鄭涵之(個(gè)舊市自來(lái)水公司，云南 個(gè)舊 661000)

1 影響飲用水中微生物檢測(cè)的因素

1.1 檢測(cè)環(huán)境對(duì)微生物檢測(cè)結(jié)果有影響

飲用水中微生物的含量的檢測(cè)，環(huán)境對(duì)于其影響是比較大的?？諝獾臏囟?、濕度以及空氣中的含氧量情況，還有微生物培養(yǎng)基中所含有的營(yíng)養(yǎng)成分都會(huì)產(chǎn)生比較大的影響。有的環(huán)境甚至?xí)?dǎo)致水樣中的微生物大量死亡，這種情況下，自然是無(wú)法準(zhǔn)確檢測(cè)出飲用水中微生物的含量了。同時(shí)，還要確保檢測(cè)過(guò)程中的所有操作都是在無(wú)菌的情況下進(jìn)行的，避免外部菌群進(jìn)入待檢測(cè)水樣，造成對(duì)水樣中微生物群落的污染，導(dǎo)致最終檢測(cè)出的菌群的數(shù)量其實(shí)是大于飲用水中實(shí)際含有的菌群的數(shù)量的，造成對(duì)飲用水質(zhì)量的誤判。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備對(duì)微生物檢測(cè)結(jié)果有影響

對(duì)于用于飲用水微生物檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備一定要進(jìn)行定期的保養(yǎng)和維護(hù)，要確保其各項(xiàng)指標(biāo)在使用時(shí)都是正常的，一定不能出現(xiàn)因?yàn)樵O(shè)備老化等問(wèn)題導(dǎo)致的檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。尤其是在飲用水的微生物的檢測(cè)過(guò)程中，會(huì)頻繁地用到恒溫箱，檢測(cè)人員在使用培養(yǎng)箱對(duì)檢測(cè)樣品進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，一定要預(yù)先對(duì)恒溫箱中各個(gè)區(qū)域或者角落的溫度進(jìn)行檢測(cè)，確保恒溫箱內(nèi)部的溫度是在規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)范圍之內(nèi)的，才可將檢測(cè)樣品放進(jìn)去。避免因?yàn)闇囟葐?wèn)題導(dǎo)致對(duì)水樣中的菌落培養(yǎng)不到位，致使最終檢測(cè)結(jié)果失誤。

1.3 人為因素導(dǎo)致微生物檢測(cè)結(jié)果有異常

實(shí)驗(yàn)操作人員對(duì)于飲用水中微生物檢測(cè)的主要影響在于操作人員技術(shù)的規(guī)范性。若檢測(cè)人員在進(jìn)行微生物檢測(cè)的過(guò)程中沒(méi)有按照規(guī)定的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)去執(zhí)行，或者執(zhí)行得不夠到位，則有可能造成最終檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)比較大的誤差。另外，飲用水中微生物含量的檢測(cè)是有時(shí)效性的，若實(shí)驗(yàn)人員沒(méi)有及時(shí)對(duì)采取的式樣進(jìn)行檢測(cè)，則水樣中的微生物有可能因?yàn)闀r(shí)間的原因被破壞掉或者已經(jīng)發(fā)生一些改變。

2 飲用水微生物檢測(cè)質(zhì)量控制

為了增強(qiáng)生活飲用水中微生物的檢測(cè)與分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，檢測(cè)人員在進(jìn)行取樣檢測(cè)的過(guò)程中要注意對(duì)各影響因素的控制，要控制好實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)環(huán)境，注意各檢測(cè)設(shè)備以及試驗(yàn)器皿的清潔與消殺工作，將實(shí)驗(yàn)環(huán)境對(duì)于檢測(cè)結(jié)果的影響降到最低。要使用能夠滿(mǎn)足水樣的檢測(cè)需求的設(shè)備，其測(cè)量精度以及溫度控制范圍等一定要符合相關(guān)的檢測(cè)規(guī)定。

3 飲用水中微生物檢測(cè)的檢測(cè)項(xiàng)目

3.1 菌落總數(shù)

飲用水水樣中的菌落總數(shù)指的是在有氧環(huán)境中，將待檢測(cè)的水樣與與菌落培養(yǎng)基混合放置于37℃的恒溫環(huán)境中培養(yǎng)48小時(shí)，之后檢測(cè)水樣中的菌落的數(shù)量并除以水樣的體積所獲得的數(shù)字即為標(biāo)準(zhǔn)體積的水樣中的菌落總數(shù)[1]。菌落總數(shù)只能作為飲用水的一般性污染檢測(cè)指標(biāo)，因?yàn)閷?duì)于某些厭氧或微需氧菌以及有特殊要求的菌類(lèi)來(lái)說(shuō)，這樣的培養(yǎng)環(huán)境并不能滿(mǎn)足其生存需求，致使這些菌類(lèi)很難繁殖，會(huì)導(dǎo)致其銳減甚至死亡。

3.2 總大腸菌群

大腸菌群在一定的條件下夠幫助乳糖發(fā)酵產(chǎn)生酸液或者氣體，進(jìn)行水樣中的總大腸菌群的測(cè)定時(shí)使用的就是這個(gè)原理。總大腸菌群作為反映飲用水被糞便污染情況的指標(biāo)，其一般檢測(cè)結(jié)果為每100mL的水樣中的大腸菌群的最近似數(shù)，若其結(jié)果超過(guò)了飲用水中微生物含量規(guī)定，就說(shuō)明飲用水可能受到了人畜糞便的污染[2]。

3.3 耐熱大腸菌群

耐熱大腸菌群又名糞大腸菌群，它也是大腸菌群的一種，耐熱大腸菌群在44～44.5℃的環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)后會(huì)在24小時(shí)內(nèi)發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣[3]。耐熱大腸菌群的生存條件更為苛刻，絕大多數(shù)的耐熱大腸菌群都是直接來(lái)源于人畜的糞便。故而，若所測(cè)試的水樣中含有耐熱大腸菌群則更能說(shuō)明飲用水受到了糞便的污染，進(jìn)而說(shuō)明飲用水中含有腸道致病菌的可能性也更大。耐熱大腸菌群的測(cè)定是對(duì)水樣中的總大腸菌群測(cè)定的一種補(bǔ)充，是對(duì)飲用水是否受到污染的進(jìn)一步確認(rèn)，是指示飲用水糞便污染的更明確的指標(biāo)。

4 水樣采集規(guī)則及注意事項(xiàng)

4.1 采集原則

在進(jìn)行飲用水的水樣采集的過(guò)程中，一定要注意所采集的水樣必須能夠代表所要測(cè)試的水源的質(zhì)量，除此之外還要保證所采集的水樣不會(huì)受到外部的任何意外因素的污染。在進(jìn)行水樣采集之前，一定要制定相關(guān)的采樣計(jì)劃，要確定將使用怎樣的采樣方法，在什么地點(diǎn)，采取多少數(shù)量的水樣，每份水樣的體積又是多少。同時(shí)，還要注意，采集到的水樣的保管與運(yùn)輸，要進(jìn)行一定的采樣質(zhì)量控制，確保所采集的水樣最終的測(cè)定結(jié)果是能夠完全代表所要測(cè)定的飲用水的質(zhì)量的。

4.2 采集容器

在進(jìn)行采樣容器的選擇時(shí)，要遵循一定的選擇原則，要從待測(cè)水樣的采集需求出發(fā)，選取最合適的采集容器，要注意采集容器的材質(zhì)，開(kāi)口，體積等。此外，容器的內(nèi)壁也不能對(duì)所要測(cè)試的組分有吸收或者吸附的影響。裝取水樣的容器對(duì)于外界的環(huán)境要有充分的適應(yīng)性并且其抗震能力也要相對(duì)強(qiáng)一些。在容器的大小，形狀以及質(zhì)量的選擇上都要與采樣的目標(biāo)相結(jié)合，幫助采樣人員更準(zhǔn)確地獲取到最合適的水樣。

4.3 自來(lái)水水樣

自來(lái)水的水樣采集包含兩個(gè)部分：首先是出場(chǎng)水。出廠(chǎng)水是經(jīng)自來(lái)水廠(chǎng)處理過(guò)后的水，進(jìn)行出廠(chǎng)水的采集時(shí)，采集地點(diǎn)的設(shè)置應(yīng)該著重于出廠(chǎng)二字，也就是在飲用水處理完成之后，被送往城市的各用水區(qū)域之前的之一時(shí)間段的某一個(gè)點(diǎn)上。末梢水則是城市居民的水龍頭出的水。進(jìn)行末梢水的水樣采集時(shí)，要注意采集的時(shí)間。在水樣采取時(shí)，應(yīng)該先將水龍頭打開(kāi)讓水流流出一段時(shí)間，避免自來(lái)水在管道中滯留造成的部分組分的析出，附著。同時(shí)還應(yīng)該對(duì)水龍頭進(jìn)行消毒處理，避免水龍頭上的微生物混入采集的水樣中。

4.4 水源水水樣

所謂的水源水是指城市生活飲用水供水水源地的水。在進(jìn)行水源水的采樣是，一般會(huì)選取汲水處的水進(jìn)行采集。水源水的采集有：表層水的采集。如河流，湖泊等水源地，可以直接使用水桶等容器進(jìn)行水樣采集。一定深度的水的采集。如水庫(kù)等有一定水深的水源地，則可使用直立式采水器進(jìn)行水樣采集。最后還有泉水和井水的水樣采集。泉水的采樣分為兩種狀況，一種是自噴泉水，這種直接在泉水涌出口進(jìn)行水樣采集即可。而不自噴的泉水，則需要將抽水管中的水用新水代替后，才能使用采樣工具進(jìn)行采集。

4.5 水樣采集注意事項(xiàng)

在進(jìn)行飲用水的水樣采集的過(guò)程中，要注意所有的環(huán)節(jié)都要進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作，避免水樣遭受到來(lái)自外界菌群的污染。對(duì)于采集好的水樣，要做好其標(biāo)記工作。要按照一定的規(guī)律標(biāo)記好每份水樣的名稱(chēng)，采集地點(diǎn)，時(shí)間等。并將所有的水樣整齊地放置好。在運(yùn)送水樣的過(guò)程中，要注意中間消耗的時(shí)間最好不要超過(guò)2h。

5 各項(xiàng)微生物指標(biāo)的檢測(cè)方式

5.1 菌落總數(shù)測(cè)定方式

在進(jìn)行水樣的菌落總數(shù)的測(cè)定過(guò)程中，要先將即將檢測(cè)的水樣充分混勻，避免因?yàn)殪o止造成水樣中的微生物分布不均。之后要將已經(jīng)混勻的待測(cè)樣品移取到培養(yǎng)皿中，在進(jìn)行樣品移取的過(guò)程中要注意所使用的移取儀器以及培養(yǎng)皿的消毒工作。在已經(jīng)盛放有待測(cè)樣品的培養(yǎng)皿中倒入一定量的已經(jīng)處理好的培養(yǎng)基并做好其與待測(cè)樣品的混合工作，這里不能使用攪拌的方式，而是要通過(guò)旋搖培養(yǎng)皿來(lái)進(jìn)行混勻工作。之后，按照規(guī)定的培養(yǎng)方式，對(duì)已有的待測(cè)混合物進(jìn)行足夠時(shí)間的培養(yǎng)，完成后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)即可。

5.2 總大腸菌群測(cè)定方式

總大腸菌群的測(cè)定一般使用多管發(fā)酵法。第一步是初步發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。將水樣與乳糖蛋白培養(yǎng)液混合后在在特定的溫度下對(duì)其進(jìn)行固定時(shí)間的培養(yǎng)，觀(guān)察其有無(wú)產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象。若是有，就可進(jìn)行第二步，這一步對(duì)于待測(cè)樣品的培養(yǎng)需要用到的是伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，主要是觀(guān)測(cè)待測(cè)樣品中的菌落特征，對(duì)菌落的種類(lèi)進(jìn)行一個(gè)大致的判斷，而為了幫助這種判斷的結(jié)果更加明確，一般還需要進(jìn)行革蘭氏染色和顯微鏡檢的操作。最后一步是驗(yàn)證試驗(yàn)。為了確保檢測(cè)出的菌群的確是大腸菌群，要進(jìn)行再次試驗(yàn)對(duì)其種類(lèi)進(jìn)行驗(yàn)證。這里重復(fù)上述步驟的操作即可。

5.3 耐熱大腸菌群測(cè)定方式

耐熱大腸菌群的測(cè)定方式與總大腸菌群的測(cè)定方式類(lèi)似，知識(shí)在第一步的初步發(fā)酵實(shí)驗(yàn)之后，要再添加一步耐熱培養(yǎng)。即將第一步發(fā)酵后的陽(yáng)性管中的培養(yǎng)物與EC肉湯進(jìn)行接種，然后在44.5℃的培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)24h，到時(shí)間之后觀(guān)察期產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。第三步則是平板培養(yǎng)[4]。對(duì)于耐熱培養(yǎng)后產(chǎn)氣的樣品將其接種在EMB平板上，在36±1℃的培養(yǎng)溫度中培養(yǎng)24h。這一步屬于是證實(shí)實(shí)驗(yàn)，若發(fā)現(xiàn)有典型菌落，則查詢(xún)MPN表獲取菌落的具體信息，之后出具檢測(cè)報(bào)告。

5.4 大腸埃希氏菌測(cè)定方式

大腸埃希氏菌測(cè)定使用的是EC-MUG培養(yǎng)基，其檢測(cè)對(duì)象是總大腸菌群檢測(cè)中經(jīng)過(guò)初步發(fā)酵實(shí)驗(yàn)后產(chǎn)出了酸液或者氣體的樣品。將檢測(cè)試管中的樣品液體倒入裝有EC-MUG培養(yǎng)液的試管中，使用與耐熱大腸桿菌檢測(cè)中同樣的培養(yǎng)條件，進(jìn)行恒溫箱或者恒溫水浴培養(yǎng)，若使用的是恒溫水浴，培養(yǎng)管中的液體必須完全淹沒(méi)在水浴中。完成培養(yǎng)步驟后，通過(guò)紫外燈的輔助來(lái)幫助查看是否有大腸埃希氏菌的存在。

6 分析飲用水水樣微生物檢測(cè)的結(jié)果

通過(guò)上述檢測(cè)方式依次檢測(cè)出所有待檢測(cè)的水樣中的的各菌落群數(shù)后，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)的方式計(jì)算出平均的菌群數(shù)量，查詢(xún)相關(guān)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，出具飲用水中微生物含量是否合格的檢測(cè)報(bào)告。若不合格，要指明其污染等級(jí)以及是哪種污染。要注意，飲用水微生物含量檢測(cè)報(bào)告中所包含的各項(xiàng)數(shù)據(jù)在進(jìn)行錄入時(shí)，若其菌落數(shù)為1～100時(shí)，可直接錄入真實(shí)數(shù)據(jù)即可，若大于100時(shí)，則取其中兩位有效數(shù)字。合格的飲用水中應(yīng)該是不含有總大腸菌群，耐熱大腸菌群以及大腸埃希氏菌群的，而菌落的總數(shù)也應(yīng)該在100/100mL以?xún)?nèi)。

7 結(jié)語(yǔ)

城市生活飲用水中的微生物的檢測(cè)與分析反映了城市生活飲用水中的微生物的含量，進(jìn)而反映了飲用水中是否包含有腸道致病菌，是否適合居民的日常飲用，是檢測(cè)生活飲用水的質(zhì)量的重要內(nèi)容，也是保障城市居民飲水安全的重要措施。檢測(cè)人員要在嚴(yán)格的檢測(cè)環(huán)境下對(duì)精心采集的檢測(cè)水樣進(jìn)行專(zhuān)業(yè)的檢測(cè)工作，幫助城市居民做好生活飲用水的質(zhì)量把關(guān)工作，提高城市居民的用水安全。