申杰 吳艷 皮勁松 潘愛鑾 梁振華 孫靜 張昊 蒲躍進

摘要：因地方雞種禽白血病病毒（Avian leukosis virus，ALV）感染的嚴峻形勢，對江漢雞4個種群4個世代開展了禽白血病的檢測與凈化研究。結果表明，通過對不同發(fā)育階段、不同性別的群體，采集不同的樣品連續(xù)進行了4年的檢測和凈化，江漢雞種群純繁前（40～45周齡）公雞精液ALV p27抗原檢測平均陽性率從2015年的30.54%降至2018年的0.23%，母雞蛋清樣品ALV p27抗原檢測平均陽性率從2015年的26.98%降至2018年的0.05%。在育雛結束、開產和純繁前3個時間節(jié)點進行ALV p27抗原的檢測，淘汰陽性個體，禽白血病凈化效果明顯，可為其他地方雞種禽白血病的凈化工作提供參考。

關鍵詞：江漢雞;禽白血病;p27抗原;凈化

中圖分類號：S831? ? ? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）20-0125-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.20.030? ? ? ? ? ?開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Preliminary report on purification of avian leukosis in Hubei local Jianghan chicken

SHEN Jie，WU Yan，PI Jin-song，PAN Ai-luan，LIANG Zhen-hua，SUN Jing，ZHANG Hao，PU Yue-jin

（Institute of Animal Husbandry and Vetervinary，Hubei Academy of Agricultural Science/Hubei Innovation Center of Agricultural Science and Technology/Hubei Key Lab of Animal Embryo Technology and Molecular Breeding，Wuhan 430064，China）

Abstract： Based on the severe situation of avian leukosis virus infection in local chicken breeds， in this study， four generations of four Jianghan chicken populations were tested and purified for avian leukemia. The results showed that different samples were collected from different developmental stages and different sex groups for four consecutive years for detection and purification， the average positive rate of ALV p27 antigen in cock semen before pure breeding （40-45 weeks old） decreased from 30.54% in 2015 to 0.23% in 2018. The average positive rate of ALV p27 antigen in hen egg white samples decreased from 26.98% in 2015 to 0.05% in 2018. It can be seen that the detection of ALV p27 antigen at three time points before the end of brooding， the start of production and pure breeding can eliminate positive individuals， and the purification effect of avian leukemia is obvious， which can provide reference for the purification of avian leukemia in other places.

Key words： Jianghan chicken; avian leukosis; p27 antigen; purification

禽白血?。ˋvian leukosis，AL）是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus，ALV）引起禽類的多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱。ALV是一種反轉錄病毒，包括10個亞群，其中感染雞群的有A、B、C、D、J等5個亞群。該病以在成年雞中產生淋巴樣腫瘤和產蛋量下降為主要特征，其中J亞群致病性和傳染性最強[1，2]。該亞群1988年首次從英國肉用型雞中分離，20世紀90年代已蔓延到世界各地，對養(yǎng)禽業(yè)造成巨大經濟損失。杜巖等[3]1999年首次在國內肉雞分離到ALV-J后，山東、寧夏等多地出現ALV-J感染的報道，2004年首次發(fā)現了ALV-J引起商品蛋雞發(fā)病。自2008年以來，ALV-J引起了嚴重的禽白血病，在中國多個省市引進種雞的祖代場、父母代種雞場、黃羽肉雞場發(fā)生，呈暴發(fā)式流行，導致部分大型種雞場瀕臨破產，對中國養(yǎng)雞業(yè)造成嚴重威脅[4]。近年來，ALV感染在中國非常普遍，尤其是地方品種雞[5，6]，嚴重影響了中國地方雞種質資源的保護和利用。

湖北地方雞品種較多，已有不同程度的ALV感染。江漢雞是湖北省優(yōu)良的地方雞種，分布面積廣，開發(fā)利用好，是提供商品雞、雞蛋數量最多的地方品種，在湖北省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所家禽試驗場，2015—2018年對江漢雞種群開展了ALV凈化，主要采用ELISA檢測ALV p27抗原，淘汰陽性雞。該方法簡單易行、適合規(guī)?；B(yǎng)殖場禽白血病的凈化工作的推廣應用，連續(xù)開展了4個世代（一年一個世代）的凈化工作，并取得了較好的凈化效果。

1? 材料與方法

1.1? 試驗動物

湖北省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所家禽試驗場江漢雞3個新品系和保種群H1、H2、H3、H 4個種群，其中H1、H2為快羽系，H3為慢羽系，H為江漢雞保種群。

1.2? 主要試劑

禽白血病ALV p27抗原ELISA檢測試劑盒采用美國IDEXX公司產品。

1.3? 凈化方案

參考崔治中等[7]凈化方案和凈化技術規(guī)程[8]，結合該試驗場實際情況提出了適用于該場禽白血病凈化的方法。即在凈化前期，應用商品化ELISA檢測試劑盒，對核心群40～45周齡（純繁前）ALV p27抗原檢測，經過2個世代檢測淘汰陽性雞，陽性率下降到一定程度時增加檢測強度，即在6周齡（肛拭子）、20～24周齡（開產時）和40～45周齡（精液、蛋清）3個時間節(jié)點，采用ELISA方法進行ALV p27抗原檢測，淘汰陽性個體，以達到禽白血病凈化目的。

1.4? 樣品的采集和處理

1.4.1? 樣品的處理和檢測? 6周齡采集泄殖腔棉拭子（以下簡稱肛拭子）混勻后置-20 ℃凍融3次待檢;在20～24周齡和40～45周齡，全群公雞分別采集精液置-20 ℃凍融3次待檢，每只母雞分別收集3枚蛋，吸取蛋清，混勻后置-20 ℃凍融3次待檢。

1.4.2? ALV p27抗原檢測? 按照ALV p27抗原ELISA檢測試劑盒（IDEXX公司）說明書操作。結果判定標準：S/P值≥0.2，為陽性;S/P值<0.2，為陰性。

2? 結果與分析

2.1? 公雞禽白血病檢測結果

江漢雞各品系公雞在4個世代的凈化過程中，進行肛拭（6周齡）/精液（20～24周齡和40～45周齡）ALV p27抗原檢測的樣品總共5 238份，其中檢測出陽性樣品439份（表1）。

4個種群公雞精液ALV p27抗原平均陽性率從2015年40～45周齡的30.54%降至2018年40～45周齡的0.23%，凈化效果明顯，公雞禽白血病陽性率見表2。

由表2可知，隨著檢測凈化次數的增加及凈化世代的遞增，公雞精液ALV p27陽性率總體呈現下降的趨勢。在2017年，40周齡的4個品種（品系）公雞精液ALV p27陽性率均降低到3%以下;雖然2018年，20周齡和40周齡公雞精液ALV p27未檢測出陽性或陽性率保持在較低水平，但20周齡精液ALV p27檢測除H2品系陽性率0.68%外，其他品系未檢測出陽性，40周齡的H2品系精液未檢測出ALV p27抗原陽性，而H3品系精液ALV p27陽性率0.79%。

2017年在6周齡時僅對H系公雞進行肛拭子檢測，ALV p27陽性率為16.84%，2018年在6周齡時分別對各品系公雞肛拭子進行ALV p27檢測，發(fā)現陽性率分別比上一世代40W檢測陽性率偏高，但20～24周齡精液ALV p27陽性率比上一世代40～45周齡低。

2.2? 母雞禽白血病檢測結果

江漢雞各品系母雞在4個世代的凈化過程中，進行肛拭（6周齡）/蛋清（20～24周齡和40～45周齡）ALV p27抗原檢測的樣品共38 950份，其中檢測出陽性樣品1 677份見表3，每次檢測結束，陽性雞全部淘汰。

4個種群母雞ALV p27平均陽性率從2015年45周齡的26.98%降至2018年45周齡的0.05%，凈化效果顯著，各世代母雞檢測陽性率見表4。

隨著檢測凈化次數的增加以及世代的遞增，蛋清ALV p27抗原陽性率總體呈現下降的趨勢（表4）。其中，H1、H2、H品系蛋清ALV p27抗原陽性率降低效果明顯。2017年，H1、H2和H品系40周齡母雞蛋清ALV p27抗原陽性率已經降低至2%以下，2018年，H1品系20周齡ALV p27抗原未檢測發(fā)現陽性。2015年，H3品系45周齡蛋清陽性率高達31.02%，經過兩個世代的檢測凈化，2017年24周齡蛋清陽性率比2015年45周齡的陽性率降低27.12%，2018年40周齡的陽性率又再次降低，僅為0.16%。

3? 討論

目前，禽白血病既無有效的治療方法，也無有效的疫苗可供使用。預防和控制禽白血病暴發(fā)的主要措施就是對種雞群進行凈化，從而實現種雞群中禽白血病的徹底清除。本研究采用“公母同檢，精液、蛋清檢測為主，肛拭子檢測為輔”的凈化方案，即前2個世代在純繁前公雞用精液、母雞利用蛋清進行ALV p27抗原檢測，淘汰陽性個體，后期每個世代增加6周齡肛拭子檢測ALV p27抗原，取得顯著效果。4個種群純繁前公雞精液ALV p27抗原檢測平均陽性率從2015年的30.54%降至2018年純繁前的0.23%;4個種群純繁前母雞蛋清ALV p27抗原檢測平均陽性率從2015年的26.98%降至2018年純繁前的0.05%。

雖然在6周齡肛拭子檢測ALV p27抗原陽性率均比上一世代純繁前精液和蛋清檢測ALV p27抗原陽性率有上升的情況，但是4個種群總體都表現出持續(xù)穩(wěn)定下降的趨勢，出現這種情況可能是在孵化、育雛階段發(fā)生該病的水平傳播，也可能是肛拭子檢測出現假陽性或者與內源性禽白血病干擾有關，楊飛躍等[9]對肛拭子進行檢測發(fā)現ELISA檢測陽性率比病毒分離高，推測可能是由于內源性病毒的干擾所致;俞燕等[10]證明肛拭子ALV p27抗原檢測淘汰陽性雞雖能有效地降低雞群禽白血病感染率，但p27抗原檢測不能完全取代病毒分離檢測。因為病毒分離檢測周期長，本研究中未選擇病毒分離檢測的國際金標準進行凈化，具體原因有待于進一步研究。在禽白血病凈化的同時，試驗雞場應采取防鼠、防鳥及加強環(huán)境消毒等生物安全措施，并對試驗雞免疫選用的所有活疫苗進行嚴格檢測，以確保沒有外源性禽白血病污染。

參考文獻：

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