趙智芳

（山西醫(yī)科大學晉祠學院，山西 太原 030025）

胚胎停育主要是因為母體自帶影響妊娠的不利因素，或者受精卵存在影響妊娠的不利因素導致胚胎在發(fā)育期間生長不佳，在停止發(fā)育后仍不能順利排除。臨床檢查通常表現(xiàn)為胎心搏動無或者有但隨之消失、妊娠孕囊不正常。胚胎停育多發(fā)生在患者妊娠早期，患者臨床表現(xiàn)包含早孕反應消失、疼痛、腰酸等。近年來，胚胎停育現(xiàn)象不斷增多，影響婦女身心健康，不利家庭和諧、社會穩(wěn)定。臨床生物學表明，染色體非正常狀態(tài)是導致胚胎停育的重要因素，有報道表示50～60%胚胎停育的根本原因均為染色體非正常狀態(tài)?；诖耍疚倪x取2018年08月～2019年08月某醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的120例孕產(chǎn)婦為樣本進行核型分析[1]。

1 資料及方法

1.1 一般資料

選取2018年08月～2019年08月某醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的 120例孕產(chǎn)婦為樣本，全部樣本經(jīng)由病理診斷，確定為胚胎停育，包含自然受孕流產(chǎn)85例，輔助生殖受孕流產(chǎn)35例。年齡29～38歲，平均（35.62±4.27）歲。

納入標準：①存在停經(jīng)史；②B超檢查子宮宮腔內(nèi)存在空孕囊、可見胚芽或者可見胚胎樣組織，同時無胎心搏動或者檢測到胎心搏動但隨之消失；③人絨毛膜促性腺激素(hCG)血尿樣本檢測為陽性。④同意參與本研究。

排除標準：①妊娠合并糖尿??；②妊娠合并高血壓；③參與本研究同期參與其他研究。

1.2 設備與試劑

Leica Microsystems GSL120顯微鏡（德國）；50 ml/25 cm2培養(yǎng)瓶（美國Corning）；5mLCHANGMEDIUMDR培養(yǎng)基（美國）；HE RAcell二氧化碳培養(yǎng)箱（德國）羊水細胞完全培養(yǎng)基（以色列BiologicalIndustries）；0.25%的胰蛋白酶-EDTA消化液（上海慧穎生物科技有限公司）等。

1.3 方法

清宮術(shù)實施同時采集部分絨毛組織，放置到無菌器皿中，由護士送往實驗室。在超凈工作臺中使用生理鹽水沖洗采集的絨毛組織血塊。選取形態(tài)良好的絨毛支，用無菌剪將其剪為糊狀，存儲在2瓶中，分別接種到5 mL CHANGMEDIUMDR培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)7 d，控制溫度始終為37℃，采用倒置顯微鏡研究細胞生長情況，如若存在大量絨毛細胞呈纖維狀態(tài)生長，則予以更換生長液，在生長旺盛時收納細胞，以G顯帶制片，進行核型分析[2]。

細胞收納過程中，將秋水仙素作用時間控制在120 min， 濃度以0.2 μg/mL為宜；將水浴時間控制在50 min，水浴溫度控制在37℃；固定液固定次數(shù)以3次為宜。

G顯帶制片過程中，每個樣本設置三分，置于75℃條件下180 min，胰蛋白酶-EDTA消化液消化時間不宜過長，以秒為單位，清洗晾干后進行染色。

染色體核型分析過程中，利用顯微鏡掃描，完成細胞核型、中期分裂相等記錄工作，通常情況下，計數(shù)20個，核型分析3～5個。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用S P S S 2 1.0 研究，分析胚胎停育非正常狀態(tài)染色體占比，計數(shù)資料用x2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05）。

2 結(jié) 果

2.1 絨毛組織染色體培養(yǎng)結(jié)果

供采集120例絨毛組織，其中3例受到污染，1例由于絨毛組織損壞而廢除，宣布培養(yǎng)失敗，其余116例培養(yǎng)成功，成功率為96.67%（116/120），檢測得到核型非正常66例，檢出率為56.90%（66/116）。66例異常核型中存在常染色體三體34例，涉及2-6，9-10，13-18，20-22號染色體，其中，16號共計12例，占比最大為35.29%（12/34）。其余如下：常染色體：①單體2例；②雙重三體3例。性染色體：①單體12例；②多倍體：15例。

2.2 自然與輔助受孕染色體非正常情況

基于在116例成功培養(yǎng)的樣本，包括自然受孕流產(chǎn)83例， 染色體非正常47例，占比56.63（47/83）；輔助生殖受孕流產(chǎn)33，染色體非正常19例，占比57.58%（19/33）。2組染色體情況對比，差異沒有統(tǒng)計學意義（x2=0.00，P＞0.05）。

3 討 論

胚胎停育是臨床常見疾病，與胎兒染色體異常存在密切關聯(lián)性。有研究顯示染色體異常導致胚胎停育的概率在50%以上。因此，如何提高染色體異異常檢出率，降低染色體異常檢測成本，促進染色體異常檢測技術(shù)在基層醫(yī)院的推廣應用，已經(jīng)成為相關人員關注與研究的重點問題。在本次研究中，共計培養(yǎng)成功116例，發(fā)現(xiàn)非正常核型占比為56.90%，涉及單體、三體等，具體情況為三體34例，涉及2-6，9-10，13-18，20-22號染色體，16號12例（35.29%），占比最大。常染色體中存在單體2例與雙重三體3例；性染色體中存在單體12例與多倍體15例。得到本結(jié)果的原因多為三體死亡高發(fā)期在胚胎期，縱使不死亡也多會導致嬰兒出現(xiàn)畸形、智力障礙等并發(fā)癥[3]。通常情況下，相對于性染色體異常對胚胎發(fā)育的影響而言，常染色異常的影響更大。由于16號染色體內(nèi)含基因更多，因此該染色體對胚胎的影響相對于其他染色體而言，影響更大。16號染色體如若出現(xiàn)問題會導致胚胎快速死亡，致死率極高。所以，在胚胎停育絨毛染色體核型分析可加強16號染色體。在本研究116例成功培養(yǎng)的樣本中，存在自然受孕流產(chǎn)83例，染色體非正常47例，占比56.63（47/83）；輔助生殖受孕流產(chǎn)33，染色體非正常19例，占比57.58%（19/33）。2組染色體情況對比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。該結(jié)果與尹婷、鄭安舜等學者研究結(jié)果一致[4]。表明受孕方式并非是染色體異常導致胚胎停育的危險因素，對于易位攜帶者，可嘗試通過輔助生殖技術(shù)提高正常孩子孕育成功率，降低遺傳物質(zhì)異常對胚胎停育的不利影響。

綜合來看，自然流產(chǎn)發(fā)生率提高，胚胎染色體屬于主要因素，但并非導致流產(chǎn)的唯一因素，隨著臨床研究能力的提升，實驗室對此將會展開深入探究，鑒于自然流產(chǎn)高發(fā)生率，建議不孕不育醫(yī)學研究者探究出現(xiàn)胚胎停育的自然妊娠夫婦染色體情況，為遺傳學研究提供支持。