曹龍龍，劉照虎，孟凡亮，李 焱，焦秋林，劉蒙達，2

（1.山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，山東泰安 271000；2.中國動物衛(wèi)生與流行病學中心，山東青島 266032）

口蹄疫（foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）傳播迅速、發(fā)病率高，主要感染牛、豬等偶蹄類動物，感染后的典型臨床特征為口舌黏膜、蹄部皮膚形成水皰、糜爛或潰瘍病灶，可引起幼畜死亡、成年畜生產(chǎn)性能下降，并且嚴重影響動物及動物產(chǎn)品貿(mào)易[1-3]，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為須通報動物疫病，被我國列為一類動物疫病[4]。近年來，北美洲、大洋洲、歐洲等地區(qū)的畜牧業(yè)發(fā)達國家始終保持無FMD 狀態(tài)，僅亞洲和非洲為FMD 高發(fā)區(qū)[5]。我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部官方網(wǎng)站公布的監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，自2013年以來，全國共發(fā)生FMD 疫情77起，其中豬疫情23起。各類FMD 疫情中，A 型疫情（Sea-97株為主）呈現(xiàn)明顯下降趨勢，近3年僅零星發(fā)生；而O 型疫情則呈現(xiàn)持續(xù)增長趨勢，主要由Mya-98和PanAsia 株引起[6-9]，近來又受到Ind-2001毒株的嚴重威脅。

強制免疫是我國防控FMD 等重大動物疫病的主要手段，而免疫效果直接關系到疫病防控成效[10]。因此，開展免疫動物的抗體水平監(jiān)測，及時了解疫苗的免疫效果，對于動物疫病的有效防控和風險評估尤為重要[11-12]。FMD 抗體監(jiān)測是反映本地區(qū)豬群免疫狀況的重要手段，可為提高豬群免疫力、減少豬群發(fā)病風險、調整豬群免疫程序提供重要依據(jù)[13]。

目前，山東省大多數(shù)豬場免疫O 型FMD 滅活疫苗，也有一些豬場開始免疫VP1合成肽疫苗。VP1是一種FMD 病毒的結構蛋白[14]。VP1合成肽疫苗無散毒風險，生物安全度高，抗原純凈度好且含量精確穩(wěn)定，無雜質和不良反應，抗體持續(xù)時間長，易區(qū)分免疫與感染抗體，因而具有良好的市場前景。為了解山東省豬群的O 型FMD免疫狀況，評估疫苗免疫效果，2017—2018年對全省16市135家豬場進行了O 型抗體和VP1抗體檢測，以期為做好全省豬FMD 防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗器材

大龍MicroPette 單道、8道移液器：型號YE17BAG0100332，購自山東和業(yè)生物科技有限公司；96孔反應板、96孔全自動洗板機：型號AS-16010-00，購自杭州奧盛儀器有限公司；37 ℃恒溫培養(yǎng)箱：型號1196-82-0，購自科裕孵化設備有限公司；Multiskan Sky 全波長酶標儀：型號51119570，購自賽默飛世爾科技有限公司。

1.2 主要試劑

O 型FMD 抗體液相阻斷ELISA 檢測試劑盒：中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號2017 090502；結構蛋白VP1單抗阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒：中牧實業(yè)生產(chǎn)，批號201611003。

1.3 樣品采集

免疫O 型滅活苗的樣品采集：春秋季集中免疫后，在全省16個地市，隨機挑選市（縣、區(qū)），采集商品豬場、種豬場和散養(yǎng)戶豬群的全血樣品。除無疫區(qū)外，其他地市的抽樣數(shù)量為：每個地市隨機抽查3個規(guī)模養(yǎng)豬場（2個商品豬場和1個種豬場），每個規(guī)模養(yǎng)殖場至少采集樣品20份；隨機抽查2～5個散養(yǎng)戶，每戶采集樣品5份。濰坊、青島、煙臺、威海等無疫區(qū)，每月隨機采集各規(guī)模豬場血清，根據(jù)抽選豬場存欄數(shù)量，每場按5%～8%的比例隨機采集（春秋集中免疫后或未進行抗體監(jiān)測的豬場適當加大比例）。

免疫合成肽VP1疫苗的樣品采集：隨機挑選各地市免疫合成肽VP1疫苗的豬場，采集豬群全血樣品，每場至少采集樣品10份。

2017—2018年，共采集免疫O 型滅活苗豬血清樣品53 967份，其中無疫區(qū)（濰坊、青島、煙臺、威海）樣品51 106份，其他地市2 861份（表1、表2）；免疫合成肽VP1疫苗豬血清樣品888份。

表1 山東省無疫區(qū)外各地市O 型滅活苗樣品采集數(shù)量統(tǒng)計 單位：份

1.4 檢測與判定

嚴格按照《口蹄疫診斷技術》（GB/T18935—2003）標準中指定的方法進行檢測和判定：O 型抗體，采用液相阻斷ELISA，抗體效價≥26為免疫合格；合成肽疫苗VP1抗體，采用VP1結構蛋白ELISA，抗體效價≥25為免疫合格。

2 結果與分析

2.1 O 型抗體

2.1.1 總體情況 2017—2018年，無疫區(qū)內的O型抗體合格率分別為96.03%、94.80%，無疫區(qū)外的O 型抗體平均合格率分別為78.24%、81.88%，均達到了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求的70%以上標準。

表2 無疫區(qū)內各月份O 型滅活苗樣品采集數(shù)量統(tǒng)計 單位：份

2.1.2 不同地區(qū)情況 2017—2018年無疫區(qū)外，濟寧和聊城的平均抗體合格率較低，分別為64.68%和63.50%，未達到國家規(guī)定的70%以上的合格標準；靠近無疫區(qū)的濱州和日照的平均合格率較高，都在98%以上；其他地區(qū)的平均合格率在80%～90%之間，符合國家規(guī)定合格標準。2017—2018年，無疫區(qū)內各月份的抗體合格率均在92%以上，高于無疫區(qū)外的抗體水平。具體結果見表3、表4。

2.1.3 不同類型豬場情況對2017—2018年的散養(yǎng)戶、商品豬場和種豬場檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)合格率最高的是種豬場，分別為90.73%和88.00%；其次是商品豬場，合格率分別為82.79%和84.88%；散養(yǎng)戶最低，合格率分別為68.80%和66.88%。具體結果見表5。

2.2 VP1抗體

對兩年內抽采的888份樣品進行了VP1抗體檢測，結果2017年檢測到陽性血清472份，合格率為87.9%，2018年檢測到陽性血清298份，合格率為84.9%，平均合格率都在70%以上。

表3 山東省無疫區(qū)外各地市豬O 型FMD 抗體合格率 %

表4 山東省無疫區(qū)內各月豬O 型FMD 抗體合格率統(tǒng)計 %

表5 不同類型豬場豬O 型口蹄疫抗體合格率統(tǒng)計 %

3 討論

豬FMD 防控是國家動物疫情防控的重點，關系到我國養(yǎng)豬業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展[15]。要做好全國FMD 的有效防控乃至實現(xiàn)徹底消滅，持續(xù)進行血清學監(jiān)測和疫病風險評估十分必要[16]。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部官方網(wǎng)站的疫情監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，近年來我國豬FMD 疫情呈現(xiàn)逐年增長的趨勢。這就更需要做好免疫工作，尤其要做好疫苗的選擇保管、免疫程序優(yōu)化、接種方式方法改進、抗體水平監(jiān)測、快速準確診斷方法建立等工作[17]。山東位于華北沿海交通運輸發(fā)達地區(qū)，是名副其實的養(yǎng)豬大省，更是養(yǎng)豬強省，生豬流通量大，所以豬FMD免疫極其重要。

本次檢測數(shù)據(jù)顯示，山東省O 型FMD 總體免疫效果良好，尤其是無疫區(qū)。無疫區(qū)是國家重點監(jiān)測地區(qū)，在一類疫病的防控上投入了大量人力、物力，因而取得了理想的免疫效果，平均合格率在90%以上。但此次檢測也發(fā)現(xiàn)，無疫區(qū)外地市的抗體合格情況差別較大，如靠近無疫區(qū)的濱州、日照、臨沂等地合格率較高，平均都在90%以上，而聊城、濟寧等地的免疫效果較差，合格率沒有達到70%的標準，存在FMD 疫情發(fā)生風險。濱州、日照和臨沂等地抗體水平高與緊靠無疫區(qū)有密切關系。這是因為為確保無疫區(qū)生物安全，山東省將周邊地市也劃為重點免疫監(jiān)測地區(qū)。聊城、濟寧等地的抗體水平偏低，可能與疫苗選擇和防疫人員操作水平以及疫苗運輸與保存等因素有關。因此，應在全省范圍內加大對豬場防疫人員的疫苗接種培訓力度，強化疫苗的合理運輸、保存等，以保證疫苗的質量，提高免疫效果。本地區(qū)FMD 結構蛋白VP1疫苗免疫場的總體合格率也較高，說明該疫苗的免疫效果也較好。VP1合成肽疫苗具有滅活疫苗不具備的優(yōu)點，目前已在許多豬場使用。本次VP1疫苗免疫抗體檢測的主要目的是了解該疫苗對豬群的保護情況，從而為下一步確定是否可以將其作為主要疫苗進行FMD 預防提供數(shù)據(jù)參考。

山東省種豬場的O 型FMD 抗體水平高于散養(yǎng)豬場和商品豬場，這與豬場的免疫程序不同有直接關系。種豬場母豬群每年普免FMD 疫苗3次或跟胎免疫，免疫強度大，導致免疫效果較好；商品豬群出欄前一般只進行一次免疫，有的不免疫，因而較大日齡的商品豬群，尤其是即將出欄的商品豬群抗體水平已大幅下滑。雖然此時其抵抗力較強，但因抗體水平低，仍存在感染風險。因此，加強育肥豬群后期的防疫、檢疫是規(guī)避該病發(fā)生風險的有效手段。散養(yǎng)戶商品豬的抗體陽性率低的問題，主要與散養(yǎng)戶生物安全意識低、免疫程序不合格、接種操作不規(guī)范、疫苗儲存不當?shù)纫蛩赜嘘P，只有解決好此類問題，才能提高散養(yǎng)豬群的免疫抗體水平，降低疫病發(fā)生風險。各類型養(yǎng)殖場都應切實履行疫情報告義務，發(fā)現(xiàn)動物感染或疑似病例，應立即向當?shù)孬F醫(yī)部門報告，配合主管部門采取隔離撲殺等控制措施，防止動物疫情擴散[18]。只有在同時做好免疫、監(jiān)測、飼養(yǎng)管理、消毒隔離、檢疫監(jiān)督等綜合性防控措施的前提下，才能最大限度地化解FMD 發(fā)生和流行風險，最終消滅FMD[19]。

4 結論

結合本次檢測結果，綜合評估認為，2017—2018年山東省豬群FMD 免疫效果較好，平均抗體合格率均在80%以上，超過了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%的最低標準，尤其是無疫區(qū)，抗體水平更高，均在94%以上，表明山東省豬FMD 強制免疫工作達到了預期效果。但無疫區(qū)外的部分地市和散養(yǎng)戶豬群的抗體水平偏低，沒有達到70%的最低標準，因而需要通過加強宣傳和培訓、保證豬群免疫密度、制定合理免疫程序、科學實施疫苗免疫等措施，提高豬群免疫抗體水平，降低FMD 發(fā)生風險，逐步實現(xiàn)該病凈化的目標。