馬永虹

（鄭州市第六人民醫(yī)院 肝炎科，河南 鄭州 450000）

T 淋巴細(xì)胞亞群具有維持機(jī)體免疫系統(tǒng)正常功能的重要作用，當(dāng)各淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量與功能發(fā)生變化時，人體的免疫功能就會出現(xiàn)紊亂，導(dǎo)致乙肝病毒攜帶者（hepatitis B virus carrier, ASC）、慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）、乙肝肝硬化（cirrhosis of liver,LC）和原發(fā)性肝癌（primary hepatocellular carcinoma, PHC） 等［1］疾病的發(fā)生。為此，本組研究將分析慢性乙型肝炎患者細(xì)胞免疫功能變化與乙肝病毒脫氧核糖核酸（HBVDNA）載量之間的關(guān)系，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

本組研究將本院2017 年1 月至2017 年12 月收治的100 例慢性乙型肝炎患者作為乙肝組（根據(jù)血清HBV-DNA 定量水平分為低拷貝組29 例與高拷貝組71 例，根據(jù)HBeAg 檢測結(jié)果分為陽性組55 例與陰性組45 例），同時選取此期間進(jìn)行健康體檢的100 例體檢者作為對照組。乙肝組中，男57 例，女 43 例；年齡 31～67 歲，平均 （51.34±3.49） 歲；病程 2～9 年，平均 （5.37±1.45） 年。對照組中，男53 例，女47 例；年齡33～70 歲，平均（52.11±5.42）歲。兩組患者均符合《病毒性肝炎防治方案》與《慢性乙型肝炎防治指南》［2］中關(guān)于慢性乙型肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且在性別、年齡方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），具有可比性。

1.2 倫理審查

研究嚴(yán)格遵照赫爾辛基宣言及“涉及人的生物醫(yī)學(xué)研究倫理審查辦法（試行）”，方案獲得院倫理委員會批準(zhǔn)并全過程跟蹤，且所用患者均對本次研究知情，并簽署知情同意書。

1.3 方法

1.3.1 血清病毒學(xué)標(biāo)志物檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法檢測乙肝5 項(xiàng)，包括：乙肝表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）表面抗體、е 抗原（HBeAg）、е 抗體、核心抗體。選用中山生物工程有限公司生產(chǎn)的相關(guān)試劑，嚴(yán)格按照說明書操作；根據(jù)HBeAg 定性檢測結(jié)果將患者分為陽性組與陰性組。

1.3.2 血清HBV-DNA 定量檢測 采用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction, PCR）對HBV-DNA 定量進(jìn)行檢測，儀器采用羅氏480實(shí)時熒光定量儀，選用上海之江生物科技股份有限公司相關(guān)試劑，嚴(yán)格按照說明書操作；結(jié)果判讀：＞1.0×103copy/ml 為陽性，（1.0×103～1.0×105）copy/ml 為低拷貝組，＞1.0×105copy/ml 為高拷貝組。

1.3.3 外周血T 淋巴細(xì)胞亞群檢測 采用流式細(xì)胞術(shù)測定外周血T 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物，儀器采用美國BD 公司生產(chǎn)的FACS Calibur，并選用該公司生產(chǎn)的相關(guān)試劑。取100 μl 抗凝血于流式專用試管中，CD3+、CD4+、CD8+單克隆熒光抗體 20 μl，經(jīng)避光、紅細(xì)胞溶解、離心后，進(jìn)行CD3+、CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞的百分比統(tǒng)計。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0 軟件分析，計量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson 直線相關(guān)分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV-DNA載量與細(xì)胞免疫功能分析

低拷貝組與高拷貝組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均明顯低于對照組，CD8+水平明顯高于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；通過對各組lgHBV-DNA 與CD4+/CD8+T 淋巴細(xì)胞比率比值進(jìn)行Pearson 相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，HBV-DNA 載量與細(xì)胞免疫功能存在負(fù)相關(guān)（r=-0.659,P=0.003），見表1。

2.2 陰性組與陽性組細(xì)胞免疫功能比較

陽性組 lgHBV-DNA、CD3+、CD4+/CD8+T 淋巴細(xì)胞水平明顯高于陰性組，CD4+、CD8+T 淋巴細(xì)胞水平明顯低于陰性組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表1 HBV-DNA 載量與細(xì)胞免疫功能分析 （）

表1 HBV-DNA 載量與細(xì)胞免疫功能分析 （）

注：1）與對照組比較，P ＜0.05；2）與低拷貝組比較，P ＜0.05。

組別對照組低拷貝組高拷貝組CD4+/CD8+1.46±0.28 1.12±0.611)0.72±0.371)2)例數(shù)100 29 71 CD3+/%74.36±5.64 60.52±5.721)46.18±5.361)2)CD4+/%43.13±5.75 39.16±4.771)33.23±3.751)2)CD8+/%22.61±4.86 36.56±7.331)43.17±6.271)2)

表2 陰性組與陽性組細(xì)胞免疫功能比較 （）

表2 陰性組與陽性組細(xì)胞免疫功能比較 （）

注：?與陰性組比較，P ＜0.05。

組別陽性組陰性組CD4+/CD8+1.71±0.57?0.83±0.42例數(shù)55 45 lgHBV-DNA 16.57±0.62?3.74±0.53 CD3+/%35.22±6.08?26.13±5.86 CD4+/%23.61±6.42?37.14±5.82 CD8+/%23.55±3.64?38.13±6.96

3 討論

正常情況下，機(jī)體中T 淋巴細(xì)胞亞群之間彼此保持相對平穩(wěn)的比例，共同維持機(jī)體細(xì)胞免疫功能的正常運(yùn)行，T 淋巴細(xì)胞亞群失衡是機(jī)體細(xì)胞免疫功能損傷的重要指標(biāo)［3］。有研究發(fā)現(xiàn)［4-5］，人體在感染HBV 后，免疫系統(tǒng)會出現(xiàn)損傷，其中外周血CD4+和CD8+等T 淋巴細(xì)胞亞群的變化最為明顯，考慮與HBV 病毒清除障礙、疾病轉(zhuǎn)歸有關(guān)；但是，過度的免疫激活與交叉免疫會引起肝細(xì)胞損傷，因此，HBV-DNA 載量與機(jī)體細(xì)胞免疫功能之間的關(guān)系處于交互作用之中，尚未能完全明確。

CD4+和CD8+T 亞群作為T 淋巴細(xì)胞的主要亞群，能夠清除病毒感染，在病毒免疫應(yīng)答中具有重要作用［6］。CD8+T 淋巴細(xì)胞亞群主要包括細(xì)胞毒性T 細(xì)胞與抑制性T 細(xì)胞（Ts）：細(xì)胞毒性T 細(xì)胞是細(xì)胞免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞，被激活后分泌釋放穿孔素和顆粒酶破壞靶細(xì)胞；Ts 通過釋放分泌可溶性介質(zhì)下調(diào)體液免疫和細(xì)胞免疫［7］。CD8+T 淋巴細(xì)胞的激活和凋亡嚴(yán)格依賴CD4+T 細(xì)胞的調(diào)控［8］。

本組研究中，低拷貝組與高拷貝組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均明顯低于對照組，CD8+水平明顯高于對照組，HBV-DNA 載量與細(xì)胞免疫功能存在負(fù)相關(guān)；此外，陽性組lgHBV-DNA、CD3+、CD4+/CD8+T 淋巴細(xì)胞水平明顯高于陰性組，CD4+、CD8+T 淋巴細(xì)胞水平明顯低于陰性組，說明慢性乙型肝炎患者細(xì)胞免疫功能與HBV-DNA載量之間存在交互作用，HBV-DNA 復(fù)制是乙肝患者細(xì)胞免疫功能紊亂的重要影響因素。