本標準按照GB/T 1.1-2009 給出的規(guī)則起草。
本標準由中國輕工業(yè)聯(lián)合會提出。
本標準由全國口腔護理用品標準化技術(shù)委員會牙膏分技術(shù)委員會(SAC/TC492/SC1)歸口。
本標準起草單位:上海美加凈日化有限公司、納諾神蜂(福建)個人護理用品有限公司、蘇州市金茂日用化學品有限公司、云南白藥集團股份有限公司、廣州薇美姿實業(yè)有限公司、廣州質(zhì)量監(jiān)督檢測研究院、國家輕工業(yè)牙膏蠟制品質(zhì)量監(jiān)督檢測中心。
本標準主要起草人: 施裔磊、林澤鴻、陳健芬、高鷹、陳敏珊、郭長虹、李林、陶麗、劉文玉。
本標準為首次發(fā)布。
本標準規(guī)定了高效液相色譜法測定牙膏中3-甲基-4-異丙基苯酚含量的方法要點、試劑與標準物質(zhì)、儀器、分析步驟、結(jié)果計算、回收率、標準偏差和允許差。
本標準適用于牙膏、漱口水等口腔護理用品中3-甲基-4-異丙基苯酚含量的測定。
本標準3-甲基-4-異丙基苯酚的檢出濃度為0.20μg/mL,定量濃度為0.60μg/mL。若取1.0g樣品,3-甲基-4-異丙基苯酚的檢出限為20mg/kg,定量限為60mg/kg。
下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。
GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
將牙膏用50%甲醇水溶液分散,超聲波提取其中的3-甲基-4-異丙基苯酚成分,然后離心分離并過濾處理,濾液用帶紫外檢測器的高效液相色譜儀分析測定,外標法通過峰面積進行定量計算。
除非另有說明,所用試劑均為分析純的試劑,水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級水。
純度不小于99%。
HPLC級。
HPLC級。
0.45μm。
0.45μm。
甲醇和水按1∶1(V/V)混合后,經(jīng)0.45μm有機相濾膜過濾,并超聲脫氣10min。
稱取磷酸二氫鉀1.36g(精確至0.000 1g),用水溶解并定容至1 000mL,經(jīng)0.45μm水相濾膜過濾,并超聲脫氣10min。
稱取3-甲基-4-異丙基苯酚對照品100mg(精確至0.0001g),用50%甲醇水溶解并定容至100mL,搖勻,配制成1.0mg/mL的溶液。準確吸取5mL上述溶液,用50%甲醇水溶解并定容至100mL,搖勻,作為含3-甲基-4-異丙基苯酚50.0μg /mL的標準儲備液。
將標準儲備液用水逐級稀釋,配制成濃度為1.0μg/mL,2.5μg/mL,5.0μg/mL,7.5μg/mL,10.0μg/mL,12.5μg/mL,15.0μg/mL的標準工作液。
5.1 高效液相色譜儀:配紫外檢測器。
5.2 C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)及配套保護柱(4.0mm×10mm,5μm)。
5.3 磁力攪拌器。
5.4 超聲波清洗器:工作頻率≥35kHz,功率≥200W。
5.5 離心機:轉(zhuǎn)速≥4 000r/min。
5.6 分析天平:精度0.0001g。
牙膏試樣:先擠去大約20mm,再稱取1g(精確至0.000 1g)試樣于100mL燒杯中,用50%甲醇水溶液約80mL溶解,磁力攪拌至分散均勻,超聲提取10min后,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,用50%甲醇水溶液定容至刻度。搖勻后,將試樣溶液轉(zhuǎn)移至50mL離心管中,以4000r/min以上離心分離10min。冷卻至室溫后,上清液經(jīng)0.45μm有機相濾膜過濾,備用。
漱口水試樣:稱取1g(精確至0.0001g)試樣于100mL容量瓶中,用50%甲醇水溶液溶解并定容至刻度。搖勻后,上清液經(jīng)0.45μm有機相濾膜過濾,備用。
6.2.1 色譜條件參考
按照表1設(shè)定液相色譜條件。
表1 液相色譜條件
3-甲基-4-異丙基苯酚對照品用等度洗脫方式分析,洗脫程序見表2。
表2 對照品參考程序
牙膏試樣用梯度洗脫方式分析,洗脫程序見表3。
表3 牙膏試樣參考程序
6.2.2 標準工作曲線
準確吸取4.11制備的標準工作液20μL,分別注入高效液相色譜儀,按照6.2.1的色譜條件進行測定,以3-甲基-4-異丙基苯酚的濃度為x軸,其相應(yīng)的峰面積為y軸,繪制標準工作曲線。
3-甲基-4-異丙基苯酚標準溶液的液相色譜圖,參照附錄中的圖A.1。
6.2.3 測定
準確吸取20μL經(jīng)6.1處理的試樣溶液,注入高效液相色譜儀測定3-甲基-4-異丙基苯酚的峰面積,由標準工作曲線找出試樣溶液中3-甲基-4-異丙基苯酚的濃度。
試樣溶液的液相色譜圖,參照附錄A中的圖A.2。
樣品中3-甲基-4-異丙基苯酚的含量X(mg/kg)按式(1)計算:
(1)
式中:X——試樣中3-甲基-4-異丙基苯酚的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);
c——試樣溶液中對應(yīng)的3-甲基-4-異丙基苯酚的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
V——試樣定容體積,單位為毫升(mL);
m——試樣的質(zhì)量,單位為克(g);
N——稀釋倍數(shù);
K——對照品中3-甲基-4-異丙基苯酚的純度。
3-甲基-4-異丙基苯酚在添加濃度100mg/kg~400mg/kg范圍內(nèi),本標準方法的回收率為96.3%~100.9%。
本標準方法的相對標準偏差小于5%(n=6)。
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過算數(shù)平均值的10%,取其算數(shù)平均值作為測定結(jié)果。
附錄A
(資料性附錄)
液相色譜參考譜圖
圖A.1 對照品液相色譜圖
圖A.2 牙膏試樣液相色譜圖