李 瀟，劉陽陽，周艷艷，張白云，周俊英

（河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科 鄭州 450002）

當(dāng)子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)等組織出現(xiàn)在子宮內(nèi)膜以外的子宮腔被覆內(nèi)膜及宮體肌層以外的其他部位時(shí)，稱為子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EM）[1]。流行病學(xué)調(diào)查[2-3]發(fā)現(xiàn)在育齡婦女中的發(fā)病率高達(dá)10%-15%，在伴有盆腔疼痛的育齡婦女中可達(dá)50%，且在EM 患者中約有30%-40%發(fā)生不孕現(xiàn)象。另外研究[4]發(fā)現(xiàn)，近年來EM 呈逐年升高的趨勢。再者，EM 具有轉(zhuǎn)移，浸潤，侵襲等惡性生物學(xué)行為，且容易發(fā)生惡變[5]。

一是多層次地推進(jìn)城鎮(zhèn)化金融支持體系建設(shè)。首先全產(chǎn)業(yè)全體系的金融機(jī)制需要將現(xiàn)有的各類金融機(jī)構(gòu)、城鎮(zhèn)基礎(chǔ)設(shè)施及相關(guān)配套進(jìn)行合理納入。充分發(fā)揮國家層面的政策導(dǎo)向作用，通過引導(dǎo)政策性銀行等金融機(jī)構(gòu)創(chuàng)設(shè)種類更加豐富的金融業(yè)務(wù)，尤其是低息業(yè)務(wù)貸款。試點(diǎn)工作可以提供新的發(fā)展模式，在城鎮(zhèn)化率較高的區(qū)域率先推廣試點(diǎn)金融創(chuàng)建模式。對(duì)金融機(jī)構(gòu)而言，需重視環(huán)境帶來的投融資變化。其次需重視民間資本的合理引入。市場化改革表現(xiàn)為資本的多樣化并存，民間資本的代入有利于金融市場的健康發(fā)展。但也需要通過專業(yè)的民間資本借貸機(jī)構(gòu)對(duì)其行為進(jìn)行合法化監(jiān)管。

設(shè)P點(diǎn)可以接收到m個(gè)信標(biāo)節(jié)點(diǎn)的信號(hào),將m個(gè)信標(biāo)節(jié)點(diǎn)以3個(gè)不共線的為一組分組,假設(shè)一共有k組。通過第1部分的數(shù)學(xué)模型可以計(jì)算出k個(gè)P點(diǎn)的坐標(biāo)值,分別是(xP1,yP1),…,(xPk,yPk)。這k個(gè)坐標(biāo)值即LOGGWO算法的部分初始值,通過算法尋優(yōu)得到未知節(jié)點(diǎn)P的優(yōu)化坐標(biāo)。設(shè)改進(jìn)灰狼優(yōu)化算法的種群大小為N。若k≥N,則選用根據(jù)適應(yīng)度值從小到大選取前N個(gè)作為初始值;若k

針對(duì)田間雜草，除雜草種類及農(nóng)藥安全施用外，同時(shí)應(yīng)結(jié)合種植區(qū)域地理?xiàng)l件及種群選擇施藥。如來自不同地理種群條件下，節(jié)節(jié)麥呈現(xiàn)出不同甲基二磺隆耐藥性，野芥菜對(duì)同濃度草甘膦呈現(xiàn)敏感型和耐受型2種不同表型[36-37]，田間雜草并不茂盛時(shí)，可選擇人工摘除。

目前，臨床上一般采取傳統(tǒng)的化學(xué)藥物與手術(shù)聯(lián)合治療[6]EM，但傳統(tǒng)的化學(xué)藥物副作用大，且療效不顯著，手術(shù)治療后極易復(fù)發(fā)[7]。因此，尋找有效的藥物對(duì)提高EM 患者的身心健康具有重要的意義。中醫(yī)認(rèn)為EM 的主要病機(jī)是痰瘀互結(jié)，常采用祛瘀散結(jié)，理氣化痰的治療方案[8]。內(nèi)異方中炙鱉甲軟堅(jiān)散結(jié)，干漆，血竭，赤芍與香附活血祛瘀，行氣止痛，牛膝，桂枝溫通經(jīng)脈，逐瘀，諸藥合用，起到祛瘀活血，調(diào)節(jié)氣機(jī)，使得氣血津液正常運(yùn)行。已有多篇文獻(xiàn)[9-11]表明內(nèi)異方在臨床上對(duì)EM 具有療效，但并未對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行研究。本實(shí)驗(yàn)通過子宮內(nèi)膜自體移植法建立EM 大鼠模型，觀察內(nèi)異方對(duì)EM 大鼠的異位內(nèi)膜病理學(xué)結(jié)構(gòu)改變、促炎因子IL-6和IL-8的分泌以及異位內(nèi)膜組織VEGF、HIF-1α 和NF-κB 蛋白表達(dá)的影響。本研究不但從一個(gè)全新的角度（炎性和缺氧微環(huán)境的角度）闡明了內(nèi)異方對(duì)EM 大鼠的改善作用，還為EM 進(jìn)一步加快運(yùn)用于臨床治療EM提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

里帕的借鑒方式簡單直接：如擬人形象“友誼”（方案D），他說“一個(gè)瞎子背著一個(gè)瘸子行路”的形象來表現(xiàn)“友誼”主題，是出自阿爾恰托的描述：“他在一個(gè)瞎子的背上，用聲音領(lǐng)路。所以兩人組合在一起意味著，一個(gè)提供視力一個(gè)提供腳力”。?

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

成年未孕SD 大鼠共45 只，雌性，清潔級(jí)，9-10 周齡，體重190-210 g，購自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SCXK（豫）2017-0001]，飼養(yǎng)于河南省中醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房[SYXK（豫）2016-0009]中，溫度維持在20-25 ℃，相對(duì)濕度為50%-65%，光照黑暗各12 h，自由攝取食物與水，進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)2 周。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲得河南省中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)（倫理審查證號(hào)：2017-28），本實(shí)驗(yàn)完全遵循國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理的相關(guān)規(guī)定，符合動(dòng)物保護(hù)、動(dòng)物福利和倫理原則。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

內(nèi)異方（組方構(gòu)成：當(dāng)歸9 g、丹參12 g、赤芍9 g、制香附9 g、血竭3 g、川牛膝9 g、桂枝3 g、炙鱉甲9 g、皂角刺12 g、干漆4.5 g、茯苓12 g、海藻9 g）購于河南省中醫(yī)院中藥房，制成每毫升相當(dāng)于原生藥2 g 的水煎劑，并濃縮水煎劑至每2 mL相當(dāng)于成人用量。達(dá)那唑膠囊（批號(hào)：20160814）購自江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司，除掉膠囊殼后，將粉末與生理鹽水制成混懸液。

1.1.3 主要試劑與儀器

核轉(zhuǎn)錄因子-Kappa B（nuclear factor-Kappa B,NF-κB）單克隆抗體、第10 號(hào)染色體缺失的磷酸酶（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN）多克隆抗體、β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）單克隆抗體、辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase, HRP）標(biāo)記免疫球蛋白（immunoglobulin G，IgG）（H + L）抗體購自美國Cell Signaling techonology 公司；低氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）單克隆抗體、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）單克隆抗體購自美國Abcam 公司；IL-6和IL-8 ELISA 試劑盒購自購自南京森貝伽生物科技有 限 公 司 ；放 射 免 疫 沉 淀 法（Radio-Immunoprecipitation Assay，RIPA）裂解液購自北京普利萊公司，二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白濃度測定試劑盒購自江蘇碧云天公司。CUT4062 型手動(dòng)切片機(jī)購自德國SLEE 公司；EG1150H 型包埋機(jī)購自德國Leica 公司；BX51 型正置熒光顯微鏡、DPBSW 型全自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)購自日本Olympus 公司；ELX800型酶標(biāo)儀購自美國Bio-TEK公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

本實(shí)驗(yàn)采用子宮內(nèi)膜自體移植法建立EM 大鼠模型，入組共45 只大鼠，其中2 只在造模過程中死亡，3只大鼠造模失敗。假手術(shù)組納入10 只大鼠，其余30只大鼠可明顯觀察到移植物與透明囊腫，表示造模成功，總造模成功率88.89%。

最后，中國近現(xiàn)代史基本問題研究還應(yīng)該對(duì)中國近現(xiàn)代史研究中的成果進(jìn)行借鑒，這兩者在學(xué)科的研究上屬于相通的，所以應(yīng)該對(duì)這兩個(gè)學(xué)科之間的關(guān)系進(jìn)行協(xié)調(diào)處理，通過統(tǒng)籌規(guī)劃，來對(duì)二者進(jìn)行整體上的規(guī)劃，以中共黨史學(xué)科為主要的基礎(chǔ)，來對(duì)這兩個(gè)學(xué)科進(jìn)行組建，并以中共黨史研究隊(duì)伍為基本力量，[1]48為兩門學(xué)科的發(fā)展提供保障。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組

大鼠按照1.2.1 方法進(jìn)行EM 造模。同時(shí)選取10只大鼠不進(jìn)行切除子宮段和自體子宮內(nèi)膜移植，其他手術(shù)方式同EM 造模手術(shù)；此大鼠作為假手術(shù)組。在EM 造模3 周后，腹腔注射10%水合氯醛（2.5 mL·kg-1）麻醉大鼠，采用仰臥位方式固定并開腹觀察移植物的生長情況。造模成功判定標(biāo)準(zhǔn)：移植物體積增大，出現(xiàn)液體積聚，積液深度≥2 mm，移植物鏡檢有子宮內(nèi)膜上皮、間質(zhì)細(xì)胞與腺體。取EM 造模成功的大鼠，逐層關(guān)腹，術(shù)后分籠常規(guī)喂養(yǎng)，術(shù)后腹腔注射硫酸慶大霉素，0.1 mL/天，共3 天。然后，隨機(jī)將EM 造模成功的大鼠分為3個(gè)亞組，即模型組、內(nèi)異方治療組和陽性對(duì)照組，每組10 只大鼠。最后，假手術(shù)組和模型組大鼠給予生理鹽水2 mL/天灌胃，內(nèi)異方治療組給予內(nèi)異方水煎劑濃縮液2 mL/天灌胃，陽性對(duì)照組給予達(dá)那唑0.072 mg/kg/天（達(dá)那唑混懸液2 mL/天）灌胃，各組連續(xù)給藥4周。

采用ELISA 試劑盒分別檢測子宮內(nèi)膜異位組織或假手術(shù)組同位置的內(nèi)膜組織中IL-6 和IL-8 水平。收集子宮內(nèi)膜異位組織或假手術(shù)組同位置的內(nèi)膜組織樣品，按照試劑盒說明書步驟對(duì)樣品蛋白進(jìn)行萃取、定量后，將每樣品按100μl/孔加入已包被IL-6 和IL-8 抗體96 孔的酶標(biāo)板中，室溫孵育60 min；之后分別加入100μl/孔生物素標(biāo)記的二抗稀釋液，室溫孵育60 min；洗板后，加入100μL/孔親和素-過氧化物復(fù)合物稀釋液，室溫孵育45 min；洗板后，加入100μL/孔顯色液，37℃避光反應(yīng)15 min；最后加入100 μL/孔終止液。在酶標(biāo)儀450 nm波長下測定OD值。然后根據(jù)預(yù)制的濃度曲線計(jì)算組織中IL-6和IL-8的水平。

1.2.4 ELISA檢測炎性因子分泌

采用Western blot法檢測模型組、內(nèi)異方治療組和陽性對(duì)照組的異位內(nèi)膜組織或假手術(shù)組同位置的內(nèi)膜組織中VEGF 和HIF-1α的蛋白表達(dá)水平，結(jié)果如圖2 所示：與假手術(shù)組相比，模型組大鼠異位內(nèi)膜組織中VEGF 和HIF-1α 蛋白表達(dá)水平均顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）；與模型組相比，內(nèi)異方治療組與陽性對(duì)照組大鼠異位內(nèi)膜組織中VEGF 和HIF-1α 蛋白表達(dá)水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）；與陽性對(duì)照組相比，內(nèi)異方治療組大鼠異位內(nèi)膜組織中VEGF 和HIF-1α蛋白表達(dá)均稍低，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05）。以上結(jié)果說明，內(nèi)異方能抑制EM 大鼠的異位內(nèi)膜組織中VEGF 和HIF-1α的蛋白表達(dá)。

1.2.3 HE染色

當(dāng)然，我提這個(gè)建議主要是讓自己脫穎而出，寫詩雖然不會(huì)，背詩總會(huì)吧。納蘭性德、倉央嘉措，“一生一世一雙人”、“你來或者不來，愛就在那里，不離不棄”哇哈哈，隨便拿幾首出來就能鎮(zhèn)住她們。我在心里樂顛顛地打著如意小算盤。

1.2.5 Western blot檢測蛋白表達(dá)

稱取50 mg異位內(nèi)膜組織或假手術(shù)組同位置內(nèi)膜組織，并在冰上剪碎，加入預(yù)冷RIPA 裂解液，冰浴上勻漿。在4℃條件下，10000 r·min-1離心20 min，收集總蛋白上清液。總蛋白經(jīng)BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白含量后，調(diào)整蛋白終濃度為4.0 mg·mL-1，進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。恒壓電泳80 min后，蛋白經(jīng)電轉(zhuǎn)移至PVDF膜。將PVDF膜完全浸入封閉液，輕搖60 min 后，在4℃條件下孵育一抗[（稀釋比例為1∶1000）VEGF、HIF-1α、PTEN、NF-κB 和β-actin 抗體]過夜。TBST 洗膜3 次后，孵育二抗[（稀釋比例為1∶1000）HRP 標(biāo)記IgG（H + L)抗體]，室溫孵育30 min，TSBT 洗膜3 次，將ECL 超敏發(fā)光液傾入膜上，曝光，顯影，自來水沖洗晾干。掃描膠片，并用Image J 1.41 軟件計(jì)算條帶灰度值。目標(biāo)蛋白的相對(duì)表達(dá)量=目標(biāo)蛋白灰度值/內(nèi)參β-actin灰度值。

2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS17.0 對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有計(jì)量資料均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間計(jì)量資料倆倆比較采用單因素方差分析的post-hoc test Bonferroni-t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有顯著性。

3 結(jié)果

3.1 EM造模情況

1.2.1 EM大鼠模型建立

實(shí)驗(yàn)過程依據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R 原則對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予人道主義關(guān)懷。根據(jù)文獻(xiàn)[12]描述的方法：選擇已經(jīng)經(jīng)過連續(xù)2 個(gè)正常動(dòng)情周期的大鼠，在第3 個(gè)動(dòng)情期開始時(shí)，依據(jù)子宮內(nèi)膜自體移植法建立EM 大鼠模型。大鼠腹腔注射10%水合氯醛（2.5 mL·kg-1）麻醉后，采用仰臥位方式固定，于尿道口上約1 cm 處垂直正中縱切開，分離左側(cè)子宮，近端離子宮角1 cm 處結(jié)扎，遠(yuǎn)端離卵巢2 cm 處結(jié)扎，并結(jié)扎中間的子宮系膜血管，切除約1.5 cm 的子宮段，放入滅菌生理鹽水玻璃皿中，縱切開子宮腔，分離子宮內(nèi)膜組織，修剪為5 mm×5 mm的小塊，并將修剪的內(nèi)膜組織用可吸收線固定四角縫合種植于腹壁血管豐富處，腹腔內(nèi)放置慶大霉素0.4 mL，逐層關(guān)腹，術(shù)后分籠常規(guī)喂養(yǎng)，術(shù)后腹腔注射硫酸慶大霉素，0.1 mL/天，共3天。

3.2 各組大鼠內(nèi)膜組織病理形態(tài)

HE 染色結(jié)果如圖1顯示，假手術(shù)組大鼠子宮內(nèi)膜上皮結(jié)構(gòu)完整呈柱狀、大小均一且排列緊密，微絨毛密集，間質(zhì)細(xì)胞排列整齊，同時(shí)腺體豐富，細(xì)胞核形狀呈現(xiàn)類橢圓形；模型組異位內(nèi)膜上皮可見立方體增生且排列稀疏，間質(zhì)細(xì)胞增多、增厚，微絨毛脫落，腺體也幾乎消失，內(nèi)膜極??；內(nèi)異方治療組子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞排列緊密，細(xì)胞大小均一，但部分微絨毛脫落，腺體較豐富；陽性對(duì)照組異位內(nèi)膜細(xì)胞大小均一呈柱狀，且排列緊密，腺體較豐富。以上結(jié)果說明，內(nèi)異方能改善EM大鼠的異位內(nèi)膜病理學(xué)結(jié)構(gòu)改變。

今年“龍?zhí)ь^”，中華龍舟大賽來到海南萬寧，在和樂鎮(zhèn)港北港拉開全年比賽的大幕。萬寧與龍舟的相遇并非偶然，萬寧地處大海之南，自古以來，這里便延續(xù)了與中原大陸一脈相承的龍文化，除了每年的賽龍舟外，這里普遍會(huì)把食品名稱加上“龍”字，比如水餃稱作“龍耳”，烙餅稱作“龍鱗”，米飯稱作“龍子”以求吉祥福瑞，萬家平安。

3.3 各組大鼠內(nèi)膜組織IL-6和IL-8的水平

采用ELISA 法檢測模型組、內(nèi)異方治療組和陽性對(duì)照組的異位內(nèi)膜組織或假手術(shù)組同位置的內(nèi)膜組織中IL-6 和IL-8 的水平，結(jié)果如表1 所示：與假手術(shù)組相比，模型組大鼠異位內(nèi)膜組織中IL-6和IL-8水平均顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）；與模型組相比，內(nèi)異方治療組與陽性對(duì)照組大鼠異位內(nèi)膜組織中IL-6和IL-8水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）；與陽性對(duì)照組相比，內(nèi)異方治療組大鼠異位內(nèi)膜組織中IL-6和IL-8水平均稍高，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P>0.05）。

圖1 HE染色檢測模型組、內(nèi)異方治療組和陽性對(duì)照組的異位內(nèi)膜組織或假手術(shù)組同位置的內(nèi)膜組織病理形態(tài)（×200）

表1 各組大鼠異位內(nèi)膜組織IL-8和IL-6的水平比較（n=10，±s）

表1 各組大鼠異位內(nèi)膜組織IL-8和IL-6的水平比較（n=10，±s）

注：與假手術(shù)組相比，*P<0.05；與模型組相比，#P<0.05。

Group假手術(shù)組模型組內(nèi)異方治療組陽性對(duì)照組F值IL-8/(pg/g)129.45±19.39 354.22±41.04*172.57±23.45*#159.45±25.43#75.312 IL-6/(pg/g)216.06 ±28.44 421.37±36.52*286.38±35.43*#262.54±29.42#178.368

3.4 VEGF與HIF-1α的蛋白表達(dá)水平

末次給藥24 h 后，腹腔注射10%水合氯醛（2.5 mL·kg-1）麻醉大鼠，采用仰臥位方式固定并開腹大鼠分離異位內(nèi)膜組織或假手術(shù)組同位置內(nèi)膜組織。組織分為兩部分，一部分直接凍存在-80℃冰箱，用于后續(xù)ELISA 和Western blot 檢測；另一部分組織以4%多聚甲醛固定12 h，固定后生理鹽水沖洗固定液，然后采用常規(guī)梯度酒精脫水，二甲苯透明和石蠟包埋。取石蠟包埋的異位內(nèi)膜組織或假手術(shù)組同位置內(nèi)膜組織，利用CUT4062 型手動(dòng)切片機(jī)切成5μm 厚度的組織切片。石蠟切片脫臘后，蘇木素染色5 min，蒸餾水沖洗2 min，1%鹽酸乙醇分化15 s，蒸餾水沖洗2 min，1%Na2HPO4?12H2O 溶液返藍(lán)5 s，蒸餾水沖洗1 min，伊紅染色5 min，蒸餾水沖洗2 min，依次運(yùn)用不用濃度的50%-70%-80%-95%-無水乙醇梯度脫水，每次5 min，二甲苯透明3 min；中性樹膠封片后BX51 型顯微鏡下進(jìn)行觀察內(nèi)膜組織病理學(xué)改變并隨機(jī)選擇10 個(gè)視野進(jìn)行拍照。

圖2 Western blot檢測模型組、內(nèi)異方治療組和陽性對(duì)照組的異位內(nèi)膜組織或假手術(shù)組同位置的內(nèi)膜組織中VEGF與HIF-1α的蛋白表達(dá)水平

3.5 PTEN和NF-κB蛋白表達(dá)水平

圖3 各Western blot檢測模型組、內(nèi)異方治療組和陽性對(duì)照組的異位內(nèi)膜組織或假手術(shù)組同位置的內(nèi)膜組織中PTEN和NF-κB的蛋白表達(dá)水平

給藥4 周后，采用Western blot 法檢測模型組、內(nèi)異方治療組和陽性對(duì)照組的異位內(nèi)膜組織或假手術(shù)組同位置的內(nèi)膜組織中PTEN 與NF-κB的蛋白表達(dá)水平，結(jié)果如圖3 所示：與假手術(shù)組相比，模型組大鼠異位內(nèi)膜組織中PTEN 蛋白表達(dá)水平顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05），NF-κB 的蛋白表達(dá)水平顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）；與模型組相比，內(nèi)異方治療組和陽性對(duì)照組大鼠異位內(nèi)膜的PTEN 蛋白表達(dá)水平均明顯增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），NF-κB 的蛋白表達(dá)水平均明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）；與陽性對(duì)照組相比，內(nèi)異方治療組大鼠異位內(nèi)膜組織中PTEN 蛋白表達(dá)均稍高，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P>0.05），而NF-κB 的蛋白表達(dá)水平明顯增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。以上結(jié)果說明，內(nèi)異方能抑制EM 大鼠的異位內(nèi)膜組織中PTEN和NF-κB的蛋白表達(dá)。

4 討論

目前，西醫(yī)認(rèn)為EM 是一種雌激素依賴性疾病[13]。于是，對(duì)EM 的治療，其主要手段是維持一種低雌激素的狀態(tài)，但是這種療法也同時(shí)引發(fā)了一系列的副作用，其中以骨密度的降低最為顯著[14]。中醫(yī)藥理論認(rèn)為，EM 辯證病位當(dāng)屬下焦，是由于氣郁血淤導(dǎo)致的經(jīng)血逆流所致[15]，因此，可采用化疲益氣、活血化瘀之內(nèi)異方對(duì)EM 給予治療。本研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)異方能改善大鼠EM。

異位內(nèi)膜組織種植于腹腔并得以生長依賴于豐富的營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)[16]，而營養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng)需要大量微血管的生成[17]，因此，微血管生成是EM 發(fā)生的關(guān)鍵步驟。而VEGF是至今以來發(fā)現(xiàn)的特異性最高的促血管生成因子[18]。VEGF 具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增強(qiáng)，加速血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、粘附的作用，并能最終誘導(dǎo)微血管生成[18-19]。且已有文獻(xiàn)[20]報(bào)道，在EM患者的腹水和異位內(nèi)膜組織中VEGF 的表達(dá)明顯增加。提示，VEGF高表達(dá)是EM 患者異位內(nèi)膜賴以生長的重要因素。本研究同樣發(fā)現(xiàn)在EM 大鼠的異位內(nèi)膜組織中VEGF 表達(dá)增加；而內(nèi)異方給藥后，能夠抑制EM大鼠的異位內(nèi)膜組織中VEGF的表達(dá)。

EM 的發(fā)病與發(fā)展與腹腔內(nèi)微環(huán)境的變化密不可分。EM 患者常常伴隨有腹腔缺氧狀態(tài)，而EM 的造成腹腔缺氧微環(huán)境的形成正是EM 發(fā)生與發(fā)展的重要因素[21]。在缺氧微環(huán)境形成后，缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α的表達(dá)增強(qiáng)，而缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α 表達(dá)被認(rèn)為與EM的散播與種植密切相關(guān)[22]。另外有研究表明[23]，缺氧也是促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分泌VEGF 的重要因素，人子宮內(nèi)膜細(xì)胞在缺氧環(huán)境下培養(yǎng)12 h 后，VEGF 表達(dá)顯著增加。而VEGF表達(dá)增加正是異位內(nèi)膜中微血管生成的重要條件。本研究同樣發(fā)現(xiàn)EM 大鼠的異位內(nèi)膜組織中HIF-1α 表達(dá)增加；而內(nèi)異方給藥后，能夠抑制異位內(nèi)膜組織中HIF-1α 的表達(dá)，從而改善了大鼠子宮內(nèi)膜的腹腔內(nèi)部缺氧微環(huán)境，致使下調(diào)VEGF的表達(dá)，改善異位內(nèi)膜的增長。

NF-κB 是一種重要的細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子，發(fā)揮著多種生物學(xué)功能。EM 患者常常伴隨有促炎因子的異常升高的腹腔炎性微環(huán)境[24]。Tao X 等[25]研究結(jié)果表明，EM病灶中NF-κB的表達(dá)成強(qiáng)陽性。而NF-κB被激活后，可使得許多促炎細(xì)胞因子、趨化因子以及促血管生成相關(guān)因子被上調(diào)表達(dá)，而這些細(xì)胞因子異常上調(diào)進(jìn)一步促進(jìn)異位內(nèi)膜的種植和生長，從而促進(jìn)EM 的發(fā)生和發(fā)展[26]。本研究發(fā)現(xiàn)，在EM 大鼠的異位內(nèi)膜組織中IL-6 和IL-8 水平顯著增高和NF-κB 的表達(dá)明顯增加，而內(nèi)異方抑制EM 大鼠的異位內(nèi)膜組織中IL-6和IL-8水平以及NF-κB的表達(dá)。

在多種子宮內(nèi)膜病變中PTEN 因子表達(dá)變化具有特殊的意義[27-28]。有文獻(xiàn)[27]指出在子宮內(nèi)膜增生中PTEN 蛋白的缺失可能會(huì)導(dǎo)致子宮內(nèi)膜生長失控。Zheng 等[28]研究發(fā)現(xiàn)PTEN 的無表達(dá)或低表達(dá)的內(nèi)膜細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力與侵襲能力均有所增加，易出現(xiàn)內(nèi)膜細(xì)胞轉(zhuǎn)移至子宮腔以外的地方，從而誘發(fā)EM。PTEN 表達(dá)下調(diào)可通過激活PI3K/Akt 信號(hào)通路并促進(jìn)NF-κB表達(dá)上調(diào)，再者子宮異位內(nèi)膜碎片在缺氧環(huán)境下進(jìn)一步刺激NF-κB 的表達(dá)增加，負(fù)反饋調(diào)節(jié)使得PTEN 表達(dá)下調(diào)，使得EM 加重[29]。本研究同樣發(fā)現(xiàn)EM 大鼠的異位內(nèi)膜組織中PTEN 表達(dá)降低；而內(nèi)異方促進(jìn)EM 大鼠的異位內(nèi)膜組織中PTEN的表達(dá)。

Notes: Confucius is said to have read The Book of Changes ( Yi Jing) so many times that the leather strings binding the bamboo slips upon which the book was written broke three times．[2]46

綜上所述，內(nèi)異方能夠緩解對(duì)缺氧環(huán)境中的異位內(nèi)膜組織的增厚，改善缺氧情況，從而對(duì)EM 大鼠具有明顯的改善作用。推測這種改善作用可能是由于內(nèi)異方能夠抑制異位內(nèi)膜組織中HIF-1α和NF-κB表達(dá)，從而減緩腹腔的炎性和缺氧微環(huán)境，進(jìn)而降低異位內(nèi)膜組織中VEGF的表達(dá)同時(shí)促進(jìn)PTEN的表達(dá)，致使異位內(nèi)膜組織中微血管生成減少，導(dǎo)致異位內(nèi)膜組織內(nèi)膜種植得以生長的營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，最終改善EM。本實(shí)驗(yàn)對(duì)內(nèi)異方臨床上治療EM提供的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。