石松平，何劍橋，丁仰保，周華波,2，崔柏楊，劉林林，余良政，陳 櫻

（1.廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南寧 530004；2.南寧市華波寵物醫(yī)院，南寧 530004）

犬流感（canine influenza，CI）是一種由犬流感病毒（Canine influenza virus，CIV）引起的急性接觸性呼吸道傳染病。病犬臨床癥狀表現(xiàn)主要為打噴嚏、流鼻涕、咳嗽、結(jié)膜炎、發(fā)燒（＞39.5℃）和食欲下降等，病程持續(xù)大約10～12 d，不同品種、年齡和性別對該病毒均可表現(xiàn)易感。2004年，美國佛羅里達(dá)州灰犬發(fā)生未知病原感染的呼吸道疾病，“犬流感”的命名由此而產(chǎn)生。通過基因序列分析表明，該病毒與上世紀(jì)90年代在美國流行的H3N8亞型馬流感病毒（Equine influenza virus，EIV）親緣關(guān)系較近，完成了馬-犬的跨宿主傳播。緊接著，2007年韓國首次報(bào)道了禽源H3N2亞型感染犬，該病毒引發(fā)犬只出現(xiàn)以高熱、咳嗽和流鼻涕為主要特征的呼吸道癥狀，并且出現(xiàn)犬只死亡，之后該病毒迅速在亞洲和美洲出現(xiàn)，并建立了穩(wěn)定體系。除了上述提及的亞型，研究發(fā)現(xiàn)犬可以作為流感病毒中間宿主，可自然感染來自不同宿主不同亞型的流感病毒，例如人流感病毒（季節(jié)性H1N1亞型、H3N2亞型和H1N1/2009甲型流感病毒）[1-3]、禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）（H5N1亞型、H5N2亞型、H9N2亞型、H10N8亞型和H6N1亞型）[4-8]和豬流感病毒（Swine influenza virus，SIV）（H3N2和H1N1亞型）[9-10]，甚至犬可作為流感病毒的“混合容器”產(chǎn)生新型重配病毒，如韓國報(bào)道的H3N1亞型重配病毒[11]，H3N2亞型CIV與H5N1亞型禽流感病毒重配毒株[12]，廣西發(fā)現(xiàn)的H1N1亞型SIV與禽源H3N2亞型病毒重配的H1N2亞型和H3N2亞型病毒[13]。隨著中國成為世界第三大寵物占有國，寵物犬逐漸成為流感病毒進(jìn)化和繁衍的“溫床”。盡管目前尚未有CIV跨種感染人的報(bào)道，但寵物犬的中間宿主作用和“混合容器”的角色，勢必使其在流感病毒生態(tài)循環(huán)中起到重要作用，對人類公共衛(wèi)生造成潛在的威脅。為此，本文從CIV的流行病學(xué)及其在跨宿主傳播中的作用進(jìn)行闡述。

1 CIV的流行病學(xué)特征

1.1 H3N8亞型EIV感染犬 2004年，在美國佛羅里達(dá)州的灰獵犬中首次發(fā)現(xiàn)并分離出H3N8亞型流感病毒，部分病犬出現(xiàn)嚴(yán)重出血性氣管炎、支氣管肺炎、胸膜炎及血管炎等癥狀并伴隨稽留熱，最后全部死亡，其余病犬僅出現(xiàn)低燒、咳嗽等溫和呼吸道癥狀。至2015年，美國11個(gè)州均有報(bào)道賽犬被感染并出現(xiàn)明顯呼吸道癥狀。經(jīng)血清學(xué)調(diào)查，許多寵物犬也出現(xiàn)感染情況，證實(shí)該病毒可在不同犬種間進(jìn)行傳播。截至2009年，共有30個(gè)州發(fā)現(xiàn)寵物犬感染病例，表明該病毒已在美國寵物犬中呈流行態(tài)勢[14]。

對賽犬和寵物犬中分離所得H3N8亞型病毒毒株的基因序列分析顯示其與美國流行的H3N8亞型馬流感病毒親緣關(guān)系十分相近，因此推測該病毒可能是賽犬在比賽場地內(nèi)與馬直接接觸并被感染。一項(xiàng)回顧性血清學(xué)研究顯示，1998至2003年間就可能發(fā)生了跨種傳播。進(jìn)一步研究分析發(fā)現(xiàn)，H3N8亞型流感病毒HA片段上裂解位點(diǎn)區(qū)域和受體位點(diǎn)結(jié)合區(qū)域的氨基酸序列突變導(dǎo)致該病毒可在犬體內(nèi)適應(yīng)性變異，并持續(xù)傳播產(chǎn)生致病性。除美國外，英國、澳大利亞和巴西有報(bào)道犬感染H3N8亞型流感病毒，血清學(xué)檢測呈陽性，但均未成功分離出該病毒。以上研究證據(jù)顯示，H3N8亞型流感病毒由馬傳染給犬，并在犬群中穩(wěn)定傳播，證明該病毒已突破種間屏障。

1.2 H3N2亞型AIV感染犬 2006年，我國廣東發(fā)現(xiàn)禽源H3N2亞型流感病毒感染犬。2007年，韓國學(xué)者首次報(bào)道了該病毒感染犬的事件，他們從3例患嚴(yán)重呼吸道疾病的病犬中分離出3株病毒，這些病毒的八個(gè)片段均來源于禽流感病毒，并且相互間存在極高同源性。隨后，Lee等[15]對韓國國內(nèi)5個(gè)犬養(yǎng)殖場、1個(gè)本地動(dòng)物市場和60家寵物醫(yī)院進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示，829份血清樣品中，農(nóng)場犬的流感血清陽性率為18.84%（68/361），犬流感（H3抗體）陽性率為4.99%（18/361），其中曾經(jīng)暴發(fā)嚴(yán)重呼吸道疾病的犬場的血清陽性率達(dá)到100%。此外寵物犬的陽性檢出率相較農(nóng)場犬檢出率低，血清陽性率和H3抗體陽性率均為0.48%（2/419），未暴發(fā)禽源CIV感染的部分犬場血清陽性率在0%～6%。這些數(shù)據(jù)表明農(nóng)場犬較寵物犬更易受到H3N2亞型CIV的感染。禽源H3N2犬流感病毒雖然總體檢出率較低，但在農(nóng)場犬和寵物犬中頻頻出現(xiàn)，且在韓國地區(qū)犬群中存在散發(fā)流行趨勢。

此外，H3N2 CIV在中國多個(gè)省份呈地方性流行。2006年～2007年，廣東省報(bào)道了該病毒，序列分析發(fā)現(xiàn)所獲得的毒株與韓國流行的禽源H3N2亞型犬流感譜系分支接近，并且證實(shí)該病毒能在犬與犬之間進(jìn)行有效傳播。此外，通過對不同犬群進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大約15%的流浪犬和5%的寵物狗的血清中含有針對H3N2 CIV的抗體[16]。隨后2009年～2012年，北京、遼寧、浙江、江蘇等地也陸續(xù)分離出與韓國和廣東高度同源的H3N2 CIV[17-20]。2012年的南京分離株與之前CIVs分離株存在一定程度的變異，和2013年黑龍江分離株同源性更高[21]。2012年2月～11月，Zhang等[22]從黑龍江和吉林24家不同寵物醫(yī)院和動(dòng)物收容所收集了723份犬血樣，其中流浪犬的H3N2亞型犬流感血清陽性率為20.2%（45/223），寵物犬的陽性率為33.2%（166/500），相較2010年深圳報(bào)道的H3N2犬流感血清陽性率（6.71%，31/642）更高。2012年1月至2013年在我國北方的另一項(xiàng)寵物犬血清學(xué)調(diào)查中，H3N2亞型犬流感陽性率為3.5%（31/882），較2007年韓國寵物犬血清陽性率（0.48%）高，并且每個(gè)月均能檢出陽性。另外，不同年齡犬群感染率差異顯著，2到5歲犬群H3N2亞型犬流感陽性檢出率最高，研究推測其原因可能為該年齡段的犬有更多精力和戶外接觸時(shí)間，而性別對犬感染流感概率影響不大[1,23]。

2015年后，美國芝加哥洲及其相鄰地區(qū)的病犬中相繼檢出H3N2亞型CIV，感染病例呈暴發(fā)趨勢增長，基因分析表明病毒株與2007年韓國的流行株存在高度同源性[24]。禽源H3N2亞型流感病毒經(jīng)歷將近10年的演化，在不同地區(qū)形成穩(wěn)定的譜系，并且成功完成了禽-犬的跨種傳播。

1.3 H5、H9、H10和H6亞型AIV感染犬 自從1997年香港暴發(fā)H5N1亞型高致病性禽流感（highly pathogenic avian influenza，HPAI ）病毒感染人致死事件，時(shí)隔6年之后，2003年，該病毒在東南亞肆虐，致死人事件不斷上升[4]。在人類暴發(fā)HPAI H5N1感染期間，泰國報(bào)道了貓和犬通過攝食HPAI H5N1感染的禽類尸體而致死。2006年，臺(tái)灣也報(bào)道了一例犬進(jìn)食感染HAPI H5N1鴨尸體出現(xiàn)呼吸道癥狀后死亡的病例。為了證實(shí)HPAI H5N1是否能真正感染犬，Chen等[25]人采用人工感染的方式，進(jìn)一步證實(shí)犬對HPAI H5N1高度易感，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示感染犬出現(xiàn)厭食、發(fā)燒、結(jié)膜炎、呼吸困難、咳嗽等流感臨床癥狀，其中一只犬出現(xiàn)死亡。有動(dòng)物試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明貓、犬對該病毒表現(xiàn)易感，但攻毒犬臨床癥狀僅為結(jié)膜炎和短暫體溫上升，攻毒貓除呼吸道癥狀外可檢測到鼻腔排毒，未分離出病毒[26]。到目前為止尚無犬貓間直接傳播或犬種間傳播的報(bào)道，無法驗(yàn)證犬在該亞型流感病毒傳播中起到重要作用[27]。

2009年，有研究者從中國山東的一條有明顯呼吸道癥狀的病犬中分離出一株新型H5N2亞型流感病毒，經(jīng)基因分析證實(shí)該毒株為SIV-AIV的重組毒株。研究還表明，新型重組H5N2亞型流感病毒可通過直接或間接方式感染犬，大多數(shù)犬可出現(xiàn)溫和呼吸道癥狀，如體溫短暫升高、結(jié)膜炎、流涕、鼻塞、微咳、鼻腔排毒和血清轉(zhuǎn)陽等情況，但無病犬致死[5]。

Sun等[28]在廣西首次從犬中分離到一株H9N2亞型流感病毒，該分離株八個(gè)基因片段均來自歐亞類禽譜系A(chǔ)IV，為五重基因重組株，與AIV H9N2存在高度同源性。研究中另一項(xiàng)對AIV H9N2的血清學(xué)試驗(yàn)顯示，2010年初～2011年末，從寵物診所和鄉(xiāng)鎮(zhèn)收集的犬血清樣品中陽性檢出率分別為20.21%（92/455）和28.98%（273/942），而2012年犬血清陽性檢出率則高達(dá)44.85%（410/914），證實(shí)AIV H9N2感染犬并非偶發(fā)事件。此外，至2011年3月，H9N2亞型流感病毒在犬中分離率大幅上升，進(jìn)一步推測該亞型病毒宿主范圍已擴(kuò)大到犬中，這為后續(xù)防控監(jiān)測增加了難度。

2013年末，江西確診了人感染AIV H10N8并致死的病例[29]，此外，H10N8亞型流感病毒被認(rèn)為與第二波人甲型H7N9流感病毒同步暴發(fā)[30]。Su等[31]以AIV H10N8為抗原對生活在上海、廣東、浙江和江蘇等地的活禽市場（live poultry markets，LPMs）附近的犬進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查，2357份樣品中有6份樣品的HI和MN抗體滴度均≥1∶20，3份樣品的MN抗體滴度≥1∶1280并強(qiáng)烈暗示犬曾被H10N8感染。研究證實(shí)AIV H10N8可感染犬，也進(jìn)一步證實(shí)LPMs可能是近年人感染AIV H7N9和H10N8的重要來源之一。另外，由于犬長期生活在LPMs環(huán)境，使其感染新型AIV的概率上升，基于犬的中間宿主作用，不排除其在今后成為不同亞型禽流感病毒重配“溫床”的可能性。

自1972年后，AIV H6N1在臺(tái)灣本地雞群中開始擴(kuò)散并形成穩(wěn)定循環(huán)[32]。有研究以AIV H6N1和AIV H5N2為抗原對臺(tái)灣本地犬群進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示家養(yǎng)犬和流浪犬的抗體陽性率分別為1.1%（3/281）和3.1%（6/193），其中有1個(gè)樣品抗AIV H6N1[7]。之后，該研究還成功從一只出現(xiàn)嚴(yán)重呼吸道癥狀的病犬中分離出一株H6N1亞型流感病毒，經(jīng)基因分析表明，該毒株八個(gè)基因片段均為禽源，推測禽流感病毒可能已在犬體內(nèi)存在適應(yīng)性感染。

1.4 人流感病毒感染犬 自2009年H1N1甲型流感病毒（pdm/09）在人類大暴發(fā)后，該病毒就潛入到不同宿主體內(nèi)。有研究表明該病毒可在自然條件下感染犬，但不能在犬只間進(jìn)行有效傳播。2009年，意大利一項(xiàng)研究表明，有3%（29/964）的犬呈pdm/09抗體陽性。到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)pdm/09病毒在犬群中流行。此外，通過血清學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，犬感染H3N2亞型季節(jié)性人流感病毒和pdm/09病毒的抗體陽性率分別達(dá)到1.5%和1.2%，其中pdm/09感染犬群無明顯年齡、性別和季節(jié)發(fā)生差異[1]。此外，通過病毒分離及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都證實(shí)了甲型流感病毒pdm/09可感染犬，為人流感病毒感染犬提供了直接的證據(jù)。

B型流感病毒常與A型流感病毒共同呈季節(jié)性流行或局部暴發(fā)，嚴(yán)重威脅人類公共社會(huì)衛(wèi)生安全。有研究曾在海豹體內(nèi)檢出B型流感病毒。另一研究顯示，犬在攻毒或直接接觸方式下無法感染B型流感病毒，推測犬并非該亞型流感病毒的自然宿主[2]。研究還表明，人季節(jié)性H3N2亞型流感病毒相對其他流感病毒對狗更易感，不排除犬可能作為人流感病毒的中間宿主，進(jìn)而發(fā)生跨物種傳播，對公共衛(wèi)生安全造成影響。

1.5 SIV感染犬 目前，SIV流行的主要亞型有H1N1、H1N2和H3N2。關(guān)于SIV感染犬的事件鮮有報(bào)道。2013年，陳櫻等[10]從疑似呼吸道癥狀的寵物犬中分離獲得兩株CIVs，經(jīng)序列對比分析證實(shí)這兩株病毒與類人H3N2亞型SIV有極高同源性，屬于Moscow/10/99-like譜系，首次報(bào)道了SIV感染犬的事件。此后，研究人員對廣西800份犬鼻拭子監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)多種新型重配H1N1亞型SIV感染犬的現(xiàn)象，經(jīng)序列分析證實(shí)所獲得的毒株片段均來源于SIV的不同譜系，其中HA和NA片段來源于歐亞類禽譜系，內(nèi)部基因PB2、PB1、PA和NP均來源于pdm/09譜系，而NS基因來源古典SIV譜系，M基因分別來自歐亞類禽和pdm/09譜系[13]。該報(bào)道再次提出了犬感染SIV的可能性，但是至于豬-犬跨宿主傳播的分子機(jī)制，目前尚不清楚。到目前為止，關(guān)于SIV在犬中流行情況知之甚少，也沒有證據(jù)證實(shí)SIV在犬群中傳播，但由于存在SIV感染人事件的報(bào)道，因此不排除這些病毒通過豬-人-犬的途徑進(jìn)行傳播。

1.6 新型重配流感病毒在犬中的發(fā)現(xiàn) 從上述的報(bào)道中，我們了解到犬可作為中間宿主感染不同宿主來源，多種亞型的流感病毒。近年來，通過血清學(xué)調(diào)查也發(fā)現(xiàn)多種亞型流感病毒可以共感染犬，并在犬群中循環(huán)，這無疑為產(chǎn)生新型重配流感病毒提供了良好的條件。2010年，Song等[11]從252份犬鼻拭子中分離到一株H3N1亞型流感病毒，毒株HA基因片段與H3N2亞型CIV同源性達(dá)99.6%，其余基因片段則與pdm/09病毒高度同源（99.1%～99.9%），這株病毒感染犬后無明顯臨床癥狀，僅有輕微組織病理學(xué)變化，但病犬鼻腔中可檢測到病毒排出。2012年，Moon等[3]分離到另一株基因重組的H3N2亞型毒株（CIV/H3N2mv），其M基因來源pdm/09譜系，其他基因片段來源H3N2 CIV。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，H3N2mv可在犬體內(nèi)有效復(fù)制并造成典型臨床癥狀，引起呼吸道病理變化。除此之外，Chen等[13]發(fā)現(xiàn)H3N2 CIV部分片段與SIV重配形成了H1N1、H3N2和H1N2新型病毒，并且能在小鼠體內(nèi)較好復(fù)制，甚至造成小鼠死亡。不同宿主流感病毒感染犬的事件，增加其產(chǎn)生重配病毒的幾率。介于人與犬之間的親密關(guān)系，加強(qiáng)對CIV 的監(jiān)控對于控制犬-人跨宿主傳播具有重大意義。

2 診斷和防治

臨床中H3亞型癥狀表現(xiàn)與“犬窩咳”極為相似，H5亞型臨床癥狀輕微，而H9亞型表現(xiàn)出一定毒株特異性，因此診斷主要依循實(shí)驗(yàn)室手段，如病毒分離鑒定、RT-PCR技術(shù)、血清學(xué)診斷技術(shù)、ELISA等。目前，病毒分離培養(yǎng)是犬流感鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)。一般取病犬鼻拭子或咽拭子，經(jīng)無菌處理后接種于SPF雞胚羊膜腔或尿囊腔中，3至5日可檢測陽性結(jié)果，但H3亞型在雞胚中產(chǎn)量較低，同時(shí)使用MDCK（犬腎細(xì)胞）培養(yǎng)可提高分毒率。RT-PCR技術(shù)則利用流感病毒M基因的高保守性，能直接檢測出病毒基因片段，相較病毒分離培養(yǎng)高效快速，適用于任何病毒亞型的陽性檢測，但病毒排毒期外采集的臨床樣本在使用分子技術(shù)鑒定時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陰性。血清學(xué)診斷中常使用HI試驗(yàn)，敏感性高，可在感染動(dòng)物出現(xiàn)臨床癥狀7天后檢測到抗體水平，是確定犬流感病毒感染的重要診斷方法。目前ELISA檢測技術(shù)主要利用NP基因診斷流感病毒感染與否，另外，有研究提出ELISA檢測的最佳敏感性僅為50%，且受檢測條件（采樣時(shí)間和排毒量）限制，推測在犬群中出現(xiàn)流感暴發(fā)的情況下才具實(shí)用意義[33]。

本病目前尚無有效疫苗預(yù)防及臨床治療方法，除部分嚴(yán)重臨床癥狀病犬需針對性治療外，多數(shù)犬感染流感后預(yù)后良好。臨床常用的窄譜抗病毒藥物為金剛烷胺類，但由于濫用或使用劑量不合理，流感病毒普遍對其產(chǎn)生一定耐藥性。部分中草藥制劑如穿心蓮、魚腥草、板藍(lán)根等也對流感具一定防治作用。另外，美國疾控中心也提出使用廣譜抗菌藥物進(jìn)行治療，以期達(dá)到更好地控制犬流感暴發(fā)。病犬診療護(hù)理期間需維持其能量攝取，增強(qiáng)免疫力，避免繼發(fā)感染，如部分呼吸道及肺部炎癥；犬舍出現(xiàn)病例時(shí)應(yīng)及時(shí)隔離防護(hù)，同時(shí)維持犬舍環(huán)境的清潔；由于流感病毒的低溫適應(yīng)性及流感暴發(fā)的季節(jié)性特點(diǎn)，還應(yīng)該對病犬和犬舍環(huán)境進(jìn)行恒溫保護(hù)。

3 展望

目前，犬群中能穩(wěn)定流行的僅有H3N8亞型和H3N2亞型流感病毒，尚未有CIV感染人事件的報(bào)道。盡管如此，近年來，不同來源不同亞型的流感病毒不斷侵入犬群，并在犬體內(nèi)產(chǎn)生了多種重配病毒，對人類健康構(gòu)成了潛在威脅。2013年，H7N9亞型AIV跨種感染人事件頻頻發(fā)生，并且在家禽中廣泛流行，而且研究發(fā)現(xiàn)這些病毒已經(jīng)具有感染哺乳動(dòng)物的能力[34]。因此犬在流感病毒生態(tài)循環(huán)中所扮演的角色日益重要，掌握其流行規(guī)律和及時(shí)切斷犬-人傳播途徑，對防控流感大暴發(fā)具有重要的指導(dǎo)意義和參考價(jià)值。