梁頒捷　葉建如　徐超　張珊珊　林?！∈☆欎摗±铠櫤啤埿汜椤≈芡Α⌒ろ?/p>

摘要 [目的]? 篩選對福建省三明市煙草灰霉病菌更具抑制作用的殺菌劑。[方法]采用菌絲生長速率法測定4種殺菌劑對煙草灰霉病菌的抑制作用，并進(jìn)行了田間藥效試驗(yàn)。[結(jié)果]室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，4種殺菌劑對灰霉病菌的毒力表現(xiàn)為50%腐霉利可濕性粉劑>50%啶酰菌胺水分散粒劑>50%異菌脲懸浮劑>70%嘧霉胺水分散粒劑。田間藥效試驗(yàn)結(jié)果表明，50%腐霉利可濕性粉劑、50%啶酰菌胺水分散粒劑和70%嘧霉胺水分散粒劑對煙草灰霉病有較好的防治效果，防效分別為91.04%、89.39%和88.06%。[結(jié)論]推薦使用50%腐霉利可濕性粉劑、50%啶酰菌胺水分散粒劑用于生產(chǎn)上對煙草灰霉病的防控。

關(guān)鍵詞 煙草灰霉病菌;殺菌劑;毒力測定;田間防效

中圖分類號 S435.72文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 0517-6611（2019）21-0142-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.21.042

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Toxicity and Field Control Efficiency of Four Fungicides against Tobacco Grey Mould

LIANG Banjie1， YE Jianru1， XU Chao2 et al （1.Sanming Branch of Fujian Tobacco Company， Sanming， Fujian 365400;2. College of Plant Protection， Fujian Agriculture and Forestry University， Fuzhou，F(xiàn)ujian 350002;3.Institute of Tobacco Science， Fujian Tobacco Company， Fuzhou， Fujian 350003）

Abstract [Objective]To screen effective fungicides to control tobacco grey mould.[Method]Toxicity test of four fungicides against Botrytis cinerea were determined by measuring the growth rate of mycelia，and the control efficiency of four fungicides in the field were studied.[Result]The toxicity level of four fungicides was in the following order：procymidone 50%WP > boscalid 50%WG >iprodione50%SC > pyrimethanil70%WG.The results of the field experiment indicated that the control effect of procymidone 50%WP，boscalid 50%WG and pyrimethanil 70%WG were 91.04%，89.39% and 88.06%，respectively.[Conclusion]The procymidone 50%WP and boscalid 50%WG could be used in control of tobacco grey mold.

Key words Botrytis cinerea;Fungicide;Toxicity measurement;Field efficacy

基金項(xiàng)目 中國煙草總公司福建省公司科技項(xiàng)目（閩煙司科201635000020073，201735000027131號）。

作者簡介 梁頒捷（1968—），男，福建三明人，農(nóng)藝師，碩士，從事植物保護(hù)研究。通信作者，副教授，博士，從事植物病害防治研究。

收稿日期 2019-05-12

煙草灰霉病是由半知菌類絲孢目真菌灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）引起的病害，在煙株的整個(gè)生長發(fā)育期均可發(fā)生，病原菌侵染煙葉葉片可造成煙葉組織壞死、腐爛，對煙葉產(chǎn)量和品質(zhì)造成一定影響[1]。由于受到氣候、煙草品種的變化及地區(qū)分布等因素的影響，煙草灰霉病在我國福建、黑龍江、陜西、廣西等各大煙區(qū)發(fā)生較為普遍[1-4]。目前灰霉病的防治以化學(xué)防治為主，但由于灰霉病菌具有繁殖速度快、遺傳變異大、適應(yīng)性廣泛的特性，連續(xù)使用一種殺菌劑，極易產(chǎn)生抗藥性[5-7]。福建省煙區(qū)近年來灰霉病發(fā)生較普遍，為篩選對福建省三明市煙區(qū)煙草灰霉病菌更具抑制作用的殺菌劑，筆者針對目前生產(chǎn)上用于防治煙草灰霉病的主要?dú)⒕鷦╅_展毒力測定和田間藥效試驗(yàn)，以期為煙草灰霉病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株和培養(yǎng)基?；移咸焰呔鶼A-5 從福建省三明市煙區(qū)分離，由福建農(nóng)林大學(xué)植物線蟲室分離、鑒定并保存。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 mL。

1.1.2 供試藥劑。

50%啶酰菌胺水分散粒劑 （德國巴斯夫股份有限公司）、 50%腐霉利可濕性粉劑 （興農(nóng)藥業(yè)（中國）有限公司）、70%嘧霉胺水分散粒劑（壽光晨陽農(nóng)化有限公司）、50%異菌脲懸浮劑 （拜耳作物科學(xué)（中國）有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 室內(nèi)毒力測定。采用菌絲生長速率法進(jìn)行測定[8]。在無菌條件下，將供試5種藥劑用無菌水稀釋成不同濃度的藥液，濃度梯度由預(yù)試驗(yàn)確定。待PDA培養(yǎng)基冷卻到40～50 ℃時(shí)，將配制好的各系列濃度藥劑按照1：9的比例加入PDA培養(yǎng)基中，混合均勻，等量倒入滅菌培養(yǎng)皿中，制成含藥培養(yǎng)基，以加無菌水的培養(yǎng)基作為對照。將培養(yǎng)7 d的煙草灰霉病菌，在無菌條件下用直徑5 mm的滅菌打孔器自菌落邊緣切取菌餅，將菌餅接種于平板中央，每皿放置1個(gè)菌餅，菌絲面朝上，蓋上皿蓋，置于28 ℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)5 d，每處理重復(fù)3次。采用十字交叉法測量菌落直徑，計(jì)算菌絲生長抑制率，求出毒力回歸方程、有效抑制中濃度（EC50）和相關(guān)系數(shù)（R）。

抑制率=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/對照菌落直徑×100%

1.2.2 田間藥效試驗(yàn)。參照農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則 第7部分[9]。

試驗(yàn)設(shè)計(jì)：試驗(yàn)于2016年5—6月在三明市煙草公司永安分公司煙草試驗(yàn)站進(jìn)行。試驗(yàn)小區(qū)采用隨機(jī)區(qū)組排列，小區(qū)面積不少于15 m2，煙草品種為翠碧1號。施藥時(shí)按藥劑使用說明進(jìn)行。每種藥劑均在發(fā)病前或發(fā)病初期用藥，連續(xù)施藥5次，間隔7～10 d。采用背負(fù)式手動噴霧器噴霧施藥。田間藥劑試驗(yàn)共設(shè)5個(gè)處理：4個(gè)為藥劑處理，1個(gè)為清水空白對照，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)，保護(hù)行設(shè)置、日常田間管理均按常規(guī)進(jìn)行。

數(shù)據(jù)調(diào)查方法：分別于施藥前與施藥后7 d調(diào)查田間發(fā)病情況。每小區(qū)采用5點(diǎn)隨機(jī)取樣的方法，每點(diǎn)調(diào)查2～3株，分別調(diào)查并記錄每株的所有葉片數(shù)及發(fā)病葉數(shù)。

煙草灰霉病病害分級方法（以葉片為單位）[9]：0級，全葉無病;1級，病斑面積占葉片面積的5%以下;3級，病斑面積占葉片面積的6%～10%;5級，病斑面積占葉片面積的11%～20%;7級，病斑面積占葉片面積的21%～40%;9級，病斑面積占葉片面積的41%以上。

調(diào)查完畢后，分別計(jì)算病情指數(shù)、防治效果并進(jìn)行比較。

病情指數(shù)=（各級病葉數(shù)×相對級數(shù)值）/（調(diào)查總?cè)~數(shù)×9）×100（1）

防治效果=[1-（CK0×PT1）/（CK1×PT0）×100%（2）

式中，CK0為空白對照區(qū)施藥前病情指數(shù);CK1為空白對照區(qū)施藥后病情指數(shù);PT0為藥劑處理區(qū)施藥前病情指數(shù);PT1為藥劑處理區(qū)施藥后病情指數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2010和DPS V7.05軟件統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑對煙草灰霉病菌的抑制效果

供試的4種殺菌劑對煙草灰霉病菌菌絲生長有不同程度的抑制作用（表1），隨著藥劑濃度的增加，其對病菌的抑制率逐漸上升。在藥劑濃度約為0.10 mg/L 時(shí)，50%腐霉利可濕性粉劑、50%異菌脲懸浮劑、50%啶酰菌胺水分散粒劑、70%嘧霉胺水分散粒劑對病菌的抑制率分別為 92.82%、 88.09%、 85.97%和 72.10%。

EC50 是衡量殺菌劑毒力大小的指標(biāo)之一，EC50 越小表明藥劑對病原菌的毒力越強(qiáng)?；貧w分析結(jié)果（表2）表明，4種殺菌劑對灰霉病菌（YA-5）的毒力由大到小依次為50%腐霉利可濕性粉劑、50%啶酰菌胺水分散粒劑、50%異菌脲懸浮劑、70%嘧霉胺水分散粒劑，其EC50 分別為0.001、0.003、0.007和0.011 mg/L。

2.2 4種殺菌劑對煙草灰霉病的田間防效

田間防效試驗(yàn)結(jié)果（表3）表明供試的4種殺菌劑對福建省永安市煙區(qū)的灰霉病均有效，但防治效果有一定差異。第1次用藥后，70%嘧霉胺水分散粒劑防效最好，達(dá)85.96%，與其他處理差異顯著;第2次用藥后，50%腐霉利可濕性粉劑和70%嘧霉胺水分散粒劑防效較好，50%異菌脲懸浮劑的防效最差，僅為49.09%;第3次、第4次用藥后，50%異菌脲懸浮劑防效較差，與其他處理差異顯著;第5次用藥后，50%腐霉利可濕性粉劑防效最好，其防效為91.04%，其次為50%啶酰菌胺水分散粒劑和70%嘧霉胺水分散粒劑，其防效分別為89.39%和88.06%，而50%異菌脲懸浮劑對該區(qū)域煙草灰霉病的防效較差，防效僅為39.14%。

3 結(jié)論與討論

煙草灰霉病近幾年在福建省主要煙區(qū)均有發(fā)生，個(gè)別地區(qū)發(fā)病嚴(yán)重，對煙草的產(chǎn)量和品質(zhì)造成了較大影響。目前，田間防治灰霉病主要還是采用化學(xué)藥劑為主，選用有效的藥劑是化學(xué)防治的前提。該試驗(yàn)選用了市場上常用的化學(xué)藥劑異菌脲、腐霉利、嘧霉胺，以及近些年開始使用的藥劑啶酰菌胺，室內(nèi)毒力測定結(jié)果和田間防效結(jié)果表明50%腐霉利可濕性粉劑和50%啶酰菌胺水分散粒劑對永安煙草灰霉病表現(xiàn)出較好的防治效果。

由于灰霉病菌存在異核和多核菌絲，導(dǎo)致存在于細(xì)胞核的抗性遺傳基因即使停止使用化學(xué)農(nóng)藥后仍可長期存在于灰霉菌菌群中[10]，其對不同殺菌劑的抗性在國內(nèi)外已有報(bào)道。嘧霉胺是苯胺基嘧啶類殺菌劑，其作用機(jī)理獨(dú)特，通過抑制病原菌蛋白酶分泌，降低某些水解酶的含量，對灰霉病有特效，是近年來用于防治灰霉病的主要?dú)⒕鷦┲籟11]。但灰霉病菌對嘧霉胺的抗藥性是單基因控制，具有高度抗藥性風(fēng)險(xiǎn)，已在多個(gè)地方發(fā)現(xiàn)灰霉病菌對其產(chǎn)生了抗藥性[5，7]。

啶酰菌胺是一種新型煙酰胺類殺菌劑，屬于線粒體呼吸鏈中琥珀酸輔酶Q還原酶抑制劑，干擾細(xì)胞的分裂和生長從而使菌體死亡，主要用于防治灰霉病、菌核病、白粉病和各種腐爛病等。由于其活性高、作用機(jī)理獨(dú)特、殺菌譜廣、不易與其他藥劑產(chǎn)生交互抗性、對作物安全且具有出色的滲透傳導(dǎo)作用，持效期長，可減少施藥次數(shù)，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中已被廣泛使用[12]。但也有研究顯示灰霉病菌對啶酰菌胺也產(chǎn)生了抗藥性，林澤松等[13]研究表明果蔬灰葡萄孢對啶酰菌胺的抗性發(fā)展較迅速，但大多數(shù)抗性菌株為低水平抗性，中等及高水平抗性菌株發(fā)展相對較慢。LI等[14]研究了溫室黃瓜灰霉病對啶酰菌胺的抗藥性，結(jié)果表明大多數(shù)菌株表現(xiàn)為低抗或者中抗。

腐霉利、異菌脲屬于二甲酰亞胺類殺菌劑，該類殺菌劑的殺菌機(jī)制尚不明確，但隨著該類藥劑使用時(shí)間延長，植物病原真菌對其產(chǎn)生抗藥性的問題也日漸凸顯。陳帥民等[15]研究表明北京地區(qū)草莓灰霉病菌對異菌脲存在較高的抗性頻率。潘以樓等[16]研究表明江蘇草莓灰霉病菌對異菌脲已產(chǎn)生抗藥性。宋晰等[17]研究表明灰霉病菌對腐霉利表現(xiàn)出較高的抗性頻率。

該試驗(yàn)中腐霉利、啶酰菌胺、異菌脲、嘧霉胺對煙草灰霉病菌的 EC50 值分別為 0.001、0.003、0.007、0.011 mg/L，與其他研究結(jié)果比較，該試驗(yàn)的EC50值均很低，原因可能是煙草灰霉病菌株對這些藥劑還未產(chǎn)生抗藥性，且有關(guān)藥劑對煙草灰霉病的毒力研究較少，但灰霉病菌對殺菌劑極易產(chǎn)生抗藥性，因此使用藥劑防治煙草灰霉病的過程中應(yīng)注意不同作用類型殺菌劑的輪換、交替或混配使用。

安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年

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