翁志平　梁錦杰

【摘?要】?目的：探討益母草干品、酒益母草、醋益母草以及四制益母草質(zhì)量，為制定四制益母草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供數(shù)據(jù)支持。方法：按照《中國(guó)藥典（2015年版）》對(duì)益母草不同炮制品進(jìn)行水分、總灰分、二氧化硫及浸出物含量測(cè)定;以鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：益母草不同炮制品水分含量范圍為10.9%-11.9%;總灰分含量范圍為6.8%-7.9%;二氧化硫未有檢出;浸出物含量范圍為16.3%-17.8%;鹽酸水蘇堿含量范圍為0.57%-0.68%;鹽酸益母草堿含量范圍為0.181%-0.194%。結(jié)論：益母草不同炮制品水分、總灰分、浸出物及二氧化硫殘留均符合藥典規(guī)定;干益母草鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿含量最高，四制益母草含量最低，其藥理、毒理物質(zhì)基礎(chǔ)有待進(jìn)一步研究。

【關(guān)鍵詞】?益母草;炮制品;四制益母草;質(zhì)量研究

【中圖分類號(hào)】R283???【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A????【文章編號(hào)】1007-8517（2019）11-0031-04

The Quality Research of Different Processed Products of Leonurus Heterophyllus

WENG Zhiping?LIANG Jinjie

Guangdong Xinxing Chinese Medicine School，Yunfu 527400，China

Abstract：Objective To study the quality of dried Leonurus heterophyllus， liquor Leonurus heterophyllus， vinegar Leonurus heterophyllus and Sizhi Leonurus heterophyllus. And provide data support for formulating quality standards of Sizhi heterophyllus. Method According to the Chinese Pharmacopoeia （2015 edition）， determine the contents of water， total ash， sulfur dioxide and extracts in different processed products of Leonurus heterophyllus. And determine the contents of stachydrine hydrochloride and leonurnine hydrochloride by high performance liquid chromatography. Result ?The moisture content ranged from 10.9% to 11.9%， total ash content ranged from 6.8% to 7.9%， sulfur dioxide was not detected， extract content ranged from 16.3% to 17.8%， stachydrine hydrochloride content ranged from 0.57% to 0.68%， and Leonurus hydrochloride content ranged from 0.181% to 0.194%. Conclusion The contents of moisture， total ash， extracts and sulfur dioxide residues in different processed products of Leonurus heterophyllus were in accordance with the provisions of pharmacopoeia. The contents of stachydrine hydrochloride and Leonurus hydrochloride in dried Leonurus heterophyllus were the highest and those in Sizhi heterophyllus were the lowest. Those pharmacological and toxicological substances need to be further studied.

Keywords：Leonurus Heterophyllus; Processed Products; Sizhi Heterophyllus; Quality Research

益母草為唇形科植物益母草（Leonurus japonicus Houtt.）新鮮或干燥地上部分，其味苦、辛，性微寒;歸肝、心包、膀胱經(jīng)。具有活血調(diào)經(jīng)，利尿消腫，清熱解毒之功效。用于月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)經(jīng)閉，惡露不盡，水腫尿少，瘡瘍腫毒等癥[1]，為婦產(chǎn)科要藥，故有“益母”之稱。益母草分布在全國(guó)大部分地區(qū)，包括湖北、山東、安徽、江蘇、廣東、河北、河北等[2]，主要含有生物堿類、黃酮類、二萜類、揮發(fā)油類等化學(xué)成分[3]，其中《中國(guó)藥典》含量測(cè)定成分為鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿。

益母草的炮制方法繁多。唐代的《新修本草》，有關(guān)于益母草的炮制記載，方法為“搗汁”，是益母草最早的炮制記載。宋代有燒炭炮制法，見(jiàn)于《太平圣惠方》[4]。明代陳嘉謨?cè)凇侗静菝绍酢分杏涊d“細(xì)剉醋炒，馬嚙堪敷”[5]。清代屠道和在《本草匯纂》中載有“微炒”[6]。清代鮑相璈在《驗(yàn)方新編》中有“燒灰存性”的記載[7]。清代嚴(yán)西亭的《得配本草》中載有“蜜水炒”“酒拌蒸”[8]。

到了近現(xiàn)代關(guān)于益母草炮制的方法有“炒制”、“醋制”、“酒制”、“蜜制”、“姜酒共蒸制”、“炒炭”以及廣東地區(qū)特有的“四制法”（即酒、醋、鹽、姜四種輔料）等。1963年9月廣東省藥品檢驗(yàn)所邀請(qǐng)全省名老藥工舉辦了廣東省藥材加工炮制經(jīng)驗(yàn)交流會(huì)，并編著了《廣東藥材炮制手冊(cè)》一書(shū)，是四制益母草最早的文字記載。廣東省新興縣中藥炮制歷史悠久，曾有“中藥炮制之鄉(xiāng)”的美譽(yù)，在長(zhǎng)期的實(shí)踐過(guò)程中形成獨(dú)特的炮制的方法，為了挖掘、保護(hù)、傳承新興縣傳統(tǒng)中藥炮制技術(shù)，本文結(jié)合新興縣中藥炮制特色，對(duì)益母草干品、酒蒸品、醋蒸品及四制品進(jìn)行定性定量的分析比較，為制定四制益母草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)，為傳承新興縣中藥炮制提供理論基礎(chǔ)。

1?儀器與試藥

1.1?儀器?LC-20AT/JY-001高效液相色譜儀（島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司）;DHG-9140A/JY-026電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;KQ5200VD型/JY-007數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;FA2004/JY-003電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）;NewclassicMFMS105DU/JY-024分析天平（島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司）;FW315/JY-022中草藥粉碎機(jī)（天津泰斯特儀器有限公司）;SX-4-10/JY-027箱式電阻爐（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）。

1.2?試藥?益母草（湖北），鹽酸水蘇堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110712-201513），鹽酸益母草堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111823-201303），丙酮（上海專業(yè)試劑廠，批號(hào)：20180323），鹽酸（上海專業(yè)試劑廠，批號(hào)：20170605-1），乙腈（上海星可高醇溶劑有限公司，批號(hào)：0113181201），辛烷磺酸鈉（天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20180401），磷酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：167217），冰醋酸（西隴科學(xué)股份有限公司，批號(hào)：160820-1），水為超純水，其他試劑均為分析純。

2?方法與結(jié)果

2.1?樣品制備?干品：益母草取原藥材除去雜質(zhì)及老莖，水洗凈潤(rùn)軟，切長(zhǎng)段，曬干。

醋益母草：每10kg益母草，用醋2kg。取醋加入凈益母草段中，拌勻，潤(rùn)至吸干，置蒸具內(nèi)。于開(kāi)水鍋內(nèi)蒸透氣后1h，取出，曬干。詳細(xì)炮制工藝以新興縣藥工為準(zhǔn)。

酒益母草：每10kg益母草，用黃酒2kg。取黃酒加入凈益母草段中，拌勻，潤(rùn)至黃酒被吸干，置蒸具內(nèi)。于開(kāi)水鍋內(nèi)蒸透氣后1h，取出，曬干。詳細(xì)炮制工藝以新興縣藥工為準(zhǔn)。

四制益母草：每10kg益母草，用酒、醋、生姜汁各0.6kg，鹽0.2kg。取酒、醋、姜汁、鹽水的混合液，加入凈益母草中，拌勻，悶潤(rùn)至輔料被吸干，置蒸具內(nèi)，于開(kāi)水鍋內(nèi)蒸1h，取出曬干。詳細(xì)炮制工藝以新興縣藥工為準(zhǔn)。

2.2?水分的測(cè)定?參照《中國(guó)藥典（2015年版）》四部通則0832項(xiàng)下的烘干法，對(duì)益母草不同炮制品進(jìn)行水分測(cè)定，藥材含水量不得過(guò)13.0%（結(jié)果見(jiàn)表1）。

2.3?總灰分的測(cè)定?參照《中國(guó)藥典（2015年版）》四部通則2302項(xiàng)下的灰分測(cè)定法，對(duì)益母草不同炮制品進(jìn)行總灰分測(cè)定，總灰分含量不得過(guò)11.0%（結(jié)果見(jiàn)表1）。

2.4?浸出物的測(cè)定?參照《中國(guó)藥典（2015年版）》四部通則2201項(xiàng)下水溶性浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定，對(duì)益母草不同炮制品進(jìn)行浸出物含量測(cè)定，浸出物含量不得少于15.0%（結(jié)果見(jiàn)表1）。

2.6?含量測(cè)定

2.6.1?鹽酸水蘇堿含量測(cè)定

2.6.1.1?色譜條件?Polar-Propylamide（250mm×4.6mm）;以乙腈-0.2%冰醋酸溶液（80∶20）為流動(dòng)相;柱溫25℃;流速：1.0mL/min。理論板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。如圖1所示。

2.5?二氧化硫的測(cè)定?參照《中國(guó)藥典（2015年版）》四部通則2331項(xiàng)下的二氧化硫殘留量測(cè)定法（第一法酸堿滴定法），對(duì)益母草不同炮制品進(jìn)行二氧化硫的檢測(cè)，二氧化硫含量不得過(guò)150mg/kg（結(jié)果見(jiàn)表1）。

2.6.1.2?供試品溶液的制備?取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25mL，稱定重量，加熱回流2h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.6.1.3?對(duì)照品溶液的制備”?取鹽酸水蘇堿對(duì)照品約10mg，精密稱定，加70%乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。

2.6.1.4?精密度實(shí)驗(yàn)?取2.6.1.3項(xiàng)下鹽酸水蘇堿對(duì)照品溶液，按2.6.1.1項(xiàng)下色譜條件，平行測(cè)定6次，結(jié)果RSD為1.02%，表明測(cè)定方法精密度良好。

2.6.1.5?重復(fù)性實(shí)驗(yàn)?取干益母草5份，按“2.6.1.2項(xiàng)下供試品溶液的制備”制備樣品，按2.6.1.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果RSD為1.46%。實(shí)驗(yàn)表明樣品的重復(fù)性良好。

2.6.1.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)?取干益母草1份，按“2.6.1.2項(xiàng)下供試品溶液的制備”制備樣品，放置0，2，4，6，8，12，24h，按2.6.1.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果RSD為1.54%。實(shí)驗(yàn)表明樣品溶液室溫放置24h內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。

2.6.1.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)?在已知含量的干益母草，中加入3.0mg鹽酸水蘇堿對(duì)照品，按“2.6.1.2項(xiàng)下供試品溶液的制備”制備樣品，按2.6.1.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果平均回收率為99.08%，RSD為1.99%。

2.6.1.8樣品測(cè)定?分別精密吸取對(duì)照品溶液5μL、10μL，供試品溶液10～20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。本品按干燥品計(jì)算，含鹽酸水蘇堿不得少于0.50%。（結(jié)果見(jiàn)表2）。

2.6.2鹽酸益母草堿含量測(cè)定

2.6.2.1色譜條件?UltimateXB-C18（150mm×4.6mm）;以乙腈-0.4%辛烷磺酸鈉的0.1%磷酸溶液（24∶76）為流動(dòng)相;柱溫25℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm;進(jìn)樣量：10μL，流速：1.0mL/min。理論板數(shù)按鹽酸益母草堿峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。見(jiàn)圖2。

2.6.2.2?供試品溶液的制備?同2.6.1.2項(xiàng)下制備，供試品備用。

2.6.2.3?對(duì)照品溶液的制備?取鹽酸益母草堿對(duì)照品約7.5mg，精密稱定，置25mL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取母液1mL，至10mL容量瓶，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，制成每1mL約含30μg的溶液，即得。

2.6.2.4?精密度實(shí)驗(yàn)?取2.6.2.3項(xiàng)下鹽酸益母草堿對(duì)照品溶液，按2.6.2.1項(xiàng)下色譜條件，平行測(cè)定6次，結(jié)果RSD為1.28%，表明測(cè)定方法精密度良好。

2.6.2.5?重復(fù)性實(shí)驗(yàn)?取干益母草5份，按“2.6.2.2項(xiàng)下供試品溶液的制備”制備樣品，按2.6.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果RSD為2.01%。實(shí)驗(yàn)表明樣品的重復(fù)性良好。

2.6.2.6?穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)?取干益母草1份，按“2.6.2.2項(xiàng)下供試品溶液的制備”制備樣品，放置0，2，4，6，8，12，24h，按2.6.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果RSD為2.34%。實(shí)驗(yàn)表明樣品溶液室溫放置24h內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。

2.6.2.7?加樣回收率實(shí)驗(yàn)?已知含量的干益母草，中加入0.25mg鹽酸益母草堿對(duì)照品，按“2.6.2.2項(xiàng)下供試品溶液的制備”制備樣品，按2.6.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果平均回收率為98.90%，RSD為2.26%。

2.6.2.8?樣品測(cè)定?精密吸取2.6.2.3項(xiàng)下鹽酸益母草堿對(duì)照品溶液與2.6.2.2項(xiàng)下供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品按干燥品計(jì)算，含鹽酸益母草堿（C14H21O5N3·HCl）不得少于0.050%。見(jiàn)表2。

3?討論

中藥炮制是保證中藥質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)，關(guān)系到中醫(yī)臨床的療效，為了繼承和發(fā)揚(yáng)中藥炮制技術(shù)，必須對(duì)它進(jìn)行認(rèn)真研究。劉霞等[9]歸納總結(jié)古代記載益母草多種炮制方法，包括炒制、制炭、酒制、醋制、蜜制和四制益母草等，但國(guó)內(nèi)關(guān)于新興縣中藥傳統(tǒng)炮制工藝的研究報(bào)道不多，僅劉光明[10]等人調(diào)查了廣東省新興縣中藥炮制現(xiàn)狀。關(guān)于新興縣傳統(tǒng)炮制成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究基本沒(méi)有，國(guó)外文獻(xiàn)更未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，未見(jiàn)關(guān)于新興縣傳統(tǒng)炮制品益母草的質(zhì)量研究，本文研究為新興縣中藥炮制品制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和種植推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。

益母草在炮制方法方面，主要沿襲了古代的酒制法，現(xiàn)代以醋制、酒蒸法沿用較多，四制益母草乃廣東地區(qū)獨(dú)有的一味傳統(tǒng)炮制中藥。益母草炮制方法差異，其功效亦有所差異，干品具有活血調(diào)經(jīng)，利尿消腫，清熱解毒功效;酒蒸善于活血通脈，調(diào)經(jīng)止痛;醋制能增強(qiáng)通利血脈、活血散瘀的作用;四制后可增強(qiáng)祛瘀生新，調(diào)經(jīng)止痛的功效。本實(shí)驗(yàn)沒(méi)有進(jìn)行益母草不同炮制品藥理部分的研究，益母草質(zhì)量研究還有待完善，期待日后完善益母草炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)《中國(guó)藥典（2015版）》標(biāo)準(zhǔn)對(duì)5批次干益母草、酒蒸益母草、醋蒸益母草和四制益母草質(zhì)量進(jìn)行研究，在水分測(cè)定中，四種炮制品水分含量均符合藥典要求，含水量不超過(guò)13.0%，其中四制益母草水分含量最高;在總灰分含量測(cè)定中，四種炮制品總灰分含量在6.8%～7.9%，不超過(guò)藥典要求的11.0%;在浸出物含量測(cè)定中，四種炮制品浸出物含量在16.3%～17.9%，不少于藥典要求的15.0%;考慮到二氧化硫殘留對(duì)人體產(chǎn)生危害，本實(shí)驗(yàn)也做了二氧化硫殘留量測(cè)定，經(jīng)測(cè)定，四制益母草炮品均無(wú)檢出二氧化硫。在含量測(cè)定中，選用鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，四種炮制品含量均超過(guò)藥典規(guī)定含量，鹽酸水蘇堿含量≥0.50%，結(jié)果顯示干益母草>酒益母草>醋益母草>四制益母草，鹽酸益母草堿含量≥0.050%，結(jié)果顯示干益母草>醋益母草>酒益母草>四制益母草，結(jié)果與程軒軒、江海燕[11-12]研究結(jié)果有一定的相似性。本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同益母草炮制品進(jìn)行水分、總灰分、浸出物、二氧化硫和含量測(cè)定，下一步將繼續(xù)完善顯微鑒別和薄層鑒別，為益母草炮制品品質(zhì)評(píng)價(jià)及應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

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