路峰

摘 要 將超高效液相色譜儀和三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用測定小麥中3種嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮。樣品經(jīng)超聲提取、SPE凈化后，用液相分離和三重四極桿質(zhì)譜儀內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析。結(jié)果表明，4種毒素在5～150 ng·mL-1的濃度范圍內(nèi)線性良好;對5 ng·mL-1、10 ng·mL-1和100 ng·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)3次進(jìn)樣，3個濃度標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)確度和濃度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為95.8%～112.4%和0.93%～4.90%，儀器精密度良好;同時考察了空白小麥基質(zhì)加標(biāo)結(jié)果，結(jié)果顯示4種毒素10 ng·mL-1的加標(biāo)回收率為98.9%～112.0%。

關(guān)鍵詞 嘔吐毒素;玉米赤霉烯酮;小麥;超高效液相色譜儀;三重四極桿質(zhì)譜儀

中圖分類號：TS210.7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.20.071

嘔吐毒素，又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON），屬單端孢霉烯族化合物，因可引起豬的嘔吐而得名。當(dāng)人攝入了被DON污染的食物后，會出現(xiàn)厭食、嘔吐、腹瀉、發(fā)燒、站立不穩(wěn)、反應(yīng)遲鈍等急性中毒癥狀，嚴(yán)重時會損害造血系統(tǒng)造成死亡。歐盟的嘔吐毒素限量標(biāo)準(zhǔn)為小于1.0 mg·kg-1;我國食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2761—2017《食品中真菌毒素限量》中規(guī)定，玉米等谷物及其制品中嘔吐毒素限量為1.0 mg·kg-1。玉米赤霉烯酮（ZON）又稱F-2毒素，具有雌激素樣作用，能造成動物急慢性中毒，引起動物繁殖機(jī)能異常甚至死亡，我國國家標(biāo)準(zhǔn)《食品中真菌毒素限量》中規(guī)定谷物及其制品中該毒素的限量指標(biāo)為60 μg·kg-1。通過將超高效液相色譜儀和三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用，建立了快速、準(zhǔn)確測定小麥中3種嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器

實(shí)驗(yàn)使用島津LC-30A超高效液相色譜儀與LCMS-8045三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用系統(tǒng)。具體配置有：DGU-20A5在線脫氣機(jī)，LC-30AD×2輸液泵，SIL-30AC自動進(jìn)樣器，CBM-20A系統(tǒng)控制器，CTO-30A柱溫箱，CBM-20A系統(tǒng)控制器，LCMS-8045三重四極桿質(zhì)譜儀，Lab Solutions色譜工作站。

1.2 分析條件[1-3]

1）液相色譜條件。LC-30A系統(tǒng);色譜柱：UHPLC C18 250mm×2.0 mm I.D.×75 mm L;流動相：A為0.01%氨水，B為乙腈;流速：0.3 mL·min-1;進(jìn)樣體積：10 μL;柱溫：40 ℃;洗脫方式：梯度洗脫，B相初始濃度為10%（梯度洗脫時間程序：0～2 min，B相60%;2～4 min，B相95%;4.5～5.5 min，B相100%;5.7～8.0 min，B相10%）。

2）質(zhì)譜條件。離子源接口電壓：-3.5 kV;離子源ESI，負(fù)離子掃描;干燥氣：氮?dú)猓?5 L·min-1;霧化氣：氮?dú)猓?.0 L·min-1;碰撞氣：氬氣;加熱模塊溫度：400 ℃;脫溶劑管溫度：250 ℃;掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）;駐留時間：20 ms;延遲時間：3 ms。

1.3 樣品制備

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

取適量單標(biāo)儲備液，用乙腈配制成1 000 ng·mL-1 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水逐級稀釋成濃度為150 ng·mL-1、100 ng·mL-1、75 ng·mL-1、50 ng·mL-1、25 ng·mL-1、10 ng·mL-1和5 ng·mL-1 的標(biāo)準(zhǔn)工作液。內(nèi)標(biāo)物13C-DON、13C-ZON和13C-3-ADON的濃度均為50 ng·mL-1。

1.3.2 樣品前處理方法

準(zhǔn)確稱取5.0 g粉碎均勻的樣品至50 mL的離心管中，加入乙腈-水（21∶4，v/v）溶液40 mL，渦旋1 min，超聲60 min，離心5 min（10 000 r·min-1）。移取5 mL上清液至多功能凈化柱（MycosepTM226）的玻璃管內(nèi)，加入100 μL內(nèi)標(biāo)及5 mL乙腈溶液混勻，將多功能凈化柱的填料管插入玻璃管中并緩慢推動填料管，棄去2 mL初濾液，取續(xù)濾液4 mL至氮吹瓶中。在40～50 ℃下氮?dú)獯蹈?，用乙?水（1∶9，v/v）溶液定容至1 mL，超聲渦旋30 s，用0.22 μm濾膜過濾至進(jìn)樣瓶中備用。

1.4 實(shí)驗(yàn)試劑

氨水、乙腈，均為分析純。

1.5 實(shí)驗(yàn)對象

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）、3-乙?；撗跹└牭毒┐迹?-ADON）、15-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（15-ADON）、玉米赤霉烯酮（ZON）。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品的MRM色譜圖

10 ng·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)樣品的MRM色譜圖如圖1所示。

由圖1可知，出峰時間DON最早，ZON最晚;15-DON的峰強(qiáng)度最小，ZON的峰強(qiáng)度最大。可見，使用本分析方法，DON、15-AON、3-AON、ZON四種毒素均能得到很好的分離。

2.2 線性關(guān)系

4種毒素的校準(zhǔn)曲線參數(shù)見表1。

2.3 檢出限和定量限

4種毒素的檢出限和定量限見表2。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

對5 ng·mL-1、10 ng·mL-1和100 ng·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)3次進(jìn)樣，3個濃度標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)確度和濃度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為95.8%～112.4%和0.93%～4.90%，儀器精密度良好，見表3。

2.5 基質(zhì)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)

以空白小麥樣配制加標(biāo)溶液，加標(biāo)濃度為10 ng·mL-1，4種毒素DON、15-ADON、3-ADON和ZON加標(biāo)回收率分別為98.9%、105.9%、104.7%和112.0%。

3 結(jié)論與討論

建立一種將超高效液相色譜儀和三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用測定小麥中3種嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮的方法。4種毒素在5～150 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性良好;10 ng·mL-1基質(zhì)加標(biāo)樣品的回收率良好;低、中、高3個濃度標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)確度和濃度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為95.8%～112.4%和0.93%～4.90%，靈敏度高，可以滿足對這4種毒素的分析要求。

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（責(zé)任編輯：趙中正）