黃丹　周航　鄭建清

【摘要】 目的：探討卵巢癌組織Rho GTP酶結(jié)合蛋白2（RHPN2）表達(dá)變化與卵巢癌預(yù)后的關(guān)系。方法：用Kaplan-Meier plotter數(shù)據(jù)庫分析卵巢癌組織和正常組織中RHPN2基因表達(dá)的差異，并分析不同RHPN2基因表達(dá)狀態(tài)下卵巢癌的總生存差異，探索RHPN2基因表達(dá)的預(yù)后價(jià)值。

結(jié)果：Kaplan-Meier plotter數(shù)據(jù)庫包含了1 653個(gè)病例樣本。數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示正常卵巢組織中RHPN2基因低表達(dá)，卵巢癌組織中RHPN2基因高表達(dá)。根據(jù)預(yù)設(shè)的截?cái)嘀担?08例為高表達(dá)組，347例患者為低表達(dá)。RHPN2基因低表達(dá)組卵巢癌中位總生存時(shí)間為52.03個(gè)月，高表達(dá)組為35.53個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[風(fēng)險(xiǎn)比（HR）=1.47，95%CI（1.2，1.8），P=0.001]。結(jié)論：RHPN2基因高表達(dá)是降低卵巢癌總生存的不良預(yù)后因素。

【關(guān)鍵詞】 卵巢癌; RHPN2; Kaplan Meier plotter數(shù)據(jù)庫; 生存分析; 預(yù)后因素

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.19.069 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2019）19-0-02

Relationship between Expression of Rho GTPase-binding Protein 2 Gene and Prognosis of Ovarian Cancer and Its Mechanism/HUANG Dan，ZHOU Hang，ZHENG Jianqing.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（19）：-153

【Abstract】 Objective：To investigate the relationship between the expression of Rho GTPase binding protein 2（RHPN2） in ovarian cancer and its prognosis value.Method：The Kaplan-Meier plotter database was used to analyze the difference of RHPN2 gene expression in ovarian cancer tissues and normal tissues，and the total survival difference of ovarian cancer under different RHPN2 gene expression status was analyzed.The prognostic value of RHPN2 gene expression was explored.Result：The Kaplan-Meier plotter database contained 1 653 case samples.The results of data analysis showed that the RHPN2 gene was down-regulated in normal ovarian tissues，and the RHPN2 gene was highly expressed in ovarian cancer tissues.According to the preset cut-off value，308 cases were included in high expression group and 347 cases in low expression group.The median survival time of ovarian cancer in the low expression group of RHPN2 gene was 52.03 months，and that in the high expression group was 35.53 months，the difference was statistically significant[hazard ratio（HR）=1.47，95%CI（1.2，1.8），P=0.001].Conclusion：High expression of RHPN2 gene is a poor prognostic factor for reducing the overall survival of ovarian cancer.

【Key words】 Ovarian cancer; RHPN2; Kaplan-Meier plotter database; Survival analysis; Prognostic factors

First-authors address：Affiliated Hospital of Zunyi Medical College，Zunyi 563003，China

卵巢癌（ovarian cancer，OC）是最常見的婦科惡性腫瘤之一，在女性生殖器官惡性腫瘤中，卵巢癌的發(fā)病率占第三位，僅次于宮頸癌及子宮內(nèi)膜癌，但由于早期診斷困難和化療耐藥，且易發(fā)生腹腔種植轉(zhuǎn)移或累及腸道等，卵巢癌的死亡率居第一位，其五年生存率僅為30%左右[1]。45%～60%的病理確診為卵巢癌的患者最終將死于卵巢癌[2-3]。卵巢癌的病因尚不十分明確，可能與遺傳因素、內(nèi)分泌因素等有關(guān)，近年來研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展與多種基因的突變、失活、表達(dá)異常有關(guān)。Rho GTP酶結(jié)合蛋白2（Rho GTPase binding protein 2，RHPN2）基因，即rhophilin2，定位于染色體19q12-13，是一種RhoA結(jié)合蛋白，但其生物學(xué)功能仍然模糊不清[4]。目前關(guān)于RHPN2功能的研究較少，而且尚無RHPN2與卵巢癌關(guān)系的報(bào)道，更不清楚RHPN2基因與卵巢癌預(yù)后的關(guān)系。本研究利用Kaplan-Meier Plotter數(shù)據(jù)庫分析卵巢癌組織RHPN2基因表達(dá)變化及其與卵巢癌預(yù)后的關(guān)系，并探索RHPN2基因在腫瘤生物學(xué)行為中的機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本文的數(shù)據(jù)分析是基于網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行的大數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)來源于Kaplan-Meier在線數(shù)據(jù)庫（http：//kmplot.com/analysis）。目前該Kaplan-Meier數(shù)據(jù)庫提供了1 648例卵巢癌患者的基因表達(dá)結(jié)果和生存資料，其中有655例患者提供了RHPN2基因的長期隨訪資料。使用者可以利用該數(shù)據(jù)庫實(shí)現(xiàn)目的基因表達(dá)水平與腫瘤患者的總生存（OS）和無進(jìn)展生存（PFS）的相關(guān)性分析[5]。

1.2 方法

卵巢癌組織RHPN2基因表達(dá)變化與卵巢癌預(yù)后關(guān)系數(shù)據(jù)分析的設(shè)定條件，（1）腫瘤類型：Ovarian Cancer;（2）目的基因：RHPN2，基因官方代碼為：227196_at（Affy ID）;（3）基因表達(dá)分組條件：系統(tǒng)自行選擇最佳截?cái)嘀?其他設(shè)定為數(shù)據(jù)庫默認(rèn)設(shè)定。

1.3 觀察指標(biāo)

主要觀察指標(biāo)為RHPN2表達(dá)結(jié)果、不同RHPN2表達(dá)下卵巢癌患者的總生存（OS）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

利用KM plotter在線數(shù)據(jù)庫通過R語言直接獲得Kaplan-Meier生存曲線圖，該生存曲線同時(shí)提供主要計(jì)算結(jié)果，包括組間風(fēng)險(xiǎn)比（HR）及其95%置信區(qū)間（95%CI）和相應(yīng)P值?？偵鏁r(shí)間以中位生存時(shí)間提供，單位為個(gè)月，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 數(shù)據(jù)檢索結(jié)果

共檢出5個(gè)正常組織樣本和1 648個(gè)卵巢癌組織樣本。正常組織RHPN2基因中位表達(dá)105（表達(dá)范圍80～192），顯著低于癌組織的中位表達(dá)1 606（表達(dá)范圍20～20 059），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。共有655例帶有RHPN2基因檢測結(jié)果的卵巢癌患者具有長期隨訪結(jié)果。納入分析的卵巢癌組織中RHPN2基因表達(dá)的截?cái)嘀禐? 704，根據(jù)預(yù)設(shè)的截?cái)嘀担?08例為高表達(dá)組，347例患者為低表達(dá)。

2.2 總生存結(jié)果

RHPN2基因低表達(dá)組卵巢癌中位總生存時(shí)間為52.03個(gè)月，高表達(dá)組為35.53個(gè)月，RHPN2基因高表達(dá)組預(yù)后顯著差于低表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[HR=1.47，95%CI（1.2，1.8），P=0.001]，總生存曲線見圖1。

3 討論

在本文中，筆者旨在探索人類Rhophilin-2基因的預(yù)后價(jià)值。Rhophilin-2是一種在人體內(nèi)普遍表達(dá)的Rho結(jié)合蛋白，是Rhophilin家族的新成員。 研究者首次在老鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一種可以和Rho蛋白GTP酶分子結(jié)合的蛋白，將其命名為RHPN1，而后在人體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)了一種與RHPN1高度同源，結(jié)構(gòu)相似的Rho結(jié)合蛋白，將其命名為RHPN2，即Rhophilin-2。Rhophilin-2和Rhophilin-1的結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)具有49%的氨基酸同源性。Rhophilin-1和Rhophilin-2的Rho結(jié)合結(jié)構(gòu)域內(nèi)的氨基酸相似性也與它們觀察到的RhoA結(jié)合特性相關(guān)。研究實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Rhophilin-1和Rhophilin-2與GDP和GTP結(jié)合的RhoA結(jié)合，但不與其他相關(guān)的GTP酶如Rac1或RhoE結(jié)合。此外，Rhophilin-2的Rho結(jié)合位點(diǎn)中的雙點(diǎn)突變有效地阻斷了與GDP-和GTP-結(jié)合的RhoA的結(jié)合[6]。Danussi等[7]通過Multi-Reg技術(shù)鑒定了RHPN2，證實(shí)rhophilin-2是一種具有間充質(zhì)特征的新型驅(qū)動(dòng)基因。試驗(yàn)隨訪確定RHPN2促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞（neural stem cells，NSC）的間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，并增加不同神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞模型中腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。重要的是，RHPN2擴(kuò)增和過表達(dá)顯著降低膠質(zhì)瘤患者存活率，研究支持這種蛋白質(zhì)參與惡性膠質(zhì)瘤的侵襲性的特征[7]。目前，研究者多種惡性腫瘤，包括惡性腦膠質(zhì)瘤[7]、乳腺癌[8]、結(jié)直腸癌[9]、肺癌[10]中發(fā)現(xiàn)RHPN2有不同程度的高表達(dá)。然而在卵巢中仍然很少見到與Rhpn2相關(guān)的研究報(bào)道[11]。

筆者利用Kaplan-Meier在線數(shù)據(jù)庫，獲得了大樣本數(shù)據(jù)資料，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，正常組織RHPN2基因中位表達(dá)105（表達(dá)范圍80～192），顯著低于癌組織的中位表達(dá)1 606（表達(dá)范圍20～20 059），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。與蔡圣蕓[11]的研究結(jié)果相似，其通過提取卵巢癌細(xì)胞的總RNA進(jìn)行RT-PCR試驗(yàn)，檢測RHPN2的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，在卵巢癌臨床樣本中，陽性率為45.83%（11/24），表達(dá)水平顯著高于癌旁組織的20.83%（5/24），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）[11]。此外，筆者發(fā)現(xiàn)，RHPN2基因低表達(dá)組卵巢癌中位總生存時(shí)間為52.03個(gè)月，高表達(dá)組為35.53個(gè)月;差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[HR=1.47，95%CI（1.2，1.8），P=0.001]。從生存曲線圖可以看出，RHPN2基因高表達(dá)預(yù)后顯著差于低表達(dá)。而這個(gè)結(jié)論與何嘉曦等[10-12]的發(fā)現(xiàn)相似，RHPN2高表達(dá)者比RHPN2低表達(dá)或表達(dá)陰性者生存期和無瘤生存期均明顯延長，提示RHPN2基因表達(dá)水平的高低可預(yù)測卵巢癌患者的預(yù)后。

綜合上述文獻(xiàn)資料和筆者的研究結(jié)果，認(rèn)為RHPN2基因高表達(dá)是降低卵巢癌總生存的不良預(yù)后因素之一，但是否可以作為卵巢癌預(yù)后的獨(dú)立影響因素，還需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。

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（收稿日期：2019-02-26） （本文編輯：郎序瑩）