田宇杰　徐麗　陳強(qiáng)　岑永秀

2010年4月我國首次暴發(fā)鴨坦布蘇病毒病，并在短短數(shù)月內(nèi)迅速蔓延至江蘇、浙江、福建等多個(gè)東南沿海省份及北方部分地區(qū)。病鴨感染后主要表現(xiàn)為采食驟降、產(chǎn)蛋減少乃至停產(chǎn)，精神沉郁、共濟(jì)失調(diào)、嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡。該病傳播迅速，已成為危害水禽養(yǎng)殖的重要傳染病之一，因此在生產(chǎn)實(shí)際中做好鴨坦布蘇病毒病的防控就顯得尤為重要。

一、病原學(xué)

鴨坦布蘇病毒屬于黃病毒科、黃病毒屬、恩塔亞病毒病群，病毒粒子呈球形，直徑約為45-50nm，具有囊膜結(jié)構(gòu)。該病毒不耐熱，不耐酸，對(duì)去氧膽酸鹽、乙醚敏感，常規(guī)條件下病毒無血凝性。鴨坦布蘇病毒易于鴨胚增殖，且經(jīng)尿囊腔接種可在雞胚上增殖;鴨坦布蘇病毒為單股正鏈RNA病毒，具有典型黃病毒基因組結(jié)構(gòu)，病毒RNA全長10990nt，編碼3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白，其中結(jié)構(gòu)蛋白E蛋白是病毒囊膜上的主要抗原蛋白，與病毒的吸附、入侵、膜融合及成熟等相關(guān)。

二、流行病學(xué)

國外于1955年，在馬來西亞吉隆坡的庫蚊樣品中首次分離到坦布蘇病毒，隨后相繼在馬來西亞沙撈越及泰國地區(qū)的蚊蟲樣本中檢出。2000年，kono等從馬來西亞霹靂州4周齡肉雞體內(nèi)分離到Sitiawan病毒，該病毒與坦布蘇病毒遺傳學(xué)關(guān)系密切，感染雞群表現(xiàn)為生長緩慢、共濟(jì)失調(diào)等臨床癥狀，同時(shí)并發(fā)有神經(jīng)性腦炎。我國于2010年4月首次從福建、浙江、安徽等養(yǎng)鴨場密集區(qū)域爆發(fā)坦布蘇病毒感染，并迅速蔓延至東南沿海省份及北方部分地區(qū)。坦布蘇病毒感染宿主十分廣泛，能感染櫻桃谷鴨、番鴨、紹興鴨、麻鴨、康貝爾鴨等多個(gè)品種的家養(yǎng)鴨，此外還能感染雞、鵝、肉鴿等，其中鴨與鵝高度易感，雞次之;動(dòng)物的易感性除品種外還與日齡相關(guān)，5日齡至2周齡的櫻桃谷鴨易感，5周齡后易感性下降。

黃病毒屬病毒的傳播媒介通常為蚊蟲、蜱蟲等節(jié)肢動(dòng)物，作為黃病毒屬成員的坦布蘇病毒的傳播媒介為庫蚊，蚊子也是其潛在的傳播媒介。目前坦布蘇病毒主要以水平傳播為主，但有研究表明坦布蘇病毒可通過種鴨、種蛋的方式進(jìn)行垂直傳播。

三、臨床癥狀

病鴨在臨床上主要表現(xiàn)為采食量突然下降、產(chǎn)蛋率驟減，甚至停產(chǎn)。部分感染鴨出現(xiàn)明顯的排綠色稀便現(xiàn)象，并伴有精神沉郁、喜臥等表現(xiàn)。感染初期病鴨通常采食量明顯減少，縮脖、一段時(shí)間后可出現(xiàn)角弓反張、腿癱、身體震顫等神經(jīng)癥狀;感染后4-7日為死亡高峰期，一般與感染13天后逐步恢復(fù)采食，但會(huì)出現(xiàn)生長緩慢，產(chǎn)蛋率低下的情況。

四、診斷

目前通常根據(jù)感染動(dòng)物的臨床特征及剖檢病變作出初步診斷，再依據(jù)試驗(yàn)室檢測確診，實(shí)驗(yàn)室確診通常包括病原的分離、分子生物學(xué)鑒定及免疫學(xué)檢測等技術(shù)手段。

1、病毒分離鑒定

利用滅菌生理鹽水將病鴨的腦、脾臟、卵巢等組織研磨完全，離心取上清過濾，經(jīng)尿囊腔接種9-12日齡SPF鴨胚，連續(xù)盲傳3代后感染的死亡鴨胚可見有明顯胚體有明顯的水腫、出血現(xiàn)象，部分胚體可見壞死灶。

2、血清學(xué)檢測

血清學(xué)檢測可通過免疫沉淀、免疫凝聚反應(yīng)、免疫雙擴(kuò)散等方法檢測，此外免疫熒光、免疫電鏡等方法有較高靈敏度，但其價(jià)格昂貴，不適于大規(guī)模應(yīng)用;目前利用最廣泛的為酶聯(lián)免疫測定技術(shù)，該方法具有特異、靈敏、簡單、穩(wěn)定、快速等優(yōu)點(diǎn)。其中間接免疫熒光與免疫組化可檢測感染細(xì)胞與組織中的病毒，實(shí)現(xiàn)病原的定位，是目前檢測鴨坦布蘇病毒的主要方法之一。

3、分子生物學(xué)方法

分子生物學(xué)診斷技術(shù)包括RT-PCR、套式PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、巢式PCR及RT-LAMP等，具有快速、靈敏度高及特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，是實(shí)驗(yàn)室常用的病原檢測手段。其中RT-PCR應(yīng)用較為廣泛，該方法將采集的病料提取病毒RNA后經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄為rDNA，再根據(jù)DTMUV的NS5基因或E基因設(shè)計(jì)并合成引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增基因序列，具有敏感性好、特異性強(qiáng)等優(yōu)勢。黃欣梅等建立的坦布蘇套式RT-PCR檢測方法經(jīng)過2次PCR擴(kuò)增，該方法快速、敏感、特異，適用于流行病學(xué)調(diào)查和臨床診斷。

五、鴨坦布蘇病毒病的防制

1、疫苗預(yù)防

蔡絲絲等將坦布蘇病毒尿囊液濃縮經(jīng)0.3%甲醛滅活后間隔14天三次免疫產(chǎn)蛋雞后，收集到的高免雞蛋制備的凍干卵黃抗體能有效預(yù)防坦布蘇病毒的感染。胡紫霞等采用硫酸銨鹽析法及氯仿抽提法提純的卵黃抗體對(duì)感染AF-F10毒株坦布蘇的產(chǎn)蛋鴨具有明顯的治療效果。傳統(tǒng)滅活疫苗免疫效果好、制備容易、保護(hù)率高、安全性好、能有效激活體液免疫，但滅活疫苗不能激發(fā)細(xì)胞免疫，常需加強(qiáng)免疫以達(dá)到理想的抗體水平，所以傳統(tǒng)疫苗仍舊存在不足之處。除了應(yīng)用較為廣泛的傳統(tǒng)滅活疫苗外，基因工程疫苗作為當(dāng)今的研究熱點(diǎn)其原理是通過基因重組技術(shù)，將遺傳物質(zhì)定向插入細(xì)菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞或酵母菌中，表達(dá)后的產(chǎn)物經(jīng)純化后制備成疫苗?；蚬こ桃呙缇哂胁粠И?dú)立相關(guān)基因的特點(diǎn)，還可制備出能預(yù)防多種疾病的多價(jià)苗，也具有可觀的應(yīng)用前景。

2、生物安全措施

當(dāng)前我國水禽養(yǎng)殖主要為開放式飼養(yǎng)，可采取的生物安全措施受到較大限制，且鴨坦布蘇病毒主要通過庫蚊進(jìn)行傳播，所以在夏季蚊蠅易滋生的季節(jié)尤其需要注意做好驅(qū)蚊、滅蚊工作，經(jīng)常對(duì)周圍環(huán)境進(jìn)行清理消毒，及時(shí)徹底地清理污水、糞便等。合理優(yōu)化選擇養(yǎng)殖場地址，遠(yuǎn)離公路和活禽交易市場、屠宰場、畜禽產(chǎn)品加工廠等地區(qū);引種時(shí)嚴(yán)禁從疫區(qū)引種。

3、藥物治療

目前尚無針對(duì)該病的有效治療措施，發(fā)病初期可采用復(fù)方白龍散、清瘟敗毒散、雙黃連、黃芪多糖等進(jìn)行對(duì)癥治療。在飼料中添加出復(fù)合維生素以外的仙人掌、白術(shù)、白花蛇草等可減輕病鴨的臨床癥狀。與此同時(shí)環(huán)丙沙星等采用抗生素可有效防止繼發(fā)感染，但一般不建議對(duì)病鴨進(jìn)行藥物治療，對(duì)疑似病鴨要及時(shí)隔離，死亡鴨要進(jìn)行焚燒等無害化處理，防止大面積流行。

4、綜合防治措施

目前針對(duì)該病尚無高效的免疫療法，生產(chǎn)中主要通過預(yù)防為主、綜合防治來減少養(yǎng)殖過程中因感染該病導(dǎo)致的經(jīng)濟(jì)損失。在鴨坦布蘇病毒流行地區(qū)或受威脅區(qū)可以通過以下幾點(diǎn)來實(shí)現(xiàn)較好的防控：

（1）全價(jià)料飼養(yǎng)，日常可添加多種氨基酸和維生素，同時(shí)保持鴨舍內(nèi)溫度和濕度的適宜性，避免鴨群在免疫過程中出現(xiàn)過多的應(yīng)激。

（2）做好經(jīng)常性的環(huán)境消毒工作，尤其是針對(duì)運(yùn)輸車輛及設(shè)備，完善各項(xiàng)消毒設(shè)施，人員進(jìn)出必須更換工作服等經(jīng)嚴(yán)格消毒，同時(shí)應(yīng)盡量減少人員及車輛的流動(dòng)。

（3）定期對(duì)員工展開專業(yè)培訓(xùn)，提高員工專業(yè)素質(zhì)和生物安全意識(shí)。

（作者單位：1.561000貴州省安順市西秀區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心;2.561000貴州省安順市西秀區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局畜禽品種改良站）