何璋海，沈溪明

（中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院病理科，廣東 廣州）

1 材料

1.1 材料

收集我院日常的冰凍切片病例，如乳腺、卵巢、甲狀腺、淋巴結(jié)等冰凍活檢組織。

1.2 儀器 CM 1950 冰凍切片機(jī)（德國(guó)徠卡公司）

NQ100S 全自動(dòng)冰凍染色機(jī)（廣州耐確醫(yī)療設(shè)備公司）

1.3 試劑

冰醋酸95%酒精（1:99）混合固定液、改良Harris’蘇木素、0.5%鹽酸酒精、飽和碳酸鋰溶液、0.5%水溶性伊紅液、80%酒精、95%酒精、無(wú)水酒精、苯酚二甲苯（1:3）混合液、二甲苯、中性樹膠。

1.4 試劑配制

冰醋酸95%酒精混合固定液：將5mL 冰醋酸加入到495mL95%酒精中，充分混勻。

改良Harris’蘇木素：將蘇木精5g 溶于50mL 無(wú)水乙醇，硫酸鋁鉀100g 溶于1000mL 蒸餾水中，煮沸溶解，然后將兩液均勻混合至染液呈淡紅色，繼續(xù)加熱煮沸后取出，待30s 后緩慢加入氧化汞，待染液呈深紫色立即置入冰水中，待冷卻至室溫后過(guò)濾[2]。臨用前每80mL 蘇木素添加3mL 冰醋酸，充分混勻。

0.5 %水溶性伊紅液：水溶性伊紅粉末 2.5g，將其溶于500mL蒸餾水，充分溶解，過(guò)濾。臨用前 每80mL 水溶性伊紅液滴加50微升冰醋酸，充分混勻。

苯酚二甲苯混合液：將100mL 苯酚加入到400mL 二甲苯中，充分混勻。臨用前加80mL 至冰凍染色機(jī)的試劑缸中。

2 方法

2.1 冰凍組織切片

切片厚3-4μm，裱貼在載玻片中央，于載玻片磨砂面正確編號(hào)，放入冰凍染色機(jī)的片籃中，啟動(dòng)染色程序，即可上機(jī)染色。

2.2 全自動(dòng)冰凍切片HE 染色程序

程序染色完成后，手動(dòng)取出切片，在抽風(fēng)櫥內(nèi)中性樹膠封片。

3 結(jié)果

冰凍切片HE 染色結(jié)果顯示細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞漿、纖維、紅細(xì)胞呈現(xiàn)不同程度的紅色，顏色鮮艷，對(duì)比清晰。

圖1 卵巢低分化腺癌（冰凍切片HE 染色） 低倍鏡下圖

表1 全自動(dòng)冰凍切片HE 染色程序

圖2 乳腺導(dǎo)管原位癌（冰凍切片HE 染色） 低倍鏡下圖

圖3 乳腺浸潤(rùn)性癌（冰凍切片HE 染色） 低倍鏡下圖

圖4 NQ100S 全自動(dòng)冰凍染色機(jī)

4 討論

NQ100S 是廣州耐確醫(yī)療公司自主研發(fā)的一款全自動(dòng)冰凍染色機(jī)，設(shè)備有軟、硬件2 個(gè)部分組成，該型號(hào)為單染色單元，每次最大染片量為4 片，可擴(kuò)充為雙染色單元，最大染片量為8 片，可無(wú)限循環(huán)操作，該設(shè)備屬于浸染式染色平臺(tái)，具備成本相對(duì)低級(jí)試劑開放等特點(diǎn)[3]。該設(shè)備單染色周期為5-8min,可滿足冰凍診斷快速染色的要求（單份活檢冰凍切片時(shí)間≤30min）,機(jī)身自帶液面探測(cè)功能，每缸試劑的使用時(shí)間和次數(shù)都有累計(jì)記錄并自動(dòng)監(jiān)控，及時(shí)提醒操作者更換染色試劑。染色缸為轉(zhuǎn)盤設(shè)計(jì)，每缸帶獨(dú)立蓋子，避免試劑揮發(fā)和防止污染環(huán)境，蘇木素試劑缸附帶加熱功能，能彌補(bǔ)冬天染片上色慢的不足。觸摸屏的設(shè)計(jì)可以實(shí)時(shí)顯示染色過(guò)程和常見故障，使操作人員對(duì)試劑的使用及每天工作流程進(jìn)行監(jiān)控[4]，還可以通過(guò)預(yù)設(shè)染色程序以及參數(shù)設(shè)定來(lái)降低因組織不同而帶來(lái)的染色差異，另外還附設(shè)一鍵啟動(dòng)和報(bào)警功能，染色完成后會(huì)自動(dòng)報(bào)警，提示染色結(jié)束，使操作更為人性化和簡(jiǎn)便。

結(jié)合自身工作實(shí)踐，對(duì)NQ100S 全自動(dòng)冰凍染色機(jī)的使用和保養(yǎng)總結(jié)如下：（1）建立規(guī)范的儀器使用制度，并制定SOP 文件，專人負(fù)責(zé)，培訓(xùn)上崗；（2）根據(jù)醫(yī)院手術(shù)室送檢的標(biāo)本類型和科室實(shí)際情況制定3-5 種染色程序，從實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)中摸索出最適合本科室冰凍切片HE 染色的最佳程序；（3）每天上機(jī)前要及時(shí)觀察試劑的使用量，提前準(zhǔn)備染液；（4）因我們科室是使用改良Harris’蘇木素，每天染色前必須觀察蘇木素有無(wú)氧化膜形成，及時(shí)過(guò)濾，避免造成染片污染[5]；（5）每天冰凍切片工作前至少提前30min進(jìn)行儀器自檢運(yùn)行，確保機(jī)器的清洗管道保持暢通以及加熱裝置正常運(yùn)作；（6）定期保養(yǎng)，每周安排專人清潔全自動(dòng)冰凍染色機(jī)，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)上報(bào)，請(qǐng)儀器工程師來(lái)協(xié)助解決問(wèn)題，每半年要進(jìn)行預(yù)防性檢修工作，延長(zhǎng)設(shè)備的使用壽命；（7）制備機(jī)器的使用記錄表，包括試劑的更換用量、更換時(shí)間、操作者以及發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題和解決方案，都應(yīng)能在記錄表上體現(xiàn)，做好交接班的手續(xù)。

全自動(dòng)冰凍染色機(jī)因其高效、便捷、染色質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)勢(shì)開始逐漸應(yīng)用于國(guó)內(nèi)各大醫(yī)院病理科和實(shí)驗(yàn)室，比起傳統(tǒng)的人工處理因操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力等帶來(lái)的不良影響，現(xiàn)在可以通過(guò)智能化的編程設(shè)計(jì)和程序化操作，從而可以使操作者在進(jìn)行切片、貼片的同時(shí)，利用全自動(dòng)設(shè)備來(lái)完成染色程序，大大降低了操作者的工作強(qiáng)度，解放生產(chǎn)力，更能高效地減少人為染色的隨意性，進(jìn)一步確保染片質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性。

總之， 耐確醫(yī)療公司生產(chǎn)的NQ100S 全自動(dòng)冰凍染色機(jī)作為我國(guó)自主研發(fā)的冰凍染色設(shè)備，利用計(jì)算機(jī)和觸摸屏的優(yōu)勢(shì)來(lái)整合染色模塊，進(jìn)而能更好的幫助病理技師以高效、人性化的操作來(lái)彌補(bǔ)傳統(tǒng)手工染片的不足，使冰凍病理切片水平由傳統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)控制轉(zhuǎn)變?yōu)榭茖W(xué)、智能化的質(zhì)量控制，更加有利于對(duì)試劑使用和冰凍染色的流程進(jìn)行監(jiān)控，值得推廣使用。