王 瑛，王麗霞，買(mǎi)買(mǎi)提·艾買(mǎi)提

（1.黑龍江省藥品檢驗(yàn)研究中心，黑龍江 哈爾濱 150001；2.哈爾濱市食品藥品行政執(zhí)法局，黑龍江 哈爾濱 150001；3.新疆哈密市食品藥品檢驗(yàn)所，新疆 哈密 839000）

對(duì)牛黃上清丸（大蜜丸）的處方及其制造工藝進(jìn)行研究，檢驗(yàn)牛黃上清丸（大蜜丸）之中生藥原粉含量，應(yīng)用《藥典四部附錄通則（2015版）》--1107相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷，牛黃上清丸（大蜜丸）之中需氧菌總數(shù)≤3×104cfu/g，霉菌和酵母菌總數(shù)應(yīng)≤102 cfu，沙門(mén)菌每10 g不得檢出，大腸埃希菌每克不得檢出，耐膽鹽革蘭陰性菌每克應(yīng)＜102cfu[1]。

1 儀器與材料

1.1 儀器

超凈臺(tái)生產(chǎn)廠家：AIRTECH，儀器型號(hào)：SW-CJ-2FD；電子天平生產(chǎn)廠家：METTLER，儀器型號(hào)：PL202-S；勻漿儀生產(chǎn)廠家：泰林生物技術(shù)設(shè)備有限公司，儀器型號(hào)：HTY-761；生物安全柜生產(chǎn)廠家：HealForce，儀器型號(hào)：Hfsafe-1200A2；電熱恒溫培養(yǎng)箱生產(chǎn)廠家：天津市泰斯特儀器有限公司，儀器型號(hào)：DH5000A；生化培養(yǎng)箱生產(chǎn)廠家：上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠，儀器型號(hào)：SPX-250B-Z型；高壓蒸汽滅菌器生產(chǎn)廠家：Panasonic，儀器型號(hào)：MLS-3781L-PC；培養(yǎng)箱生產(chǎn)廠家：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，儀器型號(hào)：MJPS-250；渦旋混合器生產(chǎn)廠家：IKA，儀器型號(hào)：VORTEX3。

1.2 培養(yǎng)基

培養(yǎng)基符合《中國(guó)藥典》2015年版四部附錄通則的相關(guān)規(guī)定[2]，包括胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖肉湯、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱液體培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、RV沙門(mén)增菌液體培養(yǎng)基、木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基、腸道菌增菌肉湯培養(yǎng)基、紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基等。

1.3 菌株

全部所應(yīng)用的菌株均為中國(guó)食品藥品檢定研究院提供的5代內(nèi)菌種，包括金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉、乙型副傷寒沙門(mén)菌、大腸埃希氏菌等。

2 方法和結(jié)果

2.1 微生物計(jì)數(shù)法適用性試驗(yàn)

采用胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基實(shí)施銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌及枯草芽孢桿菌接種，培養(yǎng)后應(yīng)用氯化鈉溶液10倍遞增稀釋，菌懸液制成每含菌量≤104 cfu/mL；黑曲霉斜面混合5 mL聚山梨酯及無(wú)菌氯化鈉溶液，后吸出孢子懸液10倍稀釋，孢子懸液制成含菌量≤104 cfu/mL。采用沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基實(shí)施白色念珠菌接種，培養(yǎng)后應(yīng)用氯化鈉溶液10倍遞增稀釋，菌懸液制成含菌量≤104 cfu/mL。

取5份9.9 mL供試液，分別加入銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉、白色念珠菌，分別為0.1 mL混勻，抽取1 mL置入到無(wú)菌平皿中，置于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基中，溫度≤45℃，平行制備2個(gè)平皿。

取2份9.9 mL供試液，分別加入黑曲霉菌、白色念珠菌試驗(yàn)菌菌液，分別為0.1 mL，取1 mL置入到無(wú)菌平皿中，置于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，溫度≤45℃，平行制備2個(gè)平皿。

對(duì)照組應(yīng)用供試液與稀釋液混合后實(shí)施各項(xiàng)操作。

試驗(yàn)組平均菌落數(shù)與供試品對(duì)照組平均菌落數(shù)之差，同菌液對(duì)照組平均菌落數(shù)的比值為菌回收率，見(jiàn)表1。

表1 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)回收率

2.2 控制菌檢查法適用性試驗(yàn)

取供試液（供試品）與100 mL胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基實(shí)施接種，分別放置1 mL大腸埃希菌菌液、乙型副傷寒沙門(mén)菌菌液；取供試液（供試品）與100 mL10 mL腸道菌增菌液體培養(yǎng)基實(shí)施接種，分別放置1 mL大腸埃希菌菌液、銅綠假單胞菌菌液。陰性對(duì)照試驗(yàn)通過(guò)稀釋液予以檢驗(yàn)，見(jiàn)表2。

表2 控制菌檢查法適用性試驗(yàn)情況

3 討 論

企業(yè)提供的牛黃上清丸經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)可知，牛黃上清丸（大蜜丸）抑菌性欠佳，在培養(yǎng)基稀釋法檢驗(yàn)方式，能夠降低其抗菌活性、藥渣對(duì)菌落計(jì)數(shù)結(jié)果所產(chǎn)生的影響。對(duì)比《中國(guó)藥典》2015版與2010版試驗(yàn)方法，可知2010版方法并不會(huì)因?yàn)?015版方法改變而完全廢棄，它可作為探索新方法的參考，雖然2010版方法不能真實(shí)的反映藥品對(duì)菌液的抑制能力，但是它也客觀的體現(xiàn)出藥品是否具有抑菌性、抑菌能力的強(qiáng)弱。