□ 周致瑩 喬小青 張旭光

湯臣倍健股份有限公司，廣州，510000

1 引言

膠原蛋白（collagen）是一種非水溶性纖維狀的含糖蛋白質(zhì)，來自于脊椎動物的結(jié)締組織。膠原蛋白不僅是脊椎動物細(xì)胞外間質(zhì)的重要成分，而且是其體內(nèi)含量最為豐富的蛋白質(zhì)。在人體內(nèi)，膠原蛋白對皮膚具有保水、保濕以及保持彈性等重要作用[1]。另外有研究表明，口服膠原蛋白對真皮和表皮均具有改善作用，因其吸收利用率好，易于擴(kuò)散到皮膚的深層和表層，從而使角質(zhì)層水分得以提高，達(dá)到表皮細(xì)胞活性提高、皮膚膚質(zhì)提升的作用[2]。本款膠原蛋白復(fù)合粉除膠原蛋白外，還含有具有保濕作用的庫拉索蘆薈凝膠凍干粉（Aloe vera gel freeze-dried powder）和透明質(zhì)酸鈉（Sodium hyaluronate）。本研究將幾款具有補(bǔ)水保濕作用的原料制成粉劑產(chǎn)品，按照《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》的方法進(jìn)行功能學(xué)評價(jià)，對人體進(jìn)行改善皮膚水份功能實(shí)驗(yàn)研究，為開發(fā)同類型的膠原蛋白保健食品提供實(shí)驗(yàn)支持。

2 材料和方法

2.1 受試物

膠原蛋白復(fù)合粉，粉劑，淡黃色粉末，本品的主要成分及含量為膠原蛋白（66.7%）、庫拉索蘆薈凝膠凍干粉（0.8%）、透明質(zhì)酸鈉（0.6%）。核準(zhǔn)凈含量：4.5g/袋，人體推薦量為每日1次，每次1袋，服用量為4.5g/日。安慰劑除功效成分外，在劑型、口感、外觀和包裝上與受試物一致。

2.2 受試對象

按自愿原則選擇30-50歲，皮膚水分≤12的受試者

2.2.1 診斷標(biāo)準(zhǔn)

前額眉間皮膚水分≤12，無炎癥、痛癢等癥狀。

2.2.2 納入者標(biāo)準(zhǔn)

凡前額眉間皮膚水分≤12的自愿受試者，經(jīng)體檢合格均可進(jìn)行試食觀察。

2.2.3 排除者標(biāo)準(zhǔn)

2.2.3.1 年齡在30歲以下或者50歲以上者，妊娠或者哺乳期婦女，對本保健品過敏者。

2.2.3.2 合并有心肝腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病，精神疾病患者。

2.2.3.3 不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，未按規(guī)定用受試物，無法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者。

2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組

采用自身前后對照和組間對照兩種形式。104名受試者隨機(jī)分為試食組和對照組，試食組服用受試物，對照組服用安慰劑。

2.4 服用劑量和時(shí)間

每日1次，每次1袋，服用限量為4.5g/日，連續(xù)30天，受試者在試食期間停止服用有關(guān)改善皮膚水分的藥物或者其他保健品及化妝品，不改變原來的飲食習(xí)慣，正常飲食。

2.5 儀器與試劑

CA-500型血球計(jì)數(shù)儀（日本產(chǎn)），BM-200尿十項(xiàng)分析儀（美國產(chǎn)），日立7100全自動生化分析儀（日本產(chǎn)），Skin Analyzer SHP88儀（德國產(chǎn)），生化試劑盒全部由中生公司提供。

2.6 觀察指標(biāo)

以下觀察指標(biāo)實(shí)驗(yàn)前后各檢查一次。

2.6.1 功效性觀察

2.6.1.1 一般情況

詳細(xì)詢問病史，了解受試者飲食情況，觀察精神狀況、睡眠、飲食、大小便、血壓等主要臨床癥狀。觀察受試物對受試者是否有不良影響。

2.6.1.2 皮膚水分檢測

2.6.1.2.1 測定環(huán)境：在寬敞、通風(fēng)條件良好，溫度、濕度適中的空間環(huán)境穩(wěn)定的檢查室中進(jìn)行。

2.6.1.2.2前額眉間皮膚水份測定

在安靜狀態(tài)下，用潔凈棉球蘸蒸餾水清潔眉間被測部位，擦干后15分鐘進(jìn)行水分的測定，試食前后測定工作由同一臺儀器、同一人操作完成。

2.6.2 安全性觀察

2.6.2.1 血液、尿常規(guī)及便常規(guī)檢查

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，血紅蛋白，白細(xì)胞計(jì)數(shù)，尿十項(xiàng)，便常規(guī)檢測。

2.6.2.2 生化指標(biāo)測定

血清白蛋白ALB，總蛋白TP，肝腎功能（總膽紅素TBIL，谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT，尿素氮BUN，肌酐CRE），血糖GLU、血脂（總膽固醇TC，甘油三酯TG）。

2.6.2.3 腹部B超，心電圖，X線胸部透視。（在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)檢查一次）

2.7 改善皮膚水分功效判定

有效：水分得到改善，并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)有顯著性差異。

無效：水分沒有得到明顯的改善。

2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為劑量資料，用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。凡自身對照資料可以采用配對t檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)，后者需要進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。

有效率采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)。四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí)，應(yīng)改為確切概率法。

3 結(jié)果與分析

3.1 一般狀況

受試者104人，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，共100例有效，均為女性。試食組50例，年齡最小35歲，最大50歲，平均年齡（45.10±4.85）歲；對照組50例，年齡最小31歲，最大50歲，平均年齡（44.34±5.15）歲。

3.2 受試物對皮膚水分變化的影響

?

3.3 功效判斷

?

由表1、2可見，試食組試食前后皮膚水分增加有顯著性差異（P＜0.001），總有效率為84.00%顯著高于對照組（P＜0.001）；實(shí)驗(yàn)后試食組皮膚水分增加2.70±2.21，而對照組無明顯變化，兩組比較（P＜0.001）。試食組試食后與對照組相比，皮膚水分有顯著性差異（P＜0.001）。

3.4 一般情況

?

3.5 血常規(guī)和血生化變化

?

由表4可見，試食前后試食組和對照組各項(xiàng)血生化和血常規(guī)指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)。

3.6 血壓、心率、尿和便常規(guī)變化

?

由表5可見，試食前后試食組和對照組血壓、心率、尿和便常規(guī)指標(biāo)均在正常范圍。

3.7 腹部B超，心電圖，X線胸部透視試食前后試食組和對照組均在正常范圍內(nèi)。

3.8 受試者脫失率

納入受試者104例，試食組52例、對照組52例。其中試食組試食結(jié)束時(shí)有2例未在規(guī)定時(shí)間按時(shí)接受復(fù)查；對照組有2例未在規(guī)定時(shí)間內(nèi)按時(shí)接受復(fù)查。試食組與對照組各有2例符合受試者排除標(biāo)準(zhǔn)，有效受試者每組50例，受試者脫失率均為3.85%。

3.9 不良反應(yīng)觀察

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未見過敏及其他不良反應(yīng)。

3.10 結(jié)論

采用自身與組件對照兩種對照設(shè)計(jì)，納入病例104例，隨機(jī)分為試食組和對照組。有效受試者100例，試食組、對照組各50例。試食組按要求服用該膠原蛋白復(fù)合粉30天后，皮膚水分平均增加2.70±2.21，與對照組比較有顯著差異（P＜0.001），其中42例皮膚水分增加，有效率為84.00%；對照組為安慰劑組，30天后復(fù)查時(shí)有20例皮膚水分增加，有效率為40.00%。試食組有效率高于對照組（P＜0.001）。服用該膠原蛋白復(fù)合粉前后，試食組自身比較及與對照組比較，皮膚水份均顯著性增加（P＜0.001）。因此，可以認(rèn)定，該膠原蛋白復(fù)合粉具有改善皮膚水分的作用。

試食者胸透、腹部B超、心電圖均基本在正常范圍內(nèi)。試食該膠原蛋白復(fù)合粉前后，血常規(guī)、尿常規(guī)、便常規(guī)及血生化指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，說明該膠原蛋白復(fù)合粉對受試者健康無不良影響。此外，試食該膠原蛋白復(fù)合粉后，未見過敏及其他不良反應(yīng)。

4 討論

本研究采用的方法為將受試者隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對照組兩組，分別使用膠原蛋白復(fù)合粉和安慰劑，安慰劑除功效成分外，在劑型、口感、外觀和包裝上與受試產(chǎn)品一致。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：食用膠原蛋白復(fù)合粉后受試者皮膚水分得到了顯著的改善，同時(shí)血常規(guī)、血生化等各項(xiàng)指標(biāo)的檢測結(jié)果也均未見異常。試食組在試食膠原蛋白復(fù)合粉之后皮膚水分得到了明顯的提高，并與試食前皮膚水分具有顯著性差異，同時(shí)也與對照組皮膚水分改善情況比較后也具有顯著性差異，說明該種膠原蛋白復(fù)合粉不僅能夠改善皮膚水分，而且對人體沒有任何的不良影響。

皮膚老化是人體衰老的外在表現(xiàn)，是內(nèi)源性和外源性因素等綜合作用的結(jié)果。膠原蛋白因其獨(dú)特的皮膚修復(fù)能力，且具有較大的親和力、良好的生物相容性，已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域[3]。由于膠原蛋白分子含有許多的親水取代基，因此，具有很強(qiáng)的保濕能力，具體體現(xiàn)在提高組織細(xì)胞的貯水能力、使皮膚潤澤保濕[4]。大量的實(shí)驗(yàn)研究表明，試食膠原蛋白能起到改善皮膚水分的作用。馬慧軍[5]應(yīng)用膠原蛋白凝膠對各類淺Ⅱ度以下燒傷創(chuàng)面進(jìn)行護(hù)理，發(fā)現(xiàn)膠原蛋白凝膠組在色素沉著發(fā)生率及疼痛緩解時(shí)間上均有明顯下降。周雙琳[6]通過人體試食實(shí)驗(yàn)，口服小分子魚膠原蛋白粉，發(fā)現(xiàn)可在一定程度地改善女性面部膚質(zhì)，且無明顯不良反應(yīng)，具有較好的安全性和有效性。余宙[7]等使用魚膠原蛋白粉進(jìn)行了人體試食的安全性與功能性研究，發(fā)現(xiàn)試食組食用前后，自身對照皮膚水分有顯著差異（P＜0.05），具有顯著的改善皮膚水分作用。

作為該款膠原蛋白復(fù)合粉其他兩種成分亦有保濕作用，有研究表明庫拉索蘆薈提取液可以很好的降低皮膚失水率和提高皮膚的含水量[8]。萬克英等[9]通過動物試驗(yàn)，表明蘆薈凝膠中的多糖成分能促進(jìn)皮膚組織中纖維連接蛋白增加，有助于皮膚水分的改善。透明質(zhì)酸由于具有很強(qiáng)的吸水性而有保濕作用，其保濕效果與甘油相比效果更好，能夠使用皮膚在不同季節(jié)環(huán)境下保濕的需求[10]。