秦素紅　莫小林　周雨晴　馬家寶　杜沛霖

【摘 要】 目的：建立RP-HPLC同時測定壯藥清解霧化液中綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷4種指標成分的含量測定方法。方法：應用日本島津LC-20A高效液相色譜儀，SPD-20A檢測器，WondaCract ODS-2 （4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，以乙腈溶液（A）-0.2%磷酸水溶液（B）為流動相，梯度洗脫;流速1.0mL/min，檢測波長355nm，柱溫35℃。結果：綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷的進樣量分別在2.22～5.55μg、0.330～0.825μg、0.208～0.52μg、0.3485～0.8713μg范圍內線性關系良好（R2≥0.9997）;加樣回收率為97.5%～102.35%，RSD 值為1.15%～2.14%。結論：該方法專屬性、穩(wěn)定性、重復性高，靈敏、簡便，可應用于壯藥清解霧化液制備工藝質量控制。

【關鍵詞】 壯藥清解霧化湯;綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷;RP-HPLC

【中圖分類號】R29 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2019）13-0061-03

壯藥清解霧化液為廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院在研醫(yī)療機構制劑，由桑葉、千里光、崗梅根、一點紅等壯藥材組方，具有疏風清熱、解毒利咽的功效[1]。經查閱文獻，組方藥材中的化學成分包括生物堿、黃酮類和咖啡?？鼘幩犷惖萚2-4]，本文對其主要有效成分為蘆丁、綠原酸、金絲桃苷、異槲皮苷進行研究，建立RP-HPLC同時測定4種指標成分的含量測定方法，為完善壯藥清解霧化液質量標準提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）;KQ-250DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;GH-25電子分析天平（日本A&D公司）; CD-UPT超純水機（成都越純科技有限公司）;H1650醫(yī)用離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）。

1.2 試藥 崗梅根、一點紅、千里光、桑葉藥材（由廣西南寧萬寶堂藥業(yè)提供），經廣西中醫(yī)大學田輝教授鑒定符合2015年版《中國藥典》一部各品種項下標準。綠原酸（批號：110753-201413）、蘆丁（批號：100080-201409）、金絲桃苷（批號：111521-201405）、異槲皮苷（批號：111809-201402）等對照品購自中國食品藥品檢定研究院;乙腈為色譜純（美國Fisher公司），水為超純水，其他試劑均為分析純（成都市科龍化工試劑廠）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：WondaCractODS-2（4.6mm×250mm，5μm）;流動相：乙腈溶液（A）-0.2%磷酸水溶液（B）梯度洗脫（見表1）;流速：1.0mL/min;檢測波長：355nm;柱溫：35℃;進樣量：20μL。色譜圖如圖1所示。

2.2 供試品溶液 精密移取壯藥清解霧化液25mL，水浴蒸干，甲醇溶解轉移至25mL容量瓶，超聲處理30min，放冷，精密加入甲醇定容至刻度線，搖勻，10000/min離心5min，取上清液，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得壯藥清解霧化液供試品。

2.3 陰性對照溶液 按照壯藥清解霧化液組方工藝配制缺少千里光的陰性樣品，再按“2.2”項下方法制備缺千里光陰性對照液;同上配制缺少一點紅、千里光、桑葉的陰性樣品，制備缺一點紅、千里光、桑葉陰性對照樣品。

2.4 混合對照溶液 精密稱取對照品綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷，加甲醇溶解制成對照品母液。再精密依次吸取一定體積對照品母液于同一容量瓶，甲醇定容得濃度依次為0.2220mg/mL、0.033mg/mL、0.0208mg/mL、0.03485mg/mL的混合對照品溶液，0.45μm濾膜濾過備用。

2.5 線性關系考察 精密量取混合對照品溶液10、12、15、18、20、25μL，分別進樣分析。以峰面積為縱坐標，對照品含量為橫坐標進行線性回歸。結果見表2。

2.6 精密度考察 取“2.2”項下壯藥清解霧化液供試品溶液，連續(xù)6次進樣20μL，依法測定記錄綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷峰面積，RSD依次為1.4%，1.7%，2.2%，1.2%，表明精密度良好，達到測定要求。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取壯藥清解霧化液供試品溶液，分別于室溫下0， 4， 8， 12， 24， 36h進樣20μL，依法測定，記錄綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷峰面積， RSD分別為1.9%，2.4%，2.9%，1.8%，說明壯藥清解湯供試品溶液在36h內穩(wěn)定性良好，達到測定要求。

2.8 重復性試驗 按照“2.2”項下壯藥清解霧化液供試品制備方法，平行制備壯藥清解霧化液供試品溶液6份，按照2.1項的色譜條件進行測定，結果綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷的平均含量分別為0.1948、0.0214、0.0204、0.0280mg/mL，RSD依次為2.0%，2.5%，2.7%，1.8%，參照2015年版《中國藥典》四部藥品質量標準方法驗證指導原則準確度項下樣品待測定成分含量和回收率限度要求，待測定成分含量0.01%，重復性RSD可接受范圍為小于4，良好，達到測定要求。

2.9 加樣回收率考察 精密移取已測定含量的壯藥清解湯6份各10mL，分別精密加入綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷混合對照品溶液適量，按照“2.2”項下壯藥清解湯供試品制備方法液，按“2.1”項色譜條件測定， 綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷回收率在96.7%～103.5%，結果見表3。參照2015年版《中國藥典》四部藥品質量標準方法驗證指導原則準確度項下樣品待測定成分含量和回收率限度要求，待測定成分含量0.01%，回收率限度（%）范圍為85～110;結果表明，符合含量測定的要求。

2.8 樣品含量測定 按既定工藝制3 批壯藥清解湯樣品，每批樣品按“2. 2”項下方法分別制備 3 份壯藥清解湯供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進樣測定分析，記錄色譜峰面積，根據綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷的標準曲線，計算各成分含量。結果見表 4。

3 討論

壯藥清解霧化液處方包括壯藥材桑葉、千里光、崗梅根、一點紅;組方藥材均為功效類似狀藥，具有相同的有效成分。經文獻查閱，一點紅、桑葉均含有綠原酸、蘆丁、異槲皮苷，千里光含金絲桃苷、綠原酸、蘆丁、槲皮素等[2-4]。本研究通過保留時間和千里光專屬成分金絲桃苷為參照的相對保留時間共同確定綠原酸、蘆丁、異槲皮苷的色譜峰。

檢測波長與流動相的確定：參照2015年版《中國藥典》，千里光含量測定項金絲桃苷檢測波長360nm;綠原酸檢測波長是327nm;蘆丁與異槲皮苷的苷元都是槲皮素，在358nm有最大吸收;結合試驗測定以355nm作為檢測波長[5]。以乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液（B）為流動相，梯度洗脫;試驗中混合對照品和壯藥清解霧化液中四種成分均達到基線分離，基線平穩(wěn)，峰型對稱，色譜峰分離度大。本研究對壯藥清解霧化液3個批次進行含量測定，4個成分含量差異較小，說明壯藥清解霧化液質量穩(wěn)定。

綜上，本研究建立的方法穩(wěn)定、準確，重復性強，可為壯藥清解霧化液質量控制提供參考。

參考文獻

[1]莫小林，伍小燕，龔敏陽，等.狀藥清解霧化液質量標準研究 [J].中國藥業(yè)，2017，26（10）：27-30.

[2]沈壽茂，沈連鋼，張晶，等. 一點紅HPLC指紋圖譜研究及咖啡?？鼘幩犷惓煞值暮繙y定 [J]. 中華中醫(yī)藥雜志，2014，29 （12） ：3790.

[3]張朝鳳，陳錄新，張勉，等. 千里光藥材的HPLC指紋圖譜及ESI-MS分析[J].中國中藥雜志，2008，33 （18） ：2093.

[4]朱立華，李躍輝，胥新元，等. 不同產地千里光藥材中金絲桃苷和綠原酸含量的比較研究[J].湖南中醫(yī)雜志，2013，29 （10） ：128.

[5]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（一部）[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：34

（收稿日期：2019-04-22 編輯：劉斌）