胡旭倩，姚菲菲，易會(huì)建，蔣清芳

1.浙江贊宇科技股份有限公司，浙江杭州 310009；2.浙江金正檢測(cè)有限公司，浙江義烏 322000

維生素是維持動(dòng)物正常生理機(jī)能和保持動(dòng)物正常生長(zhǎng)發(fā)育必需的一類微量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。目前，維生素是飼料添加劑中最常使用的物質(zhì)，分為脂溶性維生素和水溶性維生素，每一種維生素都起著其他物質(zhì)不可代替的特殊作用。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260 超高效液相色譜儀（配紫外檢測(cè)器）（美國(guó)Agilent 公司）；高速離心機(jī)（德國(guó)Sartorius 公司）；純水凈化儀（杭州永潔達(dá)凈化科技有限公司）；pH 計(jì)（Delta320）。

甲醇為色譜純（美國(guó)大地公司）；EDTA，庚烷磺酸鈉，冰乙酸，三乙胺，磷酸二氫鈉，鹽酸（均出自上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）[1]。

1.2 方法

1.2.1 磷酸二氫鈉溶液的配制

3.9 g 磷酸二氫鈉溶于1 000 mL 超純水中，過(guò)0.45 μm 水系濾膜。

1.2.2 提取劑的配制

稱取50 mg EDTA，加入適量超純水，超聲使之完全溶解，加入25 mL 冰乙酸，5 mL 三乙胺，用超純水定容至1 000 mL，搖勻，取該溶液750 mL 與250 mL 甲醇混合，超聲脫氣待用。

1.2.3 流動(dòng)相的配制

稱取1.01 g 庚烷磺酸鈉，加入適量超純水，超聲使之完全溶解，加入5 mL冰乙酸，0.5 mL三乙胺，用超純水定容至1 000 mL，搖勻，取該溶液750 mL與250 mL 甲醇混合，超聲脫氣備用。

1.2.4 提取方法

稱取混合均勻的復(fù)合飼料3 g 于100 mL 棕色容量瓶中，加入適量酸性提取劑（見(jiàn)本文1.2.2），于100 ℃水浴中提取30 ～40 min，期間震蕩數(shù)次，防止結(jié)塊并提高提取效率。待提取完成并冷卻后，用提取劑定容至刻度線，過(guò)濾，濾液過(guò)0.45 μm濾膜，待進(jìn)樣分析[2]。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件優(yōu)化

選取安捷倫C18 色譜柱（4.6 μm×250 mm），同一濃度進(jìn)樣，對(duì)庚烷磺酸鈉離子對(duì)溶液和甲醇的配比進(jìn)行研究，考察其保留時(shí)間、靈敏度及峰形，選取最優(yōu)的流動(dòng)相配比。本方法采用庚烷磺酸鈉離子對(duì)溶液:甲醇=75:25（V:V）的配比，可以有效縮短檢驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)并能同時(shí)改良峰形，可有效提高分離效率。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

單獨(dú)對(duì)維生素B1、B2、B6標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行進(jìn)樣，用UV 對(duì)200 ～350 nm 的波長(zhǎng)范圍進(jìn)行掃描，可發(fā)現(xiàn)維生素B1、B2、B6在分別在247 nm、267 nm、290 nm 的波長(zhǎng)處有最大的吸收，綜合考慮3 種維生素的紫外線吸收情況，本方法選擇280 nm 為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.3 提取條件選擇

本試驗(yàn)對(duì)同一個(gè)飼料樣品采用了超聲提取，振蕩提取以及水浴提取三種提取方式，并進(jìn)行了相應(yīng)的研究。通過(guò)比較，水浴提取較前兩種方法有更高的提取效率。

3 討論

本文建立了高效液相色譜同時(shí)測(cè)定飼料中維生素B1、B2、B6含量的方法。試樣中的維生素B1、B2、B6用酸性提取液水浴提取，定容和過(guò)濾后經(jīng)液相色譜分離檢測(cè)。本方法在保證準(zhǔn)確性好的同時(shí),盡可能提高了時(shí)效性和靈敏度，為同時(shí)測(cè)定飼料中維生素B1、B2、B6含量的研究提供了數(shù)據(jù)和基礎(chǔ)。