那 亞， 陶 雅， 渠 暉， 格根圖， 孫啟忠， 王加亭

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)草原與資源環(huán)境學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010011；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所，內(nèi)蒙古呼和浩特010019；3.全國畜牧總站，北京 100125）

近年來，飼料資源短缺已成為制約我國畜牧業(yè)發(fā)展的重要因素(馬健等，2016），對(duì)此，開發(fā)人工栽培高產(chǎn)高效、營養(yǎng)價(jià)值高的飼料作物，同時(shí)利用多種形式的飼草料調(diào)制方式，是解決我國粗飼料短缺的重要途徑，也符合“十三五”以來國家提出的大力發(fā)展“草牧業(yè)”與“糧改飼”等方針戰(zhàn)略。玉米（Zea mays L.）是最主要的青貯飼料，但其蛋白質(zhì)含量較低，粗纖維含量高，適口性差，用作青貯飼料存在一定的不足（王明，2017）。

糯玉米是玉米屬的一個(gè)亞種，具有黏、糯、香、細(xì)、柔的特點(diǎn)，富含淀粉、水溶性多糖和多種維生素，營養(yǎng)豐富，與普通玉米相比蛋白質(zhì)、賴氨酸、色氨酸含量均較高（梁龍金等，2002），而且胚乳淀粉全為支鏈淀粉，使得糯玉米更易被消化吸收，用作畜禽飼料，飼喂轉(zhuǎn)化效率遠(yuǎn)高于普通玉米（陳永欣等，2003）。

鑒于糯玉米與普玉米在蛋白質(zhì)、賴氨酸、色氨酸等營養(yǎng)成分、適口性以及消化率等方面所具有的潛在混貯優(yōu)勢(shì)，本研究以糯玉米與普玉米為原料進(jìn)行混貯處理，通過化學(xué)分析、青貯發(fā)酵品質(zhì)分析和青貯菌群分析，比較不同比例混貯與單獨(dú)青貯飼料品質(zhì)以及優(yōu)勢(shì)菌群變化之間的關(guān)系，旨在為進(jìn)一步開發(fā)和利用糯玉米與普玉米混貯飼料提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地概括 試驗(yàn)地位于內(nèi)蒙古呼和浩特市土左旗中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所農(nóng)牧交錯(cuò)試驗(yàn)基地， 地理位置是北緯 40°34"～ 40°35"，東經(jīng) 111°34"～ 111°47"，大陸性半干旱氣候，年平均氣溫5.9～6.5℃，7月份最高氣溫37.9℃，1月份最低氣溫-30.8℃，年平均降水量為350~450 mm。試驗(yàn)地屬于鹽堿土，pH 8.3，土壤含鹽量0.47% ～0.53%。

1.2 試驗(yàn)材料 青貯原料收獲于2017年7月28日，試驗(yàn)所用材料為稼泰糯玉米和稼泰普玉米，于蠟熟期自試驗(yàn)田取樣（表1）。

表1 糯玉米與普玉米混合青貯原料營養(yǎng)成分%DM

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 用單因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，共5個(gè)處理組，每個(gè)組3個(gè)重復(fù)（表2）。

表2 糯玉米與普玉米混合青貯比例設(shè)計(jì)

1.4 青貯調(diào)制 將糯玉米和普玉米切短至2～3 cm，按表2中設(shè)計(jì)的混合青貯重量比例，充分混合均勻，裝入聚乙烯袋，每袋約300 g，設(shè)3次重復(fù)，用真空包裝機(jī)抽真空并封口，室溫條件下發(fā)酵60 d后開袋取樣分析。

1.5 營養(yǎng)成分分析 原料與青貯樣品均在65℃烘干48 h，分別測定初水份含量（GB/6435-86），將烘干樣品粉碎并過1 mm篩備用。干物質(zhì)（DM）采用常規(guī)烘箱烘干法測定；粗蛋白質(zhì)（CP）測定采用凱氏定氮法 （GB/T6432-94）；中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維 （ADF）采用范氏（Van Soest）法測定；可溶性碳水化合物（WSC）采用蒽酮-硫酸比色法測定。

1.6 青貯發(fā)酵品質(zhì)分析 青貯開袋后稱取20 g樣品，加入180 mL去離子水，攪拌均勻，于4℃冰箱中靜置24 h，依次用6層紗布和定性濾紙過濾，取浸提液，用雷磁PHS-3C pH計(jì)測定pH；將濾液用0.25μm密粒超強(qiáng)微孔濾膜過濾到5 mL的離心管中，用于測定氨態(tài)氮和有機(jī)酸。用高效液相色譜儀（SHIMADZE-10A型）測定乳酸、乙酸、丙酸和丁酸的含量；氨態(tài)氮的（NH3-N）測定采用苯酚-次氯酸鈉比色法。

1.7 微生物菌群分析 采用稀釋平板涂布法對(duì)原料新鮮樣品（刈割后裝入無菌袋，置于4℃保溫箱，并迅速帶回實(shí)驗(yàn)室）和各處理青貯樣品中微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)。在超凈工作臺(tái)上稱取5 g待測樣品，粉碎混勻，放入裝有45 mL無菌水的三角瓶，用封瓶膜封口，置于180 r/min的搖床振蕩30 min，靜置 10～40 s，接著用槍分別從 10-1、10-3和10-5三個(gè)稀釋中取20μL均勻滴涂在對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基表面的扇形區(qū)域內(nèi)，靜置 20～30 min后倒轉(zhuǎn)，使菌液滲透到培養(yǎng)基內(nèi)，其中，乳酸菌分離選用MRS培養(yǎng)基，大腸桿菌分離選用Blue Light Broth（BLB）培養(yǎng)基，好氧細(xì)菌分離選用Nutrient Agar（NA）培養(yǎng)基，酵母菌和霉菌分離選用Potato Detrose Agar（PDA）培養(yǎng)基。 MRS、NA、PDA 等 3種培養(yǎng)基購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，BLB培養(yǎng)基購自日本株式制藥會(huì)社。所有培養(yǎng)基在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h后分別進(jìn)行計(jì)數(shù)測定，其中MRS培養(yǎng)基上的菌落于37℃厭氧條件下培養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加普玉米對(duì)糯玉米青貯營養(yǎng)成分的影響如表3所示，糯玉米單貯（處理1）的DM和WSC含量顯著低于普玉米單貯（處理5）（P＜0.05），不同比例混貯處理中，隨著普玉米添加量的增加，除了5：5比例混貯處理WSC含量顯著下降 （P＜0.05）外，DM和WSC含量均升高，差異不顯著；糯玉米與普玉米不同比例混貯處理所含CP含量均差異不顯著（P＞0.05）；糯玉米單貯（處理 1）所含 NDF和ADF含量均顯著高于普玉米單貯 （處理5）（P＜0.05）；各比例混貯處理組中，3:7混貯處理組NDF和ADF含量均顯著低于另外兩組處理（P＜0.05）。

表3 糯玉米與普玉米不同比例混合青貯營養(yǎng)成分比較

2.2 添加普玉米對(duì)糯玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響由表4可知，糯玉米與普玉米不同比例混貯處理各組pH、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量及氨態(tài)氮/總氮值均差異不顯著。糯玉米單貯（處理1）乳酸、乙酸、丙酸和丁酸含量均高于其他處理組，其中，糯玉米單貯（處理1）乙酸和丁酸含量顯著高于其他處理組（P＜0.05）；糯玉米單貯（處理1）處理組氨態(tài)氮/總氮顯著高于普玉米單貯 （處理5）（P＜0.05），添加不同比例普玉米混貯處理中，氨態(tài)氮/總氮值差異均不顯著（P＞0.05）。

表4 糯玉米與普玉米不同比例混貯發(fā)酵品質(zhì)

2.3 不同比例糯玉米和普玉米混貯培養(yǎng)基微生物計(jì)數(shù) 如圖1所示，糯玉米和普玉米附著的乳酸菌數(shù)量分別為 1.54×106、9.35×105cfu/g FM，大腸桿菌的數(shù)量分別為4.62×106、1.23×107cfu/g FM，好氧細(xì)菌的數(shù)量分別為5.78×107、2.26×108cfu/g FM，酵母菌的數(shù)量均為4.67×104cfu/g FM，霉菌的數(shù)量分別為 5.33×104、1.83×104cfu/g FM。 附著微生物中數(shù)量最多的是好氧細(xì)菌，其次是大腸桿菌，之后是乳酸菌，酵母菌和霉菌的數(shù)量較少。

如圖2所示，發(fā)酵后附著的乳酸菌數(shù)量增加為 1.85×107～ 1.35×1010cfu/g FM， 大腸桿菌的數(shù)量為2.5×107cfu/g FM，好氧細(xì)菌的數(shù)量有所減少，為 1.73×107～ 3.55×108cfu/g FM，酵母菌和霉菌的數(shù)量有所增加，分別為1.03×107～8.55×109cfu/g FM和2.05×107～5.66×109cfu/g FM。 附著微生物中數(shù)量最多的是乳酸菌，其次是酵母菌，之后是霉菌，大腸桿菌數(shù)量最少。

3 討論

青貯是一種簡便的飼料調(diào)制和保存方式，可最大限度的保存飼料原料原有的營養(yǎng)價(jià)值 （益蕊，2015）以及青鮮狀態(tài)，還能夠提高適口性（薛艷林等，2014）和消化率（孫小凡，2003）。糯玉米與普玉米不同比例混合青貯樣品營養(yǎng)成分中，DM含量和WSC含量分別為25.38%～37.85%和2.70%～8.38%，隨著普玉米添加量的增加，除5：5比例混貯處理WSC含量顯著下降外（P＜0.05），不同比例混貯中DM和WSC含量逐漸增加，CP、ADF、NDF含量和氨態(tài)氮/總氮逐漸下降。這證明糯玉米鮮樣的水分含量較高，WSC含量低，缺乏供乳酸菌發(fā)酵的底物，不利于乳酸菌的大量繁殖，隨著普玉米添加量的逐漸增加，其發(fā)酵底物WSC含量逐漸增加，有機(jī)酸含量也隨之增加，形成較好的酸性環(huán)境；氨態(tài)氮/總氮逐漸下降是因?yàn)镃P含量減少，使不良的粗蛋白質(zhì)降解減少。NDF和ADF是表示飼料中纖維成分的兩個(gè)重要指標(biāo)，能夠反映纖維質(zhì)量好壞和飼料的有效能值，進(jìn)而影響飼料的消化率（司丙文，2012）。ADF、NDF含量的下降，可使青貯樣品的消化率得到有效的改善。

青貯飼料是在厭氧條件下利用青貯原料上的乳酸菌發(fā)酵作用，促進(jìn)或抑制微生物發(fā)酵，使pH下降而保存的飼料（玉柱等，2010）。在乳酸菌的發(fā)酵作用下，生成大量有機(jī)酸，進(jìn)而抑制在酸環(huán)境中不能繁殖的其他有害微生物（馬棟梁，2009）。本試驗(yàn)中，各處理乳酸含量均高于80%，因此可認(rèn)為各處理青貯樣品均以同型乳酸發(fā)酵為主。本試驗(yàn)中，青貯原料附著微生物數(shù)量最多的是乳酸菌，但是酵母菌的數(shù)量也很多，這可能是由于測定時(shí)存在取樣不當(dāng)，造成有氧發(fā)酵。酵母菌是一種兼性細(xì)菌，與空氣接觸后生長迅速，會(huì)使pH升高，適口性變差，消化率降低，造成營養(yǎng)物質(zhì)及能量損失，青貯過程中可通過厭氧管理和添加乳酸菌的方式避免酵母菌等有害微生物的滋生（司丙文，2012）。

4 結(jié)論

糯玉米單獨(dú)青貯效果較差，通過添加普玉米可顯著降低糯玉米青貯飼料中NDF、ADF以及丁酸含量和氨態(tài)氮/總氮的比值，同時(shí)增加DM和WSC含量，當(dāng)糯玉米和普玉米按3:7混貯時(shí)，效果最佳。