陳永燦 楊汐茵 陳 宇 曾國(guó)良 白 鈺,2 王恒蒼,2 嚴(yán)茂祥 范天田

1 浙江省中醫(yī)藥研究院 浙江 杭州 310007

2 浙江省立同德醫(yī)院 浙江 杭州 310012

3 浙江省杭州市蕭山區(qū)瓜瀝鎮(zhèn)社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心 浙江 杭州 311200

4 廣西梧州市中醫(yī)醫(yī)院 廣西 梧州 543000

5 浙江省中醫(yī)院 浙江 杭州 310006

6 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053

慢性萎縮性胃炎（CAG）是臨床常見(jiàn)的消化內(nèi)科疾病，是腸型胃癌Correa模式的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。臨床實(shí)踐表明，半夏瀉心湯治療CAG作用明顯[1]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察半夏瀉心湯對(duì)CAG大鼠胃組織部分炎癥因子的影響，探討其可能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選擇健康Wistar大鼠60只，雌雄各半，6周齡，SPF級(jí)，購(gòu)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[SCXK（滬）2013-0016]。飼養(yǎng)于浙江省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF屏障系統(tǒng)[SYXK（浙）2014-0003]。

1.2 半夏瀉心湯制備：半夏瀉心湯（半夏、炙甘草、黃芩各9g，黨參、大棗各30g，干姜6g，黃連3g），由浙江省中醫(yī)院中藥制劑室制成流浸膏，每毫升含2.4g生藥，冷藏4℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 CAG模型建立：60只大鼠隨機(jī)分成正常組10只和造模組50只。正常組以生理鹽水代替注射或灌胃，造模組大鼠采用主動(dòng)免疫-去氧膽酸-酒精綜合法造模16周。

1.4 分組及給藥：造模大鼠隨機(jī)分成5組，每組10只。模型組給予生理鹽水灌胃，半夏瀉心湯（下稱(chēng)中藥）低（6g/kg·d）、中（12g/kg·d）、高（24g/kg·d）劑量組給予中藥流浸膏灌胃，陽(yáng)性對(duì)照組給予葉酸（5mg/kg·d）混懸液灌胃，均連續(xù)給藥8周。

1.5 檢測(cè)方法：采用Realtime-PCR技術(shù)檢測(cè)胃組織核因子-κB（NF-κB）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的mRNA表達(dá)，Western Blot技術(shù)檢測(cè)NF-κB、磷酸化核因子-κB（P-NF-κB）的蛋白表達(dá)水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以±s表示。應(yīng)用單因素方差分析，方差齊用LSD檢驗(yàn)；方差不齊用Dunnett’s T3檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 半夏瀉心湯對(duì)CAG大鼠胃組織NF-κB、IL-1β、TNF-αmRNA表達(dá)的影響：與正常組比較，模型組上述指標(biāo)mRNA表達(dá)水平皆上調(diào)（P＜0.01）；與模型組比較，中藥組及葉酸組上述指標(biāo)mRNA表達(dá)水平降低，且中藥高劑量組接近正常組，療效優(yōu)于葉酸組（P＜0.01，P＜0.05）。見(jiàn)圖1～3。

圖1 各組CAG大鼠胃組織NF-κBmRNA相對(duì)表達(dá)量

圖2 各組CAG大鼠胃組織IL-1βmRNA相對(duì)表達(dá)量

圖3 各組CAG大鼠胃組織TNF-αmRNA相對(duì)表達(dá)量

2.2 半夏瀉心湯對(duì)CAG大鼠胃組織NF-κB、P-NF-κB蛋白表達(dá)影響：與正常組比較，模型組上述指標(biāo)蛋白表達(dá)均明顯增加（P＜0.01）；與模型組比較，中藥組及葉酸組上述指標(biāo)蛋白表達(dá)水平均下調(diào)，且中藥高劑量組NF-κB及P-NF-κB蛋白降低更明顯（P＜0.01，P＜0.05）。見(jiàn)圖4～5。

圖4 各組CAG大鼠胃組織NF-κB蛋白表達(dá)

圖5 各組CAG大鼠胃組織P-NF-κB蛋白表達(dá)

3 討論

CAG以胃黏膜炎癥反應(yīng)、固有腺體數(shù)目減少、胃黏膜變薄等為主要特點(diǎn)，或伴腸化生，或有異型增生，主要累及胃底和胃體。中醫(yī)學(xué)將其歸屬于“痞滿(mǎn)”“脘痛”等范疇，病位在胃，與肝、脾有關(guān)。脾胃失司、寒熱錯(cuò)雜是其主要病機(jī)。半夏瀉心湯為張仲景治療心下痞主方，寒熱同調(diào)、辛開(kāi)苦降，近年來(lái)研究其對(duì)胃腸道疾患尤其是CAG療效明顯[2]。Notch信號(hào)通路由不同受體、配體及下游靶基因組成，參與CAG及胃癌發(fā)生[3]。其中，IL-1β、TNF-α、NF-κB、P-NF-κB等炎癥因子及炎癥調(diào)節(jié)因子關(guān)鍵分子起著重要作用。本實(shí)驗(yàn)研究顯示，半夏瀉心湯使CAG大鼠NF-κB、IL-1β、TNF-αmRNA及NF-κB、P-NF-κB蛋白表達(dá)明顯下降，以高劑量組作用最明顯。提示半夏瀉心湯可能通過(guò)下調(diào)Notch信號(hào)通路下游靶基因NF-κB的表達(dá)，來(lái)抑制炎性細(xì)胞IL-1β、TNF-α的轉(zhuǎn)錄、釋放，促進(jìn)慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜組織修復(fù)，減輕胃黏膜萎縮、腸上皮化生及異型增生，阻斷其向胃癌發(fā)展。