盛東峰

（周口師范學(xué)院，河南 周口466000）

肉骨粉是動物屠宰加工過程中的下腳料，產(chǎn)品蛋白含量高，氨基酸組成比較合理［1］，是一種公認的優(yōu)質(zhì)動物蛋白原料，適于與植物性蛋白搭配使用，降低生產(chǎn)成本，提高企業(yè)生產(chǎn)效益。

硫酸銅—氫氧化鈉法是測定飼料真蛋白比率的國際標(biāo)準方法，它準確性高、精確度好，常常被應(yīng)用于肉骨粉的蛋白含量測定，但這種方法耗時耗力、測定成本較高。三氯乙酸法是企業(yè)內(nèi)部經(jīng)過長期實踐總結(jié)出的一種簡易方法，具有操作簡單、實用性強的優(yōu)點。該研究擬用硫酸銅—氫氧化鈉法和三氯乙酸法兩種方法對5 種肉骨粉的真蛋白比率進行測定分析，以期為肉骨粉蛋白含量的測定檢驗提供高效的方法。

1 檢測原理

硫酸銅—氫氧化鈉法和三氯乙酸法都是利用飼料樣品在熱水溶液中，非蛋白態(tài)的含氮化合物被溶解，同時浸出蛋白質(zhì)加入過量的蛋白質(zhì)沉淀劑，蛋白質(zhì)被沉淀而形成不溶于熱水的化合物的特點，通過沖洗、過濾使真蛋白質(zhì)沉淀下來。然后，再將沉淀物用凱氏定氮法測定出真蛋白的含量［2］。

2 材料與方法

2.1 試驗樣品

5種肉骨粉購自農(nóng)資市場。

2.2 試驗儀器

研缽、孔徑0.45 mm 分樣篩（40 目）、分析天平（感量0.000 1 g）、高溫爐、電爐（1 000 W）、滴定管（酸式，50 ml）、凱氏燒瓶（250 ml）、凱氏蒸餾裝置、錐形瓶（250 ml）、容量瓶（100 ml）。

2.3 試驗試劑

硫酸（化學(xué)純）；硫酸銅溶液（10%水溶液，W/V）；氫氧化鈉溶液（40%水溶液，W/V）；硼酸溶液（2%水溶液，W/V）；氫氧化鈉溶液（2.5%水溶液，W/V）；氯化鋇溶液（5%水溶液W/V）；鹽酸溶液（2 mol/L）；三氯乙酸溶液（10%水溶液）；甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液；鹽酸標(biāo)準溶液（0.05 mol/L）；蔗糖。

2.4 硫酸銅—氫氧化鈉法蛋白含量測定

稱取試樣1～2 g（精確到0.1 mg）于200 ml 燒杯中，加蒸餾水50 ml 煮沸，加入10%的硫酸銅溶液20 ml 和2.5%的氫氧化鈉溶液20 ml，邊加邊攪拌，加完后繼續(xù)攪拌1 min，放置2 h 以上或靜置過夜，沉淀物過濾，用70 ℃以上熱水反復(fù)洗殘渣，直至濾液無SO42-為止（取5%氯化鋇試液5滴于表面皿中，加2 mol/l鹽酸1滴，滴入濾液，在黑色背景處觀察無白色沉淀）。將濾紙與殘渣包好，放入烘箱，75 ℃干燥2 h。后續(xù)步驟參照粗蛋白的測定［3］。

2.5 三氯乙酸法蛋白含量測定

稱取1.5 g 試樣（精確到0.000 1 g），加適量三氯乙酸（10%水溶液，要求三氯乙酸的質(zhì)量為樣品質(zhì)量的5倍），攪拌凈置10 min，全部轉(zhuǎn)移到漏斗中過濾，并用三氯乙酸溶液洗滌濾渣2遍，于105 ℃下烘干，小心折疊放入250 ml凱式燒瓶，按凱氏定氮法測定蛋白含量［4］。

真蛋白比率（%）=（真蛋白含量*100）/粗蛋白含量。

3 結(jié)果與分析

硫酸銅—氫氧化鈉法和三氯乙酸法分別對5 種肉骨粉樣品的真蛋白比率的測定結(jié)果見表1。

表1 兩種方法真蛋白比率測定結(jié)果

三氯乙酸法和硫酸銅—氫氧化鈉法的測定結(jié)果統(tǒng)計分析見表2。

表2 兩種方法結(jié)果統(tǒng)計處理

由表1和表2可以看出：硫酸銅—氫氧化鈉法和三氯乙酸法所測結(jié)果的精確度均較好，兩者測定結(jié)果的標(biāo)準差0.11、變異系數(shù)0.22，均符合國際標(biāo)準的誤差規(guī)定要求。結(jié)果顯示三氯乙酸法所測結(jié)果比硫酸銅—氫氧化鈉法低約0.49個百分點，分析其原因可能與肉骨粉蛋白質(zhì)的沉淀時間不夠充分有關(guān)，硫酸銅—氫氧化鈉法蛋白質(zhì)的沉淀時間≥2 h，而三氯乙酸法僅僅靜置10 min［5］?？傮w而言，三氯乙酸法有使用方便、操作簡單、節(jié)約試劑、成本低等優(yōu)點，可大大減少試驗耗時，提高實驗室工作效率。

該試驗對常用的硫酸銅—氫氧化鈉法和三氯乙酸法兩種測定飼料原料蛋白質(zhì)的方法進行了比較研究，結(jié)果表明，兩種方法都能很好地測定肉骨粉中真蛋白比率，和國標(biāo)硫酸銅—氫氧化鈉法相比，三氯乙酸法具有省時省力、成本低效益高的優(yōu)點，可以在試驗室推廣應(yīng)用。