国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

鄭州鯉養(yǎng)殖場(chǎng)鯉急性爛鰓病的癥狀與病原鑒定

2020-02-22 07:42:25吳玲梅溫智清楊雪冰董國(guó)棟李旭東王飛鄭曉聰劉葒賈鵬毛明光
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年24期
關(guān)鍵詞:癥狀

吳玲梅 溫智清 楊雪冰 董國(guó)棟 李旭東 王飛 鄭曉聰 劉葒 賈鵬 毛明光

摘要:2019年6月,河南鄭州某鯉養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生鯉急性爛鰓病,累計(jì)死亡率約40%。為研究發(fā)病病因和疾病流行規(guī)律,對(duì)病魚解剖,進(jìn)行細(xì)菌和寄生蟲檢測(cè)、組織病理學(xué)檢測(cè)、PCR檢測(cè)和系統(tǒng)進(jìn)化分析。結(jié)果顯示,病魚體表黏液增多,眼球凹陷,頭蓋骨凹凸不平,鰓腫脹并伴有潰爛,腎臟腫大至鰾間隔。體視鏡下可見(jiàn)病魚鰓絲末端鈍圓、呈棒狀,鰓絲間充滿大量黏液。組織病理學(xué)檢查可見(jiàn)病魚鰓絲和鰓小片組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重受損,鰓絲上皮細(xì)胞增生、壞死脫落,鰓弓遠(yuǎn)端和近端鰓小片均有明顯增生且相互融合。PCR方法從病魚中檢出鯉浮腫病毒(carp edema virus,CEV),而SVCV和KHV檢測(cè)結(jié)果為陰性。另外,病魚體表和鰓并未見(jiàn)任何寄生蟲,細(xì)菌學(xué)檢測(cè)也未分離到任何與鯉爛鰓病相關(guān)的病原菌。遺傳進(jìn)化分析表明,此次檢出的CEV毒株屬于Ⅱa基因亞型,且與中國(guó)分離株(AS1、WJ2016)及日本分離株(CyPP3)的同源性最高,約為98.8%。初步推斷Ⅱa基因亞型CEV可能是引起此次鄭州鯉急性爛鰓病的主要病因,后續(xù)養(yǎng)殖中需加強(qiáng)對(duì)該病進(jìn)行防控。

關(guān)鍵詞:鯉急性爛鰓病;鯉浮腫病毒;癥狀;病原鑒定

中圖分類號(hào):S941.42+4 ??文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A ?文章編號(hào):1002-1302(2020)24-0167-06

2018年我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)總產(chǎn)量達(dá)4 991.06萬(wàn)t,約占世界水產(chǎn)養(yǎng)殖總產(chǎn)量的60%,是世界上唯一水產(chǎn)品養(yǎng)殖總量超過(guò)捕撈總量的漁業(yè)國(guó)家。鯉魚作為我國(guó)第四大淡水養(yǎng)殖品種,2018年總產(chǎn)量達(dá)到296.2萬(wàn)t[1],是我國(guó)消費(fèi)者動(dòng)物性蛋白的主要來(lái)源之一。河南省作為黃河鯉養(yǎng)殖大省,其2018年產(chǎn)量約23.0萬(wàn)t,居全國(guó)第三。然而,老病新發(fā)、外來(lái)病和新發(fā)疫病等情況成為鯉養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸,例如鯉春病毒血癥(spring viraemia of carp,SVC)和錦鯉皰疹病毒?。╧oi herpes virus disease,KHVD)等老病以及鯉急性爛鰓病等新發(fā)疫病[2]。鯉急性爛鰓病作為一種新發(fā)疫病,自2003年在河南地區(qū)出現(xiàn)以來(lái),逐漸在河南鯉養(yǎng)殖體系廣泛流行,養(yǎng)殖池塘發(fā)病率約60%,單個(gè)池塘累計(jì)死亡率為50%~80%[3-4],對(duì)當(dāng)?shù)仵庰B(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。2013年洛陽(yáng)市因該病造成約1 000 t鯉死亡,損失上千萬(wàn)元[3]。然而,對(duì)于這種新發(fā)疫病,無(wú)論鯉養(yǎng)殖從業(yè)者還是魚病研究人員均未能提出有效防控措施,究其原因是該病的病原尚不明確。2019年6月,鄭州某鯉養(yǎng)殖場(chǎng)暴發(fā)鯉急性爛鰓病,本研究采集樣品后對(duì)其進(jìn)行初步分析,以探究其發(fā)病原因。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2019年6月,河南省鄭州市某鯉養(yǎng)殖場(chǎng)暴發(fā)鯉急性爛鰓病,發(fā)病鯉體質(zhì)量400~500 g,累計(jì)死亡率約40%,發(fā)病水溫23 ℃。隨機(jī)采集10尾瀕死鯉,低溫保存帶至實(shí)驗(yàn)室作進(jìn)一步分析。

1.2 細(xì)菌和寄生蟲檢測(cè)

肉眼檢查病魚體表、鰓、肝臟、腸道等組織是否有寄生蟲。同時(shí)對(duì)鰓絲制備組織壓片,在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行寄生蟲觀察。

無(wú)菌條件下,用無(wú)菌環(huán)從病魚腎臟和肝臟挑取樣品,劃線接種于BHIA平板,28 ℃恒溫培養(yǎng)24~48 h,觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。

1.3 鰓絲病理觀察

取部分病魚鰓置于含有生理鹽水的平皿中,輕輕漂洗1次,將其轉(zhuǎn)移至新的生理鹽水中,置于體視鏡(Leica,德國(guó))下進(jìn)行形態(tài)觀察。同時(shí),采集健康鯉的鰓作為對(duì)照。

1.4 組織病理學(xué)檢測(cè)

采集病魚的鰓組織樣本,切成約5 mm×5 mm組織塊,浸泡于4%多聚甲醛溶液中。固定組織經(jīng)水洗、乙醇梯度脫水、甲苯透明、石蠟浸泡后包埋呈石蠟組織塊。在常溫下,采用Leica組織切片機(jī)進(jìn)行連續(xù)切片(厚度5 μm),載玻片貼附37 ℃過(guò)夜后HE染色。切片經(jīng)二甲苯脫蠟-乙醇梯度復(fù)水-水洗-蘇木素染色-分化藍(lán)化-伊紅復(fù)染-乙醇梯度脫水-二甲苯透明-樹脂膠包埋-膠包70 ℃烤片48 h。HE染色結(jié)果為細(xì)胞核呈藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)呈紅色,脂滴和水泡不著色。染色結(jié)果經(jīng)光學(xué)顯微鏡(Zeiss,美國(guó))觀察并拍照記錄。

1.5 PCR檢測(cè)

采集病魚的鰓、腦、腎臟和脾臟混合并勻漿,取約30 mg用于核酸抽提。使用TaKaRa MiniBEST viral RNA/DNA Extraction Kit(TaKaRa,大連)提取總核酸(DNA和RNA),操作步驟詳見(jiàn)試劑盒說(shuō)明書??偤怂嵊糜跈z測(cè)CEV、KHV和SVCV,PCR引物和擴(kuò)增靶基因見(jiàn)表1。CEV套式PCR體系和反應(yīng)條件參見(jiàn)溫智清等的研究方法[5]。KHV和SVCV檢測(cè)參考《水生動(dòng)物疾病診斷手冊(cè)》“2.3.7”章[6]和“2.3.9”章[7]。PCR檢測(cè)樣品設(shè)置2個(gè)復(fù)孔,并設(shè)立陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。

1.6 電泳和測(cè)序分析

使用QIAxcel 全自動(dòng)凝膠電泳儀(QIAgen,德國(guó))對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送生工生物工程(上海)有限公司進(jìn)行測(cè)序。使用clustal W生物學(xué)軟件megalign方法對(duì)共計(jì)31條CEV序列進(jìn)行比對(duì),使用MEGA X生物學(xué)軟件maximum likelihood method中的Tamura 3-parameter模型進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析,序列之間比對(duì)1 000次。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀

發(fā)病魚主要的臨床癥狀為在水面聚集慢游,鰓腫脹并潰爛(圖1-A),唇與鼻之間凹陷、頭骨凹凸不平(圖1-B),眼睛凹陷(圖1-C),腎臟腫大至鰾間隔(圖1-D)。

2.2 細(xì)菌和寄生蟲檢測(cè)

將挑去的肝臟和腎臟組織樣品置于BHIA培養(yǎng)基上培養(yǎng)48 h,未見(jiàn)優(yōu)勢(shì)菌落生長(zhǎng)。病魚體表和鰓絲壓片觀察未見(jiàn)寄生蟲。

2.3 鰓絲病變

正常鯉鰓絲末端呈尖狀,形態(tài)清晰,且無(wú)白色黏液(圖2-A)。體視鏡下,可見(jiàn)病魚鰓絲末端鈍圓,呈棒槌狀,形態(tài)不清,鰓絲周圍附有白色絮狀黏液(圖2-B)。

2.4 組織病理變化

組織病理學(xué)結(jié)果表明,健康鯉鰓絲組織結(jié)構(gòu)正常,鰓小片呼吸上皮細(xì)胞偶見(jiàn)空泡變性,鰓絲和鰓小片毛細(xì)血管豐富,偶見(jiàn)上皮細(xì)胞脫落(圖3-A)?;疾◆~鰓絲、鰓小片組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重受損,鰓絲上皮細(xì)胞增生、壞死脫落,鰓弓遠(yuǎn)端和近端鰓小片均有明顯增生,相互融合(圖3-B)。

2.5 PCR檢測(cè)

PCR檢測(cè)結(jié)果表明,KHV和SVCV未見(jiàn)特異性擴(kuò)增,檢測(cè)結(jié)果均為陰性;CEV套氏PCR第一步PCR和第二步PCR分別擴(kuò)增出528 bp和478 bp大小的目的條帶,表明CEV PCR檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性(圖4)。

2.7 CEV序列分析

對(duì)CEV第一步PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,并以CEV P4a的357 bp基因片段進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析。結(jié)果表明,此次河南鄭州檢測(cè)到的CEV 20190530株屬于Ⅱa基因亞型(圖5),并且和中國(guó)分離株(AS1和WJ2016)和日本分離株(CyPP3)同源性最高,約為98.8%。

3 討論

根據(jù)病原和導(dǎo)致臨床癥狀的不同,通常將鯉急性爛鰓病分為寄生蟲性爛鰓、細(xì)菌性敗血癥性爛鰓和腎炎型急性爛鰓3種[3]。寄生蟲性爛鰓常見(jiàn)于黏孢子蟲[9]、指環(huán)蟲、車輪蟲[10]和三代蟲[11]等引起的爛鰓病,肉眼可見(jiàn)病魚體表、內(nèi)臟或鰓上的寄生

蟲,鰓上附有白點(diǎn)狀的黏孢子蟲包囊,顯微鏡下可見(jiàn)包囊中有大量孢子[12]。細(xì)菌性敗血癥性爛鰓主要是由柱狀屈橈桿菌[11]和柱狀黃桿菌[13]等引起,可分為慢性爛鰓和急性爛鰓,普通鯉、草魚和鰱等鯉科魚類均易發(fā)生。腎炎型急性爛鰓可能由KHV[14-15]等病毒性病原引起,常見(jiàn)于普通鯉和錦鯉感染后發(fā)病。河南地區(qū)流行的鯉急性爛鰓病也同樣分為寄生蟲性爛鰓、細(xì)菌性敗血癥性爛鰓和腎炎型急性爛鰓,這3種爛鰓病在河南地區(qū)發(fā)病占比分別為1%~2%、60%~70%和30%~40%[3]。多家科研單位從河南鯉急性爛鰓病病魚中鑒定出KHV、柱狀黃桿菌、維隆氣單胞菌、霍亂弧菌、嗜水氣單胞菌、腐敗瓦希菌群等[3]。因此,在發(fā)生鯉急性爛鰓病時(shí),應(yīng)該通過(guò)臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果加以區(qū)分,做到有針對(duì)性地治療。

CEV感染主要發(fā)生于15~25 ℃,表現(xiàn)為普通鯉體表浮腫或錦鯉嗜睡,鰓潰爛壞死,眼睛凹陷[16]。此次鄭州某鯉養(yǎng)殖場(chǎng)暴發(fā)鯉急性爛鰓病時(shí)水溫約為23 ℃,病魚出現(xiàn)以唇與鼻之間凹陷、頭骨凹凸不平、眼睛凹陷、腎臟腫大至鰾間隔的主要臨床癥狀,發(fā)病水溫和部分臨床癥狀與鯉浮腫病毒感染相似。體視鏡下可見(jiàn)病魚鰓絲末端鈍圓,呈棒槌狀,形態(tài)不清,鰓絲周圍附有白色黏液,患病魚鰓絲和鰓小片組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重受損,鰓絲上皮細(xì)胞增生、壞死脫落,鰓弓遠(yuǎn)端和近端鰓小片均有明顯增生且相互融合,這和CEV的組織病理特征相吻合。Way等報(bào)道,被CEV感染的病魚鰓上皮細(xì)胞腫大并大量增生,鰓小片相互融合[16-17]。PCR方法從鄭州發(fā)病鯉僅檢出CEV,且基因序列與CEV中國(guó)分離株(AS1、WJ2016)及日本分離株(CyPP3)同源性約為98.8%,而細(xì)菌和寄生蟲檢測(cè)均為陰性,且養(yǎng)殖戶表述在鯉急性爛鰓病發(fā)生期間,使用抗生素?zé)o效反而加重其死亡,排除了致病性細(xì)菌和寄生蟲感染的可能。另外,徐立蒲等從河南5個(gè)出現(xiàn)有爛鰓癥狀的鯉養(yǎng)殖場(chǎng)中檢出CEV,而KHV均為陰性[18]。因此,初步推斷此次河南鄭州某鯉養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生的鯉急性爛鰓病為腎炎型急性爛鰓病,其病原為CEV。但該結(jié)論還有待于通過(guò)柯赫氏法則做進(jìn)一步驗(yàn)證,并且由于鯉感染KHV后,其臨床癥狀和CEV感染的臨床癥狀十分相似[5,17],所以臨床上可對(duì)CEV和KHV同時(shí)進(jìn)行檢測(cè),以盡快確定病因。

自1970年代日本新潟首次報(bào)道CEV以來(lái),該病毒可能已通過(guò)錦鯉國(guó)際貿(mào)易傳播至世界其他國(guó)家[16]。2015年,我國(guó)首次在杭州某錦鯉養(yǎng)殖場(chǎng)鑒定出CEV[19],隨后在云南[5]等多地均有確診。此次從河南鄭州患腎炎型急性爛鰓病病魚中檢出CEV,分析其P4a基因片段(357 bp)發(fā)現(xiàn),與中國(guó)分離株(AS1和WJ2016)和日本分離株(CyPP3)同源性最高,均為98.8%,屬于Ⅱa基因亞型,推測(cè)CEV有可能通過(guò)錦鯉貿(mào)易從日本傳入我國(guó),進(jìn)而從錦鯉養(yǎng)殖體系傳入普通鯉養(yǎng)殖體系。目前,基于CEV P4a基因的遺傳進(jìn)化分析,可將CEV主要分為Ⅰ和Ⅱ基因型;其中,CEVⅡ基因型可分為Ⅱa和Ⅱb這2個(gè)基因亞型[8],并且隨著研究的逐步深入,可能會(huì)發(fā)現(xiàn)更多新的CEV基因型[20]。但這些新的基因型也需要更多的研究結(jié)果證實(shí)其科學(xué)性。

目前,對(duì)因CEV感染引起的急性爛鰓病尚無(wú)有效的治療措施,濫用藥物、大換水、拉網(wǎng)捕撈等刺激性措施均會(huì)加重病魚死亡,所以應(yīng)以預(yù)防為主。日常應(yīng)提高養(yǎng)殖場(chǎng)管理水平,避免外來(lái)水生動(dòng)物或其他污染物進(jìn)入養(yǎng)殖場(chǎng);定期對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行疫病監(jiān)測(cè);保持良好的養(yǎng)殖環(huán)境,及時(shí)清理死魚;對(duì)水源進(jìn)行嚴(yán)格管理,養(yǎng)殖廢水要進(jìn)行無(wú)害化處理;同時(shí)在引進(jìn)苗種時(shí),一定要做好隔離檢疫。

參考文獻(xiàn):

[1]張顯良. 2018中國(guó)漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒[M]. 北京:農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)漁政管理局,2019:120-199.

[2]2019中國(guó)水生動(dòng)物衛(wèi)生狀況報(bào)告[M]. 北京:農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)漁政管理局,2019:184-185.

[3]王先科,梁紅茹,賈 滔,等. 河南沿黃漁區(qū)鯉急性爛鰓病調(diào)研[J]. 養(yǎng)殖與飼料,2016(2):55-57,58.

[4]弓龍飛. 黃河鯉“急性死亡”病原調(diào)查[J]. 漁業(yè)致富指南,2019(1):51-53.

[5]溫智清,劉 瑩,唐紹林,等. 云南錦鯉養(yǎng)殖場(chǎng)鯉浮腫病毒的鑒定及基因型分析[J]. 病毒學(xué)報(bào),2017,33(6):905-913.

[6]OIE. Manual of diagnostic tests for aquatic animal [M]. Pair,F(xiàn)rance:World Organisation for Animal Health,2019:328-344.

[7]OIE. Manual of diagnostic tests for aquatic animal [M]. Pair,F(xiàn)rance:World Organization for Animal Health,2019:361-377.

[8]Matras M,Borzym E,Stone D,et al. Carp edema virus in Polish aquaculture-evidence of significant sequence divergence and a new lineage in common carp Cyprinus carpio (L.)[J]. Journal of Fish Diseases,2017,40(3):319-325.

[9]南微微,劉桐令. 鯉魚爛鰓、黏孢子蟲、脂肪肝并發(fā)癥治療實(shí)例[J]. 科學(xué)養(yǎng)魚,2005(7):59.

[10]肖國(guó)華. 網(wǎng)箱養(yǎng)鯉爛鰓病的防治[J]. 科學(xué)養(yǎng)魚,1992(3):18-19.

[11]富麗靜,李文寬,王偉昆,等. 網(wǎng)箱養(yǎng)鯉爛鰓病防治技術(shù)[J]. 淡水漁業(yè),2000,30(7):27.

[12]李長(zhǎng)華,蔣吉生,邊佩華,等. 沈陽(yáng)市于洪區(qū)魚場(chǎng)黏孢子蟲、爛鰓并發(fā)癥的發(fā)生、防治初探[J]. 水產(chǎn)科學(xué),1996,15(5):35-36.

[13]謝海俠. 柱狀黃桿菌毒力相關(guān)因子的研究[D]. 武漢:中國(guó)科學(xué)院研究生院(水生生物研究所),2005:1-2.

[14]Hutoran M,Ronen A,Perelberg A,et al. Description of an as yet unclassified DNA virus from diseased Cyprinus carpio species[J]. Journal of Virology,2005,79(4):1983-1991.

[15]Waltzek T B,Kelley G O,Stone D M,et al. Koi herpesvirus represents a third cyprinid herpesvirus (CyHV-3) in the family Herpesviridae[J]. Journal of General Virology,2005,86(Pt 6):1659-1667.

[16]Way K,Haenen O,Stone D,et al. Emergence of carp edema virus (CEV) and its significance to European common carp and koi Cyprinus carpio[J]. Diseases of Aquatic Organisms,2017,126(2):155-166.

[17]Jung-Schroers V,Adamek M,Teitge F,et al. Another potential carp killer?:carp edema virus disease in Germany[J]. BMC Veterinary Research,2015,11(1):114.

[18]徐立蒲,張 文,王 姝,等. 河南沿黃灘區(qū)鯉浮腫病和錦鯉皰疹病毒病初步調(diào)查研究[J]. 科學(xué)養(yǎng)魚,2017(9):59-61.

[19]Zhang X,Ni Y,Ye J,et al. Carp edema virus,an emerging threat to the carp(Cyprinus carpio)industry in China[J]. Aquaculture,2017,474(33):34-39.

[20]Soliman H,Lewisch E,El-Matbouli M. Identification of new genogroups in Austrian carp edema virus isolates[J]. Diseases of Aquatic Organisms,2019,136(2):193-197.劉立早,張玉平,劉淑梅,等. 牧草類植物對(duì)南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘底泥的修復(fù)效果[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2020,48(24):173-177.

猜你喜歡
癥狀
Don’t Be Addicted To The Internet
保健醫(yī)苑(2022年1期)2022-08-30 08:39:40
出現(xiàn)哪些癥狀要給肝臟做個(gè)檢查?
缺素癥的癥狀及解決辦法
缺素癥的癥狀及解決辦法
預(yù)防心肌缺血臨床癥狀早知道
可改善咳嗽癥狀的兩款藥膳
瓜類蔓枯病發(fā)病癥狀及其防治技術(shù)
吉林蔬菜(2017年10期)2017-11-01 07:47:04
夏季豬高熱病的癥狀與防治
以肺內(nèi)病變?yōu)槭装l(fā)癥狀的淋巴瘤多層螺旋CT與PET/CT表現(xiàn)
黑河市| 建宁县| 东宁县| 长治市| 诏安县| 泰宁县| 石泉县| 曲水县| 肥城市| 吉首市| 三门县| 昭觉县| 桦川县| 安福县| 布尔津县| 晋州市| 临湘市| 德钦县| 邢台县| 黄浦区| 闽侯县| 六安市| 大石桥市| 邳州市| 通榆县| 达拉特旗| 邢台市| 广安市| 辽宁省| 巴林左旗| 柏乡县| 蒙自县| 光山县| 平塘县| 吉林市| 江陵县| 宣汉县| 株洲市| 荥经县| 郸城县| 丰顺县|