王 磊，姚 泓，湯 新，吳希陽(yáng)

（暨南大學(xué)理工學(xué)院，廣東 廣州 510632）

Akkermansia muciniphila定植在人類腸道黏液層，是可特異性降解黏蛋白的革蘭氏陰性嚴(yán)格厭氧菌，2004年Derrien等[1]從人體糞便中分離得到，其豐度占腸道總細(xì)菌豐度的比率約為1%～5%[2-3]，是豐度較高的菌屬之一。A. muciniphila作為偏好定植在腸道黏液層中的細(xì)菌，既降解黏蛋白維持自身豐度，又刺激機(jī)體黏液層增厚[1-3]，維持機(jī)體健康狀況。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)A. muciniphila的豐度在患腸道紊亂或某類疾病的人群中較低，如炎癥性腸病、自閉癥、肥胖或先天性過(guò)敏癥等[4]，其定植情況是機(jī)體健康水平的標(biāo)志之一[5-7]。

越來(lái)越多的研究證明A. muciniphila在人體腸道中具有重要的功能性，但是有部分人群腸道中A. muciniphila的豐度可能較低，甚至沒(méi)有定植[8-10]。對(duì)已有研究成年人體腸道中的A. muciniphila定植率分析發(fā)現(xiàn)：巴西人群的定植率為79.17%[11]，歐洲人群為97.98%[12]，中國(guó)南方地區(qū)人群約為54%[13]，說(shuō)明因地域不同，人群居住的環(huán)境和飲食結(jié)構(gòu)存在差異，可能對(duì)A. muciniphila定植率存在影響[14]。根據(jù)以上研究成果，提出對(duì)應(yīng)的假設(shè)：中國(guó)人群的A. muciniphila定植率可能低于國(guó)外人群，因此需要通過(guò)一些方式去改變現(xiàn)狀。本研究通過(guò)收集廣東廣州地區(qū)健康的成年人體糞便，分析A. muciniphila的定植情況；將團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)的符合東方人飲食習(xí)慣的人體胃腸道微生態(tài)消化模擬系統(tǒng)[15]為研究基礎(chǔ)，選擇3 個(gè)無(wú)A. muciniphila定植的志愿者糞便為接種物，進(jìn)行 1×108CFU/mL豐度的A. muciniphila干預(yù)，通過(guò)宏基因組測(cè)序技術(shù)聯(lián)合實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time quantitative polymerase chain reaction，real-time PCR）系統(tǒng)研究A. muciniphila的干預(yù)所引起的腸道菌群變化。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

A. muciniphilaBAA-835 ATCC 美國(guó)菌種保藏中心。

Mucin Type II 美國(guó)Sigma公司；SYBR?Premix DimerEraser? 日本TaKaRa公司；MRS培養(yǎng)基、腦心浸液肉湯（brain heart infusion broth，BHI） 北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司；糞便基因組DNA提取試劑盒（DP328）、半胱氨酸、血紅素、細(xì)菌組DNA提取試劑盒、糞便DNA提取試劑盒 天根生化科技（北京）有限公司；阿拉伯半乳聚糖、果膠、木聚糖、吐溫80 青島海博科技有限公司；淀粉、葡萄糖、酵母提取物、蛋白胨 上海立菲生物技術(shù)有限公司；碳酸氫鈉、氯化鈉、磷酸氫二鉀、氯化鈣 天津市大茂化學(xué)試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

EM05時(shí)間控制器、H0001速率調(diào)節(jié)器 上海臺(tái)松電子科技有限公司；pH/ORP pH控制器、HM550紅外測(cè)溫儀 廣州聯(lián)測(cè)儀表電子有限公司；RS48蠕動(dòng)泵 重慶杰恒蠕動(dòng)泵廠；LZDX-50KBS立式壓力蒸汽滅菌器 上海申安醫(yī)療器械廠；HH-4恒溫水浴鍋 上海歐蒙實(shí)業(yè)有限 公司；20 L氮?dú)馄?泰順醫(yī)療康復(fù)有限公司；PL602-S電子天平 梅特勒-托利多儀器有限公司；GT16-3高速離心機(jī) 北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司；KDC-12低速離心機(jī) 中佳設(shè)備有限公司。

1.3 方法

1.3.1A. muciniphila的培養(yǎng)

將100 μLA. muciniphila接種到10 mL BHI液體培養(yǎng)基（添加1% Mucin Type II粉末，下同），37 ℃厭氧培養(yǎng)48 h；再將培養(yǎng)后的A. muciniphila菌液擴(kuò)大培養(yǎng)，于BHI液體培養(yǎng)48 h后10 000 r/min、4 ℃離心5 min，洗滌后與糞便上清液混勻，作為接種液添加到體外腸道消化模擬系統(tǒng)[2,16-18]。

1.3.2 志愿者的選擇和接種液的配制

收集廣東廣州地區(qū)131 位健康人（年齡18～60 歲）的新鮮糞便，所有志愿者在過(guò)去半年內(nèi)未服用過(guò)抗生素類藥物、益生元和益生菌等補(bǔ)充劑。將收集到的新鮮糞便及時(shí)保存于-80 ℃冰箱，待到使用時(shí)統(tǒng)一解凍，使用糞便基因組DNA提取試劑盒提取DNA，用于real-time PCR分析。

從所有人群中挑選3 個(gè)無(wú)A. muciniphila定植的志愿者（2 男1 女），每人取糞便20 g，總共60 g，加入無(wú)菌生理鹽水210 mL，無(wú)菌甘油30 mL，在無(wú)菌的勻漿儀中勻漿約5 s。放于6 支50 mL離心管中，通入N2。 2 000 r/min、4 ℃冷凍離心5 min，將上清液分別轉(zhuǎn)移到6 支50 mL離心管中（每支約35 mL），在4 ℃中保存（當(dāng)天使用）。

1.3.3 營(yíng)養(yǎng)液和消化液的配制

營(yíng)養(yǎng)液配方參照S H I M E 體系培養(yǎng)基[19-20]：阿拉伯半乳聚糖1 g/L、果膠2 g/L、木聚糖1 g/L、淀粉3 g/L、葡萄糖0.4 g/L、酵母提取粉3 g/L、蛋白胨1 g/L、半胱氨酸0.5 g/L、NaHCO30.4 g/L、吐溫1 mL/L、Mucin Type II 4 g/L、NaCl 0.08 g/L、 K2H P O40 . 0 4 g / L 、 C a C l20 . 0 0 8 g / L 、MgSO4·7H2O 0.008 g/L、MnSO4·H2O 0.559 67 g/L、FeSO4·7H2O 0.183 02 g/L、CoSO4·7H2O 0.181 37 g/L、ZnSO4·7H2O 0.178 10 g/L、CuSO4·5H2O 0.017 90 g/L、 AlK(SO4)2·12H2O 0.018 37 g/L、H3BO30.01 g/L、NiCl2·6H2O 0.1 g/L、NaMoO4·2H2O 0.014 24 g/L、Na2SeO3·5H2O 0.015 21 g/L、生物素0.002 g/L、泛酸鹽0.01 g/L、煙酰胺0.005 g/L、VB120.000 5 g/L、硫胺0.004 g/L、甲萘醌0.001 g/L、對(duì)-氨基苯甲酸0.005 g/L、血紅素0.005 g/L。將所有元素按照此配方配制，高溫高壓滅菌15 min后備用。

胃液配方：N a C l 2 g/1 0 0 m L、胃蛋白酶3.2 g/100 mL、濃鹽酸7 mL/100 mL；胰液配方：胰蛋白酶0.9 g/L、膽汁鹽6 g/L、NaHCO312.5 g/L。胰液和胃液使用無(wú)菌水溶解后紫外照射30 min，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.4 儀器的調(diào)試與運(yùn)行

將消化模型按照實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行組裝，組裝完成后進(jìn)行高壓滅菌；連接腸道消化模擬罐，分別為實(shí)驗(yàn)組（接種液為已經(jīng)混合1×108CFU/mL A. muciniphila菌液，2 組平行A1和A2）、對(duì)照組（C），提前通入N230 min保證厭氧條件，運(yùn)行37 ℃水浴系統(tǒng)保持溫度穩(wěn)定性。

胃消化階段：準(zhǔn)確取200 mL營(yíng)養(yǎng)液與120 mL胃液（比例為5∶3），通過(guò)pH值控制系統(tǒng)調(diào)節(jié)pH 2.0～2.3，每小時(shí)通氣10 min，總共反應(yīng)2 h。小腸消化階段：向消化罐中分別加入90 mL胰液，控制pH 6.0～7.5，pH 6.75最佳，每小時(shí)通氣10 min，總共反應(yīng)4 h。大腸消化階段：將消化罐的pH值調(diào)節(jié)在6.7左右，整個(gè)過(guò)程保持N2的通入，再分別加入上述配制的接種液70 mL，取接種液作為起點(diǎn)，并分別在2、14、24 h進(jìn)行取樣，大腸消化階段共24 h，過(guò)程保證pH 6.5～6.8，保證N2的不斷注入，維持厭氧環(huán)境；取出的消化液注入到離心管中，快速放入 -80 ℃冰箱，待后續(xù)分析。

1.3.5 發(fā)酵液DNA的提取

將每個(gè)時(shí)間段的樣品在37 ℃水浴解凍，上下顛倒搖勻后，吸取500 μL液體至離心管中，10 000 r/min、4 ℃離心2 min后，按照試劑盒的方法提取DNA。

1.3.6 不同菌屬的real-time PCR定量分析

不同菌屬real-time PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：將Escherichia coliBNCC 133264（用于總菌屬的定量）、Bifidobacterium lactisCIP 105265、Lactobacillus rhamnosusATCC 7469、Bacteroides fragilisATCC 25285以及A. muciniphilaBAA-835 ATCC作為標(biāo)準(zhǔn)菌株培養(yǎng)，再通過(guò)血球計(jì)數(shù)板分別測(cè)定每種菌液濃度后，提取相應(yīng)菌液DNA；將每種菌液DNA進(jìn)行10 倍梯度稀釋（跨度為1～107倍），作為模板進(jìn)行real-time PCR，且進(jìn)行模板濃度與菌液濃度換算，其中所有擴(kuò)增引物均對(duì)應(yīng)菌屬的16S rDNA[21]；保證每條標(biāo)準(zhǔn)曲線的擴(kuò)增效率均在90%～110%之間，如樣品模板DNA濃度超過(guò)濃度范圍，對(duì)模板進(jìn)行稀釋后重新分析。

采用SYBR Green I染料法，對(duì)樣品DNA進(jìn)行定量反應(yīng)（每種菌屬的所有樣本同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)，設(shè)置3 組平行），使用ABI StepOne Plus系統(tǒng)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，其體系為20 μL：10 μL SYBR Green PCR Master Mix，6.4 μL ddH2O，0.4 μL ROX染料），0.6 μL 10 μmol/L上下游引物（表1），2 μL模板；反應(yīng)程序見(jiàn)表2。

表 1 不同菌株的引物序列Table 1 Primer sequences for different bacteria

表 2 不同菌屬的反應(yīng)程序Table 2 Real-time PCR programs for different species

1.3.7 發(fā)酵液的高通量測(cè)序分析

將發(fā)酵液2、14、24 h時(shí)間段的DNA樣本（9 個(gè)）利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的純度和濃度，取適量的樣品于離心管中，由上海歐易生物有限公司提供Illumina MiSeq測(cè)序服務(wù)，主要針對(duì)細(xì)菌的16S rRNA基因的V3-V4區(qū)相應(yīng)分析。

1.4 數(shù)據(jù)分析

本研究real-time PCR數(shù)據(jù)分析為Stepone plus system軟件處理，其余數(shù)據(jù)處理為Excel 2016與SPSS 22.0處理， P＜0.05，差異顯著。作圖軟件為GraphPad Prism 7.0。

2 結(jié)果與分析

2.1 A. muciniphila定植情況分析

圖 1 不同區(qū)域的A. muciniphila定植率比較Fig. 1 Comparison of colonization rates of A. muciniphila in populations from different regions

經(jīng)過(guò)real-time PCR分析，在131 人中有117 人A. muciniphila 定植陽(yáng)性，定植率為89.31%，本研究與歐洲[2]、華南地區(qū)[16]定植率對(duì)比如圖1所示。A. muciniphila定植平均豐度為5.825 （lg（CFU/mL））。

2.2 菌屬的real-time PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線

總菌屬標(biāo)準(zhǔn)曲線的菌落計(jì)數(shù)為4.52×109CFU/mL，擴(kuò)增效率為92.039%，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度R2為0.999；Bifidobacterium標(biāo)準(zhǔn)曲線的菌落計(jì)數(shù)為2.56×108CFU/mL， 擴(kuò)增效率為90.509%，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度R2為0.991；Lactobacillus標(biāo)準(zhǔn)曲線的菌落計(jì)數(shù)為4.74×109CFU/mL， 擴(kuò)增效率為97.251%，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度R2為0.995；Bacteroides標(biāo)準(zhǔn)曲線的菌落計(jì)數(shù)為5.645×108CFU/mL，擴(kuò)增效率為105.919%，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度R2為0.997；Akkermansia標(biāo)準(zhǔn)曲線的菌落計(jì)數(shù)為3.84×108CFU/mL，擴(kuò)增效率為94.859%，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度R2為1.0，所有菌屬系數(shù)均為合理范圍內(nèi)，具有定量意義。

2.3 不同菌屬real-time PCR定量結(jié)果

表 3 不同菌屬的定量結(jié)果Table 3 Real-time PCR results for different genera （lg（CFU/mL））

表 3 不同菌屬的定量結(jié)果Table 3 Real-time PCR results for different genera （lg（CFU/mL））

注：同行字母不同表示差異顯著（P＜0.05）。

菌屬 接種液 A1-2 h A1-14 h A1-24 h A2-2 h A2-14 h A2-24 h C-2 h C-14 h C-24 h總菌屬 11.443±0.05c 10.758±0.028f 10.915±0.019e 9.804±0.042i 11.103±0.047d 11.901±0.024a 10.062±0.019g 11.617±0.011b 11.48±0.021c 9.888±0.067h Bifidobacterium 5.335±0.024ab 5.045±0.01d 4.436±0.085e 3.592±0.026g 5.296±0.029bc 5.232±0.03c 3.707±0.04f 5.025±0.019d 5.03±0.03d 5.374±0.073a Bacteroides 7.815±0.016a 7.733±0.221a 5.211±0.053d 4.861±0.003e 7.535±0.004b 5.09±0.056d 4.411±0.008f 7.043±0.015c 5.108±0.009d 4.043±0.014g A. muciniphila 7.784±0.029e 7.584±0.027d 7.093±0.073c 6.311±0.094b 7.687±0.013de 8.103±0.015f 6.937±0.303c 0±0.0a 0±0.0a 0±0.0a Lactobacillus 9.8±0.048ab 8.956±0.035cd 10.008±0.014a 10.427±0.008a 9.349±0.078bc 10.314±0.074a 10.33±1.13a 9.094±0.016cd 8.964±0.055cd 8.515±0.064d

從表3可知，與接種液中的總菌屬比較，所有組的總菌屬在14 h后豐度呈現(xiàn)顯著性下降，說(shuō)明營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)開(kāi)始出現(xiàn)不足。對(duì)照組的A. muciniphila未檢測(cè)出，說(shuō)明志愿者的糞便中不含A. muciniphila定植，即使在檢測(cè)限外的豐度也不會(huì)出現(xiàn)大量增長(zhǎng)；實(shí)驗(yàn)組（A1、A2）的A. muciniphila在14 h前保持初始的高豐度（7（lg（CFU/mL）） 以上），以及出現(xiàn)少量增長(zhǎng)，說(shuō)明A. muciniphila可以在腸道菌群環(huán)境中維持生長(zhǎng)。

實(shí)驗(yàn)組（A1、A2）的Bacteroides屬與Bifidobacterium屬豐度均不斷下降，說(shuō)明A. muciniphila的加入可能增加了兩者的生存壓力；對(duì)照組的Bifidobacterium屬的豐度出現(xiàn)波動(dòng)性上升，說(shuō)明無(wú)A. muciniphila的存在對(duì)其生長(zhǎng)抑制性較小。在14 h前，實(shí)驗(yàn)組的Lactobacillus屬的豐度均出現(xiàn)上升，但對(duì)照組的豐度降低，說(shuō)明A. muciniphila可能對(duì)Lactobacillus屬具有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。

2.4 發(fā)酵液16S rDNA測(cè)序分析

由樣本菌屬水平分析（圖2）可知，實(shí)驗(yàn)組的Bacteroides屬均總體呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，對(duì)照組的24 h的Bacteroides呈現(xiàn)小幅上升，結(jié)果與real-time PCR的分析相匹配；24 h，實(shí)驗(yàn)組A1和A2的Lactobacillus屬豐度比對(duì)照組要高，而B(niǎo)ifidobacterium屬要低于對(duì)照組，整體趨勢(shì)與real-time PCR的分析相似。

圖 2 發(fā)酵液中的菌屬相對(duì)豐度的變化熱圖Fig. 2 Heat map showing changes in microbial abundance at the genus level in different samples

圖 3 發(fā)酵液中排名前30的菌種相對(duì)豐度變化Fig. 3 Changes in relative abundance of top 30 majormicrobial species in different fermented samples

如圖3所示，實(shí)驗(yàn)組A1和A2的菌種變化情況總體相同，說(shuō)明測(cè)序結(jié)果平行性較好，其主要變化趨勢(shì)為：發(fā)酵2、14 h和24 h，Bacillus subtilis相對(duì)豐度持續(xù)降低；兩組Lactobacillus lactis相對(duì)豐度總體呈現(xiàn)增長(zhǎng)；Oscillospiraceae bacterium VE202_24相對(duì)豐度均大量下降；Streptococcus gallolyticussubsp.macedonicus相對(duì)豐度均持續(xù)增長(zhǎng)；Lachnospiraceae bacterium 615相對(duì)豐度較為穩(wěn)定。

對(duì)照組S. gallolyticus subsp.macedonicus相對(duì)豐度在2 h和14 h呈現(xiàn)大量增長(zhǎng)后，24 h降低到低于2 h；L. vaginalis、L. lactis和L. johnsonii均在小幅增長(zhǎng)后，大量降低；Oscillospiraceae bacterium VE202_24相對(duì)豐度顯著下降；Enterococcus faecalis持續(xù)增長(zhǎng)，成為相對(duì)豐度最高的菌屬。

實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的對(duì)比可知，A. muciniphila加入到穩(wěn)定的腸道微生態(tài)中，主要使L. vaginalis、L. lactis和L. johnsonii呈現(xiàn)增殖，趨勢(shì)與real-time PCR的檢測(cè)結(jié)果匹配。對(duì)照組因?yàn)闊o(wú)明顯優(yōu)勢(shì)菌群的存在，可能使容易生存的菌種生長(zhǎng)較快，如E. faecalis和S. gallolyticus，讓營(yíng)養(yǎng)來(lái)源單一的菌種逐漸衰亡，如Oscillospiraceae bacterium VE202_24。Oscillospiraceae bacterium主要吸收宿主聚糖存活[26]，而發(fā)酵液中的關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)成分為Mucin，結(jié)構(gòu)中有大部分為聚糖，但因A. muciniphila的干預(yù)使黏蛋白大量消耗，因此可能使這類菌種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)匱乏。

2.5 主坐標(biāo)分析

圖 4 不同組間的主坐標(biāo)分析Fig. 4 Difference among groups shown in PCoA

主坐標(biāo)分析是基于由物種組成計(jì)算得到的距離矩陣得出，不同組作比較時(shí)距離越近則表示差距越小。從圖4可知，按照時(shí)間點(diǎn)分組，2、14 h和24 h的空間距離較大，顯示樣本群的差異較大；按照實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分析，組間距離較小，相同時(shí)間點(diǎn)的樣本聚在一起，顯示其差異較小。因此在菌落總體結(jié)構(gòu)上，A. muciniphila添加后對(duì)腸道微生態(tài)的結(jié)構(gòu)無(wú)顯著影響，說(shuō)明其對(duì)腸道菌群組成沒(méi)有破壞性。

3 結(jié)論與討論

在廣州地區(qū)人群的A. muciniphila定植率為89.31%，平均豐度為5.825（lg（CFU/mL））。

腸道消化模擬不同時(shí)間點(diǎn)的real-time PCR結(jié)果顯示，A. muciniphila在模擬人類腸道微生物菌群環(huán)境中具備生存能力；對(duì)Bifidobacterium屬和Bacteroides屬具有抑制效果，對(duì)Lactobacillus屬具有促進(jìn)作用。16S rDNA基因組測(cè)序結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組L. lactis、S. gallolyticussubsp.macedonicus相對(duì)豐度均呈現(xiàn)增長(zhǎng)，Oscillospiraceae bacterium VE202-24相對(duì)豐度大幅降低，Lachnospiraceae bacterium 615相對(duì)豐度較為穩(wěn)定；在菌落總體結(jié)構(gòu)上，A. muciniphila添加后對(duì)腸道微生物菌群的結(jié)構(gòu)無(wú)顯著影響，說(shuō)明其對(duì)腸道菌群組成沒(méi)有破壞性。

本研究選擇無(wú)A. muciniphila定植的腸道菌群作為接種液，再添加一定豐度的A. muciniphila活菌進(jìn)行干預(yù)，但有報(bào)道表明1%～5%為接近最健康人群的豐度[4]。 這是本研究疏漏的一個(gè)需要探究的點(diǎn)，未來(lái)將進(jìn)行改進(jìn)。本研究采用時(shí)長(zhǎng)為24 h的腸道消化模擬系統(tǒng)，僅能作為參考評(píng)估A. muciniphila對(duì)腸道菌群的作用。今后應(yīng)設(shè)置長(zhǎng)時(shí)間段的評(píng)估實(shí)驗(yàn)，其中包括3～5 d的菌群穩(wěn)定期和7 d以上的長(zhǎng)期定植評(píng)估等。

A. muciniphila將可能作為益生菌應(yīng)用于工業(yè)、醫(yī)療等，其對(duì)人體健康的安全性需要研究清楚[27-28]。目前為止，A. muciniphila的致病性尚鮮有文獻(xiàn)報(bào)道，A. muciniphila潛在可能的致病性是因其具備依附黏和降解黏蛋白的能力，這些能力使A. muciniphila可能參與到最開(kāi)始的致病活動(dòng)[1,29-31]。本研究中，A. muciniphila添加到新的腸道微生物菌群中，可能增加了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗，尤其是黏蛋白的利用，使需要黏蛋白作為能源的菌群生長(zhǎng)受到抑制。在14 h后總菌數(shù)出現(xiàn)大幅下降，說(shuō)明營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)開(kāi)始缺乏，使?fàn)I養(yǎng)要求不高的腸道菌群豐度出現(xiàn)額外的增長(zhǎng)，生存競(jìng)爭(zhēng)能力較強(qiáng)；16S rDNA基因組測(cè)序結(jié)果顯示14 h后Escherichia Shigella屬出現(xiàn)明顯增長(zhǎng)，可能對(duì)其他菌屬有限制或競(jìng)爭(zhēng)作用，影響菌群的結(jié)構(gòu)組成。但由總體菌落結(jié)構(gòu)可知，A. muciniphila的添加對(duì)腸道微生物菌群的結(jié)構(gòu)無(wú)顯著性破壞作用，表明其可能具備活菌攝入的基本要求。

對(duì)于低豐度或無(wú)A. muciniphila定植的人群，需找出對(duì)應(yīng)的合理方式幫助A. muciniphila定植或者大量增長(zhǎng)。有報(bào)道指出，中國(guó)南方人群A. muciniphila的定植率及其豐度較低，不及腸道菌群總量的1%[13]，刺激與定植途徑顯得極其重要。因此利用體外腸道消化系統(tǒng)探究A. muciniphila在腸道中初次定植更具有參考價(jià)值。本研究完成A. muciniphila在人體腸道微生態(tài)的變化評(píng)估，還需對(duì)體內(nèi)進(jìn)一步深入研究，因此將此類腸道微生態(tài)移殖到無(wú)菌動(dòng)物模型中，再攝入A. muciniphila活菌可能更具合理性，這也是本團(tuán)隊(duì)后續(xù)的研究工作之一。