急性心肌梗死(AMI)發(fā)病急驟，病情進(jìn)展迅速，致死率較高[1]。微小RNA(miRNA)對(duì)心肌細(xì)胞功能具有調(diào)節(jié)作用，有望成為診斷AMI的生物標(biāo)志物[2]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，miR-302b與心血管疾病關(guān)系密切，參與心肌損傷的發(fā)生發(fā)展，并起著重要的基因調(diào)控作用[3]。本研究通過(guò)檢測(cè)老年AMI患者血清miR-302b的表達(dá)水平，分析其對(duì)AMI的診斷價(jià)值，旨在為老年AMI早期診斷提供參考依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2015年1月至2018年10月儋州市中醫(yī)醫(yī)院收治的老年AMI患者125例作為AMI組，其中男性79例，女性46例，年齡65～84歲，平均年齡(72.50±6.92)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合WHO心肌梗死診斷和治療指南制定的標(biāo)準(zhǔn)[4]；(2)年齡≥65歲，且在發(fā)病12 h內(nèi)采集血樣。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有陳舊性心肌梗死、慢性心力衰竭及心功能不全病史；(2)急性心肌炎，近期有腦血管事件；(3)肺源性心臟病、慢性阻塞性肺疾病、嚴(yán)重肝腎功能不全及自身免疫性疾??；(4)重度感染；(5)惡性腫瘤；(6)重大外傷及手術(shù)。另選取同期健康體檢者56例作為對(duì)照組，其中男性36例，女性20例，年齡65～78歲，平均年齡(71.30±6.82)歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并與所有研究對(duì)象簽署知情同意書(shū)。

1.2 觀測(cè)指標(biāo)

所有研究對(duì)象均空腹抽取靜脈血5 mL，置于無(wú)抗凝劑的離心管中，離心分離血清，-80 ℃低溫冰箱保存待測(cè)。應(yīng)用TaqMan MicroRNA Reverse Transcription試劑盒逆轉(zhuǎn)錄已定量的RNA，選用 U6 作為內(nèi)參，反應(yīng)體系為 15 μL，反應(yīng)參數(shù)為：16 ℃ 30 min；42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 min。在ABI 7500型熒光定量PCR儀(美國(guó)ABI公司)上進(jìn)行實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)。采用TaqMan MicroRNA Assay試劑盒，反應(yīng)體系為20 μL：TaqMan MicroRNA Assay 1.00 μL，cDNA 1.33 μL，TaqMan 2×Universal PCR Master Mix 10.00 μL，ddH2O 7.67 μL，混合后離心放入定量 PCR儀。擴(kuò)增條件為：95 ℃預(yù)熱10 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火60 s，45個(gè)循環(huán)，最后38 ℃延伸5 s，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。以U6為內(nèi)參照，采用2-△△Ct法計(jì)算miRNA的相對(duì)表達(dá)水平，其中△Ct=Ct目的基因-CtU6。

心肌肌鈣蛋白I(cTnI)采用貝克曼DXI800型全自動(dòng)免疫分析儀通過(guò)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)；總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平檢測(cè)采用貝克曼AU5800型全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑，操作嚴(yán)格按照儀器及試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以百分率(%)表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)。繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線)分析miR-302b、cTnI及CK-MB對(duì)老年AMI診斷的價(jià)值，曲線下面積(AUC)的比較采用Z檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AMI組和對(duì)照組臨床一般資料比較

AMI組與對(duì)照組的性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、收縮壓、舒張壓、吸煙史、高血壓史、糖尿病史、高脂血癥、TC、TG、LDL-C及HDL-C的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 AMI組和對(duì)照組血清miR-302b、cTnI及CK-MB水平比較

AMI組血清miR-302b、cTnI及CK-MB水平均明顯高于對(duì)照組(P均<0.01)。見(jiàn)表2。

表1 AMI組與對(duì)照組臨床一般資料比較

表2 AMI組與對(duì)照組血清miR-302b、cTnI及CK-MB水平比較

2.3 miR-302b、cTnI、CK-MB診斷老年AMI的價(jià)值

miR-302b、cTnI及CK-MB診斷AMI的臨界值分別為2.68、1.50 ng/mL、60.74 U/L。3項(xiàng)聯(lián)合診斷老年AMI的AUC為0.932(95%CI：0.870～0.981)，明顯高于單項(xiàng)miR-302b(AUC=0.873，95%CI：0.811～0.930)、cTnI(AUC=0.887，95%CI：0.826～0.950)或CK-MB(AUC=0.718，95%CI：0.661～0.776)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=4.862、4.537、7.250，P均<0.05)，其敏感度和特異度分別為94.5%和89.0%。miR-302b及cTnI診斷老年AMI的AUC相當(dāng)，而且均明顯高于CK-MB，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=5.617、5.912，P均<0.05)。見(jiàn)表3、圖1。

表3 miR-302b、cTnI、CK-MB診斷老年AMI的價(jià)值

圖1 miR-302b、cTnI、CK-MB診斷老年AMI的ROC曲線

2.4 血清miR-302b表達(dá)水平與cTnI、CK-MB的相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)分析顯示，老年AMI患者血清miR-302b表達(dá)水平與cTnI(r=0.817)、CK-MB(r=0.726)均呈正相關(guān)(P均<0.01)。

3 討論

AMI是老年人常見(jiàn)的急危重癥，目前cTnI、CK-MB等傳統(tǒng)心肌損傷標(biāo)志物在AMI的診療中發(fā)揮著重要作用，但這些標(biāo)志物診斷老年AMI的敏感度和特異度不高[5]。Eggers等[6]研究證實(shí)，cTnI在多種疾病治療過(guò)程中可明顯升高，在AMI早期診斷中存在一定缺陷。因此，有必要研究新型心肌損傷標(biāo)志物，以期為AMI的早期診斷、早期治療提供有利的佐證。miRNA是可在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因表達(dá)的小分子非編碼RNA，參與心肌和血管平滑肌細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，并與心肌梗死、心律失常、心肌病和血管增生等疾病的病理生理有關(guān)[7]。近期研究表明，miRNA在細(xì)胞增殖、分化、發(fā)育及死亡過(guò)程中發(fā)揮重要作用，有可能成為診斷心肌病變的新型生物標(biāo)志物，這也為研究AMI發(fā)生機(jī)制提供了新的思路[8]。cTnI是心肌特有的結(jié)構(gòu)蛋白，對(duì)心肌損傷有高度敏感性和特異性，是歐洲和美國(guó)指南中診斷AMI的首選生物標(biāo)志物。當(dāng)AMI患者的心肌發(fā)生壞死時(shí)，cTnI才會(huì)釋放到血液中，而miRNA可以穩(wěn)定存在于血液中，且比cTnI更早釋放入血液。CK-MB是一種與心肌梗死密切相關(guān)的酶類，也是臨床上診斷AMI的常用指標(biāo)，但其預(yù)測(cè)早期AMI的效能欠佳[9]。

本研究結(jié)果顯示，AMI組血清miR-302b、cTnI及CK-MB水平均明顯高于對(duì)照組，提示血清miR-302b在老年AMI患者中高表達(dá)，可能參與AMI的發(fā)生發(fā)展。陳勁松等[10]對(duì)73例AMI患者、49例不穩(wěn)定性心絞痛患者和29名健康老人血清miRNA進(jìn)行分析，結(jié)果顯示老年AMI患者miRNA的表達(dá)水平明顯升高，高表達(dá)miRNA可能與心肌損傷或壞死有關(guān)。Guo等[11]研究發(fā)現(xiàn)，AMI患者外周血中的miRNA表達(dá)水平顯著升高，與cTnI、CK-MB均呈正相關(guān)，而且miRNA達(dá)峰時(shí)間早于cTnI及CK-MB，可作為AMI早期診斷的生物標(biāo)志物。本研究應(yīng)用ROC曲線分析，結(jié)果顯示miR-302b及cTnI診斷老年AMI的AUC相當(dāng)，而且均明顯高于CK-MB，3項(xiàng)聯(lián)合診斷老年AMI的AUC(0.932，95%CI：0.870～0.981)最大，其敏感度和特異度分別為94.5%和89.0%，提示miR-302b與cTnI和CK-MB 聯(lián)合檢測(cè)有助于提高老年AMI診斷的準(zhǔn)確性。相關(guān)性分析也顯示，老年AMI患者血清miR-302b表達(dá)水平與cTnI、CK-MB均呈正相關(guān)。Yang等[12]的研究也表明，血清miR-302b是診斷AMI的新型生物標(biāo)志物，在未來(lái)有廣闊的應(yīng)用前景。

綜上所述，血清miR-302b在老年AMI患者中明顯升高，其診斷老年AMI的效能與cTnI相當(dāng)，可作為診斷老年AMI的生物標(biāo)志物。miR-302b與cTnI、CK-MB聯(lián)合檢測(cè)有助于提高老年AMI診斷的敏感度和特異度，但目前缺乏大樣本臨床隨訪研究支持，miRNA的分析技術(shù)與結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)也不統(tǒng)一，還需進(jìn)一步驗(yàn)證miR-302b的臨床應(yīng)用價(jià)值。