653100玉溪市中醫(yī)院院檢驗(yàn)科，云南玉溪

過敏反應(yīng)(過敏癥)是一種對異物的超敏反應(yīng)，又稱變態(tài)反應(yīng)，已經(jīng)成為一種常見病和流行病。全球過敏發(fā)生率高達(dá)20%～30%，WHO認(rèn)為僅過敏癥中哮喘造成的社會負(fù)擔(dān)已超過肺結(jié)核和艾滋病的費(fèi)用總和。以美國為例，2007年僅用于哮喘防治的直接費(fèi)用就達(dá)到147億美元。過敏癥已經(jīng)是全球面臨的重要衛(wèi)生問題[1-3]。目前，最有效的過敏癥防治辦法仍然是減少和避免與過敏原的接觸，因此明確過敏原對變態(tài)反應(yīng)的診斷和治療至關(guān)重要。

資料與方法

收集玉溪市紅塔區(qū)體檢的7歲以下嬰幼兒童1 568例，男813例，女755例；年齡3～7歲。

主要儀器和試劑：采用德國歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司EUROBlotMaster印跡法自動操作儀以及特應(yīng)性變應(yīng)原(中國組合)檢測試劑盒和判讀軟件，佳能canoscanline 100掃描判讀系統(tǒng)。ELAS法測總過敏原(IgE)，采用包被有抗人IgE多克隆抗體的微孔，第一次溫育時，稀釋后的樣本在微孔中反應(yīng)。如果樣本陽性，特異性IgE與抗體結(jié)合。為了檢測結(jié)合的IgE，加入能發(fā)生顏色反應(yīng)的過氧化物酶標(biāo)抗人IgE抗體(酶結(jié)合物)進(jìn)行第二次溫育。然后加入酶底物，發(fā)生顏色反應(yīng)，再與標(biāo)準(zhǔn)品濃度顏色比較即可得到待測樣本的濃度值。使用設(shè)備為美國寶特EX800酶標(biāo)儀、寶特EX50洗板機(jī)。

方法：對同一血清標(biāo)本分別采用ELAS法測總IgE和斑點(diǎn)免疫印跡法進(jìn)行檢測，所有操作依據(jù)廠家說明書進(jìn)行。⑴ELISA法測總IgE：①試劑盒內(nèi)提供4個濃度的標(biāo)準(zhǔn)血清(0 IU/mL、10 IU/mL、100 IU/mL、500 IU/mL)和陰性對照、陽性對照。②每一板(即每個試劑盒做一組)以4份標(biāo)準(zhǔn)血清(0 IU/mL、10 IU/mL、100 IU/mL、500 IU/mL)的濃度和吸光度為橫、縱坐標(biāo)點(diǎn)對點(diǎn)作標(biāo)準(zhǔn)曲線(線性/線性)，根據(jù)所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算機(jī)自動計算得出待測標(biāo)本的濃度值。③當(dāng)檢測血清濃度＜100 IU/mL時報告為陰性，檢測血清濃度＞100 IU/mL時報告為陽性，如果待測標(biāo)本的吸光度超出了標(biāo)準(zhǔn)品1(500 IU/mL)，可報告為＞500 IU/mL。我們將樣本1∶40稀釋后重新測定，從標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出的數(shù)據(jù)再乘以4即可為標(biāo)本中抗體的濃度。④每一組實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品OD值和陰、陽性對照國際單位必須處在相應(yīng)批號試劑的參考范圍內(nèi)，試劑盒內(nèi)附靶值資料，如果對照血清的實(shí)驗(yàn)結(jié)果超出靶值范圍必須重做。⑤每一組標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)須在0.99以上，否則須重做。⑵吸入性及食物性過敏原特異性IgE抗體檢測：采用德國歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司的印跡法測定，根據(jù)條帶顏色的深淺用EAST類別0～6表示，IgE濃度＜0.35 KU/L為陰性，＞0.35 KU/L為陽性。

統(tǒng)計學(xué)方法：數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 11.0軟件處理；計數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)；顯著性采用t檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

兩種檢測方法的相關(guān)性：采用ELISA法測總IgE和免疫印跡法測20種特異性吸入性及食物性過敏原，1 568例兒童各項變應(yīng)原sIgE的檢測結(jié)果為總IgE陽性(血清濃度＞100 IU/mL)345例，陽性率為23.37%；斑點(diǎn)免疫印跡法檢測變應(yīng)原陽性346例，陽性率為23.44%，相關(guān)系數(shù)為P=0.01，一致性檢驗(yàn)結(jié)果顯示總IgE和免疫印跡法測20種特異性吸入性及食物性過敏原結(jié)果具有較高的符合率。檢測結(jié)果不一致29例(1.96%)，其中血清總IgE濃度＞100 IU/mL的345例中未檢出吸入性及食物性過敏原17例，血清總IgE濃度＜100 IU/mL為陰性時，檢出低濃度吸入性及食物性過敏原12例，濃度范圍多在0.35～0.7 KU/L，處于免疫印跡法檢測結(jié)果的低濃度范圍。

不同性別各特異性IgE檢出情況：1 568例共檢出特異性吸入性及食物性過敏原346例(23.44%)，其中男209例，陽性率為27.6%；女137例，陽性率為19.05%。男女性別比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=14.703，P＜0.001)。

不同年齡各特異性IgE檢出情況：3～4歲顯著性檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.123，P＜0.05)，故認(rèn)為本地區(qū)3歲和4歲兒童總IgE有顯著性差異；4～5歲顯著性檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.267，P＞0.05)；5～6歲顯著性檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.857，P＞0.05)；6～7歲顯著性檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.821，P＞0.05)。

過敏原檢測情況：1 568例檢出特異性吸入性及食物性過敏原346例(23.44%)，其中對一種過敏原顯示陽性68例(19.65%)，對兩種和兩種以上過敏原顯示陽性278例(80.35%)，食物組中最常見過敏原為蛋清186例(53.7%)，其次為牛奶145例(41.9%)和螃蟹136例(39.3%)；吸入組最常見過敏原為螨蟲185例(53.5%)，其次為蟑螂118例(34.1%)。檢測出特異性食物性過敏原和吸入性過敏原陽性分布，見表1。

討 論

IgE是指能夠使人發(fā)生過敏的抗原。歐蒙過敏原檢測試劑盒，過敏原采集于中國，是特別針對中國人飲食生活和接觸環(huán)境設(shè)計的組合，因此提高了特異性檢出率。與傳統(tǒng)的過敏原檢測相比具有操作簡便，靈敏快速、結(jié)果判定準(zhǔn)確、安全方便以及減少患者痛苦等優(yōu)點(diǎn)。配備的自動化操作儀器和判讀軟件，可對陽性血清中的抗體濃度進(jìn)行EASA分級，對過敏原檢測結(jié)果的解釋分析提供了極大幫助。由于篩查確診一步到位，用血量少，故特別適合體檢及兒童標(biāo)本的檢測，有助于確認(rèn)誘發(fā)臨床癥狀的過敏原。

本研究結(jié)果顯示，玉溪市1 568例3～7歲兒童總IgE和免疫印跡法測20種特異性吸入性及食物性過敏原，總IgE陽性(血清濃度＞100 IU/ml)345例，陽性率為23.37%；斑點(diǎn)免疫印跡法檢測變應(yīng)原陽性為346例，陽性率為23.44%，相關(guān)系數(shù)為P=0.010，具有很好的相關(guān)性和測定結(jié)果一致性。在總IgE陽性(血清濃度＞100 IU/ml)345例中，血清總IgE陽性而特異性過敏原IgE陰性占19例(5.5%)，主要原因是總IgE是指血清中所有IgE的總和，包括在檢的所有sIgE和非在檢的IgE，除變態(tài)反應(yīng)疾病外，性別、年齡、感染、自身免疫疾病等因素均可對血清總IgE檢測結(jié)果有影響，所以血清總IgE的檢測只能作為過篩實(shí)驗(yàn)。本研究結(jié)果還顯示，男童陽性率明顯高于女童，這可能與男童比女童好動，活動范圍大，接觸環(huán)境中過敏原種類增多，吸入環(huán)境中過敏原概率增加有關(guān)。從各年齡組特異性IgE檢出情況分析，本地區(qū)3歲與4歲兒童總IgE有顯著性差異，這與3歲兒童入托后運(yùn)動量增加，頻繁接觸環(huán)境中過敏原有密切關(guān)系；4～5歲、6～7歲年齡段之間均無顯著性差異。

表1 346例兒童食物性和吸入性過敏原特異性斑點(diǎn)免疫印跡陽性率情況

綜上所述，結(jié)合本研究檢測數(shù)據(jù)分析，過敏性疾病大部分由多種過敏原綜合致敏引起，過敏原一旦明確，首先應(yīng)避免與之接觸，對于螨蟲和蟑螂過敏患者要保持室內(nèi)通風(fēng)干燥，經(jīng)常清潔除塵，勤洗勤曬衣被、床單。同時不養(yǎng)貓、狗等寵物，減少與各種花粉接觸等均是有效的預(yù)防措施。對于食物過敏患者，應(yīng)盡量避免吃可疑致敏的食物，對預(yù)防過敏的發(fā)生具有更前瞻性作用[4-6]。