袁文洪 高宇明 謝 艷 何 琴 吳秀清

四川省資陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，四川 資陽(yáng) 512000

安康顆粒是由紅參、銀耳、當(dāng)歸、山藥、豬脊髓、鹿茸、山楂等七位藥材煎煮制成的顆粒劑，具有安和五臟、健腦安神的功效，主要用于治療頭目眩暈、耳鳴、四腳乏力疲軟、食欲不振、睡眠不深、多夢(mèng)等癥?，F(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為《國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-2888-98-1》[1]，檢驗(yàn)項(xiàng)目?jī)H有性別和理化鑒別兩項(xiàng)，均較簡(jiǎn)單，不能有效控制該樣品質(zhì)量。在安康顆粒處方組成中，當(dāng)歸用量較大，為主要組成部分，當(dāng)歸的主要有效成分為阿魏酸。本實(shí)驗(yàn)建立HPLC法測(cè)定安康顆粒中阿魏酸的含量，為該制劑質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-20AT液相色譜儀(含SPD-20A檢測(cè)器，島津)；MS205DU電子天平(梅特勒托利多)，水浴鍋 。

1.2 材料 阿魏酸對(duì)照品(批號(hào)110773-201614，中國(guó)食品藥品檢定研究院)。理氣舒心片(批號(hào)：20180803、20190309、)。甲醇(色譜純，F(xiàn)isher公司)，磷酸，水為注射用水；

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取對(duì)照品阿魏酸適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為11.236 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制的制備 取研細(xì)安康顆粒約10 g，精密稱定，精密加甲醇10 mL，稱定重量，加熱回流30 min，冷卻后用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱在：Waters XSelect HSS T3(4.6×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.085%磷酸溶液(25∶75)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：316 nm；柱溫：30 ℃。色譜圖見圖1、圖2。

2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，加甲醇溶液稀釋制備成濃度分別為0.224、0.449、0.899、1.124、2.247 μg/mL系列混合對(duì)照品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下的條件進(jìn)行測(cè)定。以對(duì)照品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，Y=83328X-1355.2，r=0.9994，表明阿魏酸在該0.224～2.247濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得其RSD分別為0.13%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取研細(xì)的安康顆粒粉末，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。于制備后0、2、4、8、16在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)得其RSD為1.08%，表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取研細(xì)的安康顆粒粉末，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)得其RSD為2.85%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取6份已知含量的研細(xì)的安康顆粒粉末約10 g，精密稱定，精密加入“2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品適量后，按按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，以外標(biāo)法計(jì)算各阿魏酸的量，計(jì)算其加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.8 樣品含量測(cè)定 取安康顆粒供試品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液各2份，在“2.2”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣，以外標(biāo)法計(jì)算阿魏酸的含量，結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

表2 含量測(cè)定結(jié)果 (μg/g，n=2)

3 分析與討論

3.1 指標(biāo)成分選擇 在該藥品處方組成中，僅有紅參、當(dāng)歸在《中國(guó)藥典》2015年版[2]中收載有含量測(cè)定項(xiàng)。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，紅參因處方量較小，且經(jīng)過(guò)煎煮后，轉(zhuǎn)移到制劑中的人參皂苷量較低，導(dǎo)致無(wú)法檢出。故本實(shí)驗(yàn)選擇當(dāng)歸中的阿魏酸進(jìn)行含量測(cè)定，以評(píng)估安康顆粒的質(zhì)量。

3.2 測(cè)定方法選擇 樣品前處理方面，本實(shí)驗(yàn)考察了甲醇提取、70%甲醇提取、乙醇提取、70%乙醇提取，發(fā)現(xiàn)甲醇提取出的阿魏酸量最高，故最終選取了甲醇作為提取溶劑。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)所建立的高效液相色譜方法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，可在較短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)安康顆粒中阿魏酸的含量測(cè)定。因此，該方法可用于安康顆粒的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)。