李立峰 高 偉 夏興宏 于 艷 費 滕

(遼寧省蠶業(yè)科學(xué)研究所，遼寧鳳城 118100)

柞園內(nèi)林下經(jīng)濟建設(shè)是柞園生態(tài)建設(shè)的一個重要內(nèi)容，也是未來柞園建設(shè)和發(fā)展的方向。近些年，我們發(fā)現(xiàn)柞園里有非常珍貴的野生真菌，這些野生真菌與柞樹根系共生形成菌根后，不僅能夠促進(jìn)柞樹生長發(fā)育，增強柞樹抗病、抗逆性，而且其子實體還有許多藥用和食用價值。遼東山區(qū)柞樹菌根真菌有36種,而美味牛肝菌就是藥食同用的一種野生真菌。美味牛肝菌(BoletusedulisBull.exFr.)，牛肝菌科，牛肝菌屬，俗稱大腳菇，粗腿蘑，大腿蘑，牛腿蘑等[1]。資料和實踐表明，這種真菌與柞樹根系共生形成菌根后，能促進(jìn)作樹生長[2]，其子實體是餐桌上受青睞的菜肴之一，也是我省出口創(chuàng)匯的野生食用菌主要種類，有開發(fā)價值。

目前，對美味牛肝菌的一級斜面菌種、二級液體菌種的分離、培養(yǎng)，不少人已獲得成功；而對三級栽培種(以下簡稱栽培種)的制備、未見報導(dǎo)。研究者普遍認(rèn)為該真菌是難培養(yǎng)的菌種之一，有人試驗其栽培種三個月后菌落呈愈傷組織狀態(tài)，僅有少數(shù)絨毛出現(xiàn)。本試驗參考其它共生菌、腐生菌栽培種培養(yǎng)基用料，抓住柞樹菌根真菌，菌絲生長的主要環(huán)節(jié)，從編號JMF培養(yǎng)基的用料和營養(yǎng)液不同pH值著手，經(jīng)過多次試驗，終于使該菌栽培種菌絲在30～50 d內(nèi)長滿全袋?，F(xiàn)將培養(yǎng)情況初報如下。

1 材料與方法

1.1 材料

美味牛肝菌二級液體菌種，JMF培養(yǎng)基，PDMN營養(yǎng)液，丙稀袋(規(guī)格為13 cm×17 cm), 精密試紙等。

1.2 方法

1)配制不同pH值JMF培養(yǎng)基：將PDMN營養(yǎng)液的pH值分別調(diào)至4.5,5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0，并分別與JMF培養(yǎng)基攪拌、加水，以手握料見滴水為宜，然后分別裝入丙稀袋內(nèi)扎口，標(biāo)記好[3-4]。

2)高壓滅菌：將裝好JMF培養(yǎng)基的丙稀袋，用高壓滅菌鍋(壓力1～1.5 kg/cm2)滅菌120 min，待滅菌鍋壓力自然降至零時，再啟蓋、取袋，可防止丙稀袋破裂。

3)接種培養(yǎng)：將滅菌的培養(yǎng)基袋放進(jìn)接種箱內(nèi)，用高錳酸鉀、甲醛溶液再消毒60 min，袋內(nèi)培養(yǎng)基溫度降到30 ℃以下時，可在酒精燈的火焰周圍接種[5]。具體操作是：先將裝培養(yǎng)基的丙稀袋口打開，在培養(yǎng)基的中心扎10 cm左右深的圓孔，后將二級液體菌種瓶塞在火焰上方迅速打開，將液體菌種0.5～1.0 mL(或小塊)放進(jìn)培養(yǎng)基內(nèi)，迅速扎口。為了防止恒溫培養(yǎng)時感染雜菌，可在丙稀袋口處扎一層牛皮紙。

4)恒溫培養(yǎng)：將接好種的JMF培養(yǎng)基丙稀袋，放置于25±2 ℃的遮光恒溫室內(nèi)發(fā)菌。在恒溫培養(yǎng)中，每天觀察、記載菌絲體生長情況，及時處理被雜菌感染的菌種袋[6]。

2 結(jié)果

經(jīng)過多次試驗，JMF培養(yǎng)基營養(yǎng)液不同pH值的8個區(qū)，接種后菌絲體生長情況見表1。

表1 營養(yǎng)液不同pH值對美味牛肝菌栽培菌絲生長影響

注:A表示接種平面上的菌絲生長狀態(tài)，B表示培養(yǎng)料中的菌絲整體生長狀態(tài)。A0表示菌絲開始擴展；A1/2表示菌絲長滿平面1/2；A1表示菌絲長滿平面；B1/5表示菌絲漲至全袋1/5；B1/4表示菌絲長滿全袋1/4；B1/3表示菌絲長滿全袋1/3；B1/2表示菌絲長滿全袋1/2；B2/3表示菌絲長滿全袋2/3；B1表示菌絲長滿全袋。

由表1可見，不同pH的JMF培養(yǎng)基營養(yǎng)液上美味牛肝菌的菌絲都能生長。接種后1～5 d菌絲開始擴展,3～10 d菌絲長滿平面,10～20d菌絲長至全袋的1/5～1/2，20～30 d菌絲長至全袋的1/2～2/3，30～50 d菌絲長滿全袋。

3 討 論

3.1 JMF培養(yǎng)基營養(yǎng)液pH道為6.0～6.5的試驗區(qū)，在30 d內(nèi)菌絲率先長滿全袋；pH值7.0～7.5試驗區(qū)，有2/3在40 d內(nèi)菌絲長滿全袋；其余試驗區(qū)的菌絲在50 d內(nèi)也都長滿全袋。

3.2 在試驗中，如有雜菌感染現(xiàn)象，是培養(yǎng)料中有干塊、恒溫室有雜菌及丙稀袋破碎的緣故，為此，拌料時要均勻、剔除硬塊，在丙稀袋口處扎一層牛皮紙，防止雜菌感染，并且及時淘汰破碎的丙稀袋。

3.3 恒溫室的溫度高低；培養(yǎng)料中水份的多少；袋內(nèi)裝料的實松與通氣好壞等，均會影響菌絲的正常生長繁殖。

4 結(jié) 語

柞園是柞蠶業(yè)賴以生存和發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ)，要實現(xiàn)柞蠶業(yè)可持續(xù)發(fā)展，就要保護、建設(shè)好柞園，實現(xiàn)生態(tài)綠色發(fā)展。我們把培養(yǎng)成功的美味牛肝菌等菌種適時回接到柞樹幼苗上，培育成菌根化柞苗，栽植到柞園里，可以有效增加柞園真菌子實體的發(fā)生量，柞苗成活率、生長量和生產(chǎn)力將會顯著提高。利用該項技術(shù)，不僅可以應(yīng)用于柞園生態(tài)建設(shè)，還可以應(yīng)用于荒山、荒坡造林以及疏林地改造等林業(yè)生態(tài)建設(shè)，可有效提高遼寧乃至北方柞蠶區(qū)柞園的生物量和生產(chǎn)力，對退化柞園生態(tài)修復(fù)、改善山區(qū)生態(tài)環(huán)境、實現(xiàn)柞蠶業(yè)可持續(xù)發(fā)展起到積極作用。