP>0.05；與假手術(shù)組比較，bP<0.05；與模空組比較，cP<0.05。

3 討論

3.1 補(bǔ)腎藥膳與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松

中醫(yī)理論認(rèn)為PMOP癥歸屬于“骨痿”、“骨痹”，《醫(yī)經(jīng)精義·中卷》云：“腎藏精，精生髓，髓養(yǎng)骨”，PMOP癥多見腎虛型，腎精漸衰、骨髓生化無源、骨髓空虛，則可導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生。老年人骨質(zhì)偏脆，容易發(fā)生骨折等一系列臨床癥狀，以腎虛為其內(nèi)因，提示腎與骨質(zhì)疏松癥有著極其密切的關(guān)系。此外，瘀血阻滯、脾胃虛弱、肝血不足也是PMOP癥發(fā)生的重要方面[5-7]。PMOP癥屬于高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松癥，骨形成與骨吸收均活躍，兩者之間發(fā)生失衡。目前，大量臨床試驗(yàn)證實(shí)基于補(bǔ)腎理念的中醫(yī)藥在防治PMOP癥上取得了顯著療效[8-10]。WHO曾于1989年提出，飲食調(diào)節(jié)為防控PMOP癥的三大原則之一。中醫(yī)藥食同源、同功、同理等理論認(rèn)為食物同藥物一樣具有寒熱溫涼、辛甘酸苦咸、升降浮沉等作用，適用于預(yù)防和補(bǔ)益[11-12]。對于已發(fā)生的PMOP癥，中藥為補(bǔ)腎療法，其中補(bǔ)腎藥膳對防治PMOP癥也逐漸有所報(bào)道，壯陽狗肉湯、枸杞羊腎粥等藥膳在改善腰膝酸軟、益精補(bǔ)氣等方面具有顯著療效[13-14]。

3.2 補(bǔ)腎藥膳方對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松骨形成代謝指標(biāo)的影響

3.3.1前期研究基礎(chǔ)

本研究自擬的補(bǔ)腎藥膳相互補(bǔ)充，溫腎壯陽、補(bǔ)中益氣、益腎澀精、補(bǔ)脾養(yǎng)胃、養(yǎng)肝滋腎。前期研究中可知補(bǔ)腎藥膳方能有效改善PMOP癥模型大鼠的CTX-Ι的水平以及骨組織形態(tài)[15-16]。據(jù)課題組前期研究[17-18]表明，在骨代謝形成指標(biāo)BALP、PINP等方面，補(bǔ)腎藥膳方亦能發(fā)揮相應(yīng)作用。單因素方差分析顯示，在BALP水平方面，血清BALP水平在模型組與假手術(shù)組間(P<0.01)，模型組與低劑量組及骨疏康組間(P<0.05)，高劑量組與低劑量組及骨疏康組間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在PINP血清表達(dá)方面，低劑量組、高劑量組、骨疏康組3組均顯著較模型空白組高。

3.3.2補(bǔ)腎藥膳方對BGP、BALP、PINP等骨形成代謝性指標(biāo)影響

絕經(jīng)后婦女卵巢功能減退，雌激素水平下降，致使成骨細(xì)胞凋亡加速，使骨吸收增多，骨轉(zhuǎn)換率升高[19]。骨形成標(biāo)志物可反映骨轉(zhuǎn)換的狀態(tài)，可用于骨質(zhì)疏松治療療效評價(jià)中，其中BGP、BALP、PINP等是骨代謝形成代表性指標(biāo)[20]。

BGP由成骨細(xì)胞合成，分泌入血，是反映骨形成速率的特異性指標(biāo)。其主要作用是維持骨的正常礦化，抑制軟骨的礦化速率，在高轉(zhuǎn)換率的代謝性骨病中起重要作用，與血清BALP水平呈正相關(guān)[21]。本研究中，通過對卵巢去勢絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，模型空白組血清BGP水平最高，與正常組間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明絕經(jīng)后婦女亦存在成骨增強(qiáng)。骨疏康顆粒組與模型空白組之間的血清BGP水平差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，高劑量組、低劑量組血清BGP有下降趨勢。

BALP在新骨形成、礦化作用中起一定作用，反映成骨細(xì)胞活動(dòng)。在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥婦女中，研究[22]發(fā)現(xiàn)，血清BALP水平處于高水平狀態(tài)并隨著絕經(jīng)年齡的增加而增加，骨吸收大于骨形成，腎與骨中的ALP流失入血，血液中BALP水平增多[23]，主要原因是由于骨的代謝加速，低劑量藥膳與骨疏康均能有效下降高轉(zhuǎn)換狀態(tài)下的BALP水平，對于抑制絕經(jīng)后高轉(zhuǎn)換水平具有一定作用。

PINP反映了新合成的I型膠原蛋白的變化[24]，骨形成活躍時(shí)，其在血清中的水平升高，成骨增加。由狗肉、羊腎、枸杞、山藥組成的補(bǔ)腎藥膳方可有效增高卵巢去勢骨質(zhì)疏松模型大鼠的PINP水平，在促進(jìn)成骨增加方面發(fā)揮了重要作用[17]。

3.3.3補(bǔ)腎藥膳方對骨形成代謝性指標(biāo)影響差異的分析

研究綜合發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎藥膳方中的高劑量藥膳、低劑量藥膳均可改善PMOP癥大鼠的血清PINP水平。對BALP的干預(yù)作用低劑量組較模型空白組差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但在血清BGP方面的干預(yù)作用較BALP、PINP弱，僅有下降趨勢，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。認(rèn)為補(bǔ)腎藥膳方在影響骨形成方面作用如骨形成速率、新骨形成或礦化、增加成骨量等方面值得進(jìn)一步深入探討，以闡述藥膳防治PMOP癥的機(jī)理。

隨著骨質(zhì)疏松機(jī)理研究的深入，中醫(yī)藥防治PMOP癥的相關(guān)研究在骨代謝水平、骨密度、信號通路等方面均有較大的發(fā)展。本研究主要探討了補(bǔ)腎藥膳對骨形成代謝指標(biāo)的影響，在骨吸收方面及機(jī)制方面的研究缺乏相應(yīng)的指標(biāo)說明。此外，本研究發(fā)現(xiàn)低劑量藥膳、高劑量藥膳對改善骨代指標(biāo)方面存在差異，其影響因素值得進(jìn)一步探討，對于藥膳劑量的精準(zhǔn)確定可作為今后的研究方向。

4 小結(jié)

在我國人口老齡化面臨嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，健康中國戰(zhàn)略的實(shí)施，大健康觀念的樹立等背景下，加強(qiáng)中醫(yī)治未病及健康維護(hù)已成共識。中醫(yī)理論認(rèn)為PMOP癥的病因病機(jī)有腎精虧虛、瘀血阻滯、脾胃虛弱、肝血不足等方面。其中腎精虧虛與骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，是本病根本病機(jī)，補(bǔ)腎法是中醫(yī)治療PMOP的基本大法。以中醫(yī)治未病作為理論指導(dǎo)，基于“腎主骨”、“藥食同源”等中醫(yī)理論下的補(bǔ)腎藥膳能影響去勢大鼠的骨形成代謝指標(biāo)，低劑量藥膳效果優(yōu)于高劑量，接近相當(dāng)于骨疏康的效果，補(bǔ)充發(fā)展了相關(guān)中醫(yī)理論。本研究探討了補(bǔ)腎藥膳在骨形成方面的作用，對PMOP機(jī)制的深入研究以及補(bǔ)腎藥膳方防治PMOP癥的積極作用具有重要的推廣價(jià)值和學(xué)術(shù)意義。