孫 燕，李 浪，劉 妮，王玉珠，潘高潮，鄒方倫，陽 旭，龍漢武**

（1.貴州科學(xué)院 山地資源研究所，貴州 貴陽 550002；2.貴州科學(xué)院 生物研究所，貴州 貴陽550009；3.織金竹蓀產(chǎn)業(yè)辦，貴州 織金 552199）

紅托竹蓀（Dictyophora rubrovolvata），屬于鬼筆科（Phallaceae） 竹蓀屬（Dictyophora），是藏穆先生1976 年在《云南植物研究》 上發(fā)表的一個新種[1]。在竹蓀屬中是清香型、名貴食用菌之一，因形態(tài)美麗，脆嫩爽口，味道鮮美，營養(yǎng)豐富[2]，深受消費者喜愛。

紅托竹蓀是典型的中溫好氣型菌類。菌絲的生長溫度為5℃～28℃，最適溫度為20℃～25℃；低于5℃或高于35℃時，菌絲停止生長。子實體適宜溫度為18℃～24℃，最適溫度為22℃；高于28℃，生長緩慢，生長勢弱；35℃以上，停止生長。土壤水分含量在30%～40%均能形成菌蕾，長時間低于25%時，不能形成菌蕾，或菌蕾會失水干縮；長期高于40%時，菌絲生長受到抑制，不易形成菌蕾。由于土壤水分含量高，會影響紅托竹蓀呼吸作用，生長受到抑制[3]，因此紅托竹蓀在生長過程中需通風(fēng)條件，對氣候、土壤條件要求嚴(yán)格。其適應(yīng)性產(chǎn)地主要限于冬無嚴(yán)寒、夏無酷署、霧雨多濕的高原氣候地區(qū)貴州。

貴州作為全國紅托竹蓀的主產(chǎn)地，已獲得“中國竹蓀之鄉(xiāng)”、“國家地理標(biāo)志產(chǎn)品保護”認(rèn)證、“國家地理標(biāo)志證明商標(biāo)”，所生產(chǎn)產(chǎn)品獲得“有機食品”、“無公害農(nóng)產(chǎn)品”等多種稱號。近年來，貴州食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展速度快，已成為助力脫貧攻堅的主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)之一。紅托竹蓀作為貴州脫貧致富產(chǎn)業(yè)重點發(fā)展的特色食用菌，其母種、栽培種在轉(zhuǎn)管繼代培養(yǎng)后，菌株優(yōu)良性狀會發(fā)生退化[4]，因此進行種質(zhì)資源創(chuàng)新和優(yōu)良品種培育是竹蓀產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要保證。

目前各地不同紅托竹蓀分離的菌種繁多，但優(yōu)良菌株的篩選和定向培育工作較少，在生產(chǎn)栽培中，有出現(xiàn)菌絲生長旺盛，但子實體產(chǎn)量低的情況，直接影響竹蓀生產(chǎn)經(jīng)濟效益。因此采集野生菌株子實體，通過分離菌種、馴化、栽培應(yīng)用試驗，補充選育優(yōu)良菌株，成為紅托竹蓀生產(chǎn)的必要環(huán)節(jié)。

依據(jù)食用菌品種選育技術(shù)規(guī)范[5]，收集貴州省部分地區(qū)野生紅托竹蓀種質(zhì)資源，馴化、選育紅托竹蓀優(yōu)良品種，為提升紅托竹蓀產(chǎn)業(yè)發(fā)展，優(yōu)化種質(zhì)資源，促進農(nóng)民增產(chǎn)增效，提供優(yōu)良菌株菌種及儲備提供參考。

1 材料與方法

1.1 育種親本

5 月下旬至6 月上旬，在野生紅托竹蓀生長期，項目組成員先后從貴陽花溪公園（1 108.0 m，東經(jīng)106°66′，北緯26°43′）、平壩縣平壩農(nóng)場（海拔1 300.0 m，東經(jīng)107°23′，北緯27°19′）、金沙縣巖孔鎮(zhèn)（海拔1 632.2 m，東經(jīng)105°55′，北緯27°30′）、大方縣沙壩村（海拔1 540.6 m，東經(jīng)105°31′，北緯27°11′）、貴定縣石板村（海拔1 264.0 m，東經(jīng)107°08′，北緯26°27′） 5 個地點，選擇出菇數(shù)量多、出菇整齊區(qū)域，采集生長健壯、形態(tài)完整、7成～8 成熟、清潔無異物，未受其他微生物和昆蟲侵染菌株15 株（每個地點采集3 株）。

1.2 選育標(biāo)準(zhǔn)及方法

首先篩選出產(chǎn)量高、品相好的菌株，其次進行抗逆性及生長勢試驗。選育程序為：野生紅托竹蓀種質(zhì)資源收集→純菌種分離→菌種培養(yǎng)→生理性能測定（拮抗試驗淘汰與親本無差異的培養(yǎng)物） →初篩→復(fù)篩→區(qū)別性鑒定（DNA 分子鑒定） →中間試驗（均一性、穩(wěn)定性觀察） →示范栽培（均一性、穩(wěn)定性調(diào)查） →優(yōu)良品種。

2 選育過程

2.1 試驗室篩選

試驗室篩選包括純菌種分離、菌種培養(yǎng)、生理性能測定。對采集到子實體消毒處理后，組織分離每個菌株各45 管，進行純菌種培養(yǎng)。篩選潔白、濃密、健壯、生長整齊菌絲各15 管，不同采集地點，同一采集地點之間，進行菌絲拮抗試驗（淘汰無差異培養(yǎng)物），耐低溫、耐高溫試驗，同時擴管備用。

2.2 栽培篩選

2.2.1 小試初篩

接種制作栽培種，在發(fā)菌、出菇試驗中，觀察菌絲生長吃料、長勢、形態(tài)、發(fā)菌時間、出菇時間、出菇整齊度、出菇量、品相等情況，篩選綜合性狀優(yōu)良菌株3 株。

2.2.2 小試復(fù)篩

將初篩選定的優(yōu)良株系進行品比試驗，對品相、產(chǎn)量等綜合性狀進行篩選，篩選出性狀穩(wěn)定、優(yōu)良的菌株系1 株。

2.2.3 區(qū)別性鑒定

將所采集到5 個地點野生菌株子實體，送上海生工生物檢測股份有限公司進行DNA 分子鑒定。

2.2.4 中間試驗

2016 年～2017 年，將復(fù)篩后菌株，在大方某食用菌栽培基地安排栽培試驗，進行均一、穩(wěn)定性觀察。

大方縣石關(guān)村某食用菌栽培基地（位于東經(jīng)105°，北緯27°），屬暖溫帶濕潤季風(fēng)氣候，冬無嚴(yán)寒，夏無酷暑，夏短冬長，春秋相近，陰雨天氣多，日照時數(shù)少。土壤松散透氣，屬酸性黑土，含有豐富的有機質(zhì)和礦物質(zhì)。大棚陰涼，通風(fēng)。

2.2.5 示范栽培

2018 年在織金某林下竹蓀栽培基地（海拔1 260 m，年平均氣溫14.1℃，年降雨量1 436 mm，年日照1 172 h，無霜期327 d，亞熱帶季風(fēng)氣候，土壤潮濕，環(huán)境陰涼） 安排栽培示范，觀察均一性、穩(wěn)定性，進行測產(chǎn)。

3 結(jié)果與分析

貴定縣石板村野生紅托竹蓀馴化后，性狀優(yōu)良，品相、產(chǎn)量、抗逆性指標(biāo)表現(xiàn)突出。形態(tài)特征見圖1。

3.1 生物學(xué)特性

3.1.1 形態(tài)特性

貴定縣石板村紅托竹蓀形態(tài)特征見圖2~圖3。

由圖2、圖3 可知，該菌株菌絲體潔白，濃密，粗壯。外形完整，個體適中，色澤純白，氣味濃厚，烹調(diào)滋味極佳。

3.1.2 栽培特性

貴定石板村菌株試管母種菌絲在5℃～28℃均能生長，以18℃～24℃最適宜，低于5℃停止生長，高于28℃生長受到抑制，超過35℃菌絲失活。生長季節(jié)為3 月到10 月。形成菌蕾時土壤下10 cm 溫度在18℃～24℃，低于18℃或高于24℃原基難以形成。采用闊葉木屑及腐殖土覆土栽培。本紅托竹蓀菌株品相優(yōu)，經(jīng)專家測產(chǎn)，菌株產(chǎn)量0.15 kg·m-2，具有很好的商業(yè)價值。

3.1.3 拮抗試驗及DNA 分子鑒定

貴定石板村紅托竹蓀菌株與其他地點菌株菌絲體共同生長試驗，存在明顯的拮抗現(xiàn)象。見圖4。

由圖4 可知，菌絲體接觸區(qū)存在菌絲隆起，說明與其他地點菌株存在差異[6]。而DNA 分子鑒定結(jié)果表明，5 個地區(qū)紅托竹蓀與粉托鬼筆（Phallus hadriani） 相似度99.63%～99.70%。

3.1.4 抗逆能力

用雜菌感染接種栽培種，使發(fā)菌時間延長，貴定石板村紅托竹蓀菌絲逐漸萌發(fā)而覆蓋雜菌，栽培仍能正常出菇。同時連續(xù)3 年開展抗病蟲害、感染情況調(diào)查，每667 平方米3 個大棚，棚內(nèi)有蚊蟲、鼻涕蟲等，在大棚通風(fēng)條件下，除個別菌蕾遭到蟲害叮咬，其他菌蕾正常生長，開傘，未發(fā)生傳染、爛皮現(xiàn)象，產(chǎn)量基本不受影響。說明該品種抗雜能力、避蟲能力、抗綠霉污染等抗逆性方面具有一定優(yōu)勢。

3.2 適應(yīng)性

在1 720 m（大方縣），1 260 m（織金縣） 不同海拔高度分別進行貴定石板村紅托竹蓀菌株適應(yīng)性試驗。該品種紅托竹蓀在排水良好，通透性較好的土壤中，耐陰，耐涼，生長旺盛，幾乎無病害，品相正常，適應(yīng)性較好。

3.3 穩(wěn)定性、均一性

通過對貴定石板村紅托竹蓀菌株在不同海拔高度（大方縣1 720 m，織金縣1 260 m）、不同地點條件下栽培觀察，其生物學(xué)性狀與第一代優(yōu)株個體性狀一致且產(chǎn)量穩(wěn)定（大方縣0.150 kg·m-2、織金縣0.152 kg·m-）2。

4 結(jié)論

貴定縣石板村野生紅托竹蓀馴化后，菌絲潔白、濃密。菇體（菌柄、菌裙） 潔白，飽滿，容易開傘。菇蓋上孢子粘稠、灰綠色。菌托紅色。口感脆嫩，粘滑。清香味濃。栽培季節(jié)為3 月~4 月，出菇期7月～10 月。菌絲萌發(fā)形成原基能力強，平均單產(chǎn)量0.15 kg·m-2，生物轉(zhuǎn)化率為32%。在生產(chǎn)管理中，加強病蟲害防治，有利于提高紅托竹蓀的產(chǎn)量和品質(zhì)。適宜的栽培料為闊葉木屑、腐殖土。栽培料含水量為65%，適宜溫度18℃～24℃。2016 年～2018 年的中間試驗、示范栽培，均表現(xiàn)出了高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗逆性強等優(yōu)良性狀。在不同海拔地區(qū)試驗產(chǎn)量穩(wěn)定，未出現(xiàn)突變現(xiàn)象及性狀分離情況。