吳 斌， 方春林*，張志紅， 賀 剛， 王偉萍，王慶萍，鄧宏奎

（1.江西省水產(chǎn)科學(xué)研究所，江西南昌 330000；2.江西省科學(xué)院生物資源研究所，江西南昌 330000）

中華鱉（Pelodiscus sinensis）具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，隨著市場(chǎng)需求的不斷擴(kuò)大，其池塘養(yǎng)殖發(fā)展迅速；各類抗生素等化學(xué)藥物的濫用，出現(xiàn)了中華鱉養(yǎng)殖尾水污染、藥物殘留、品質(zhì)下降等問(wèn)題，嚴(yán)重影響了中華鱉養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。中草藥具有增強(qiáng)消化酶活性、提升抗氧化功能和改善免疫應(yīng)答等功能，在一定程度上可增強(qiáng)中華鱉體質(zhì)，提升其品質(zhì)。目前，中草藥在中華鱉養(yǎng)殖中的應(yīng)用主要集中在提高免疫，緩解中華鱉應(yīng)激反應(yīng)等方面（馬曉等，2016；趙玉蓉等，2013）。中華鱉營(yíng)養(yǎng)及血清生化的研究主要集中在不同品系、溫度、季節(jié)和特定營(yíng)養(yǎng)成分等方面（汪愈超等，2019；申思仙等，2018；楊移斌等，2018；張君等，2018）。本試驗(yàn)將一種復(fù)方中草藥制劑添加到中華鱉日糧中，研究其對(duì)中華鱉幼鱉營(yíng)養(yǎng)免疫及抗氧化功能的影響，以期為中華鱉健康養(yǎng)殖提供參考。

1 材料與方法

1.1 中草藥制劑的制備及飼料配方 試驗(yàn)用中華鱉幼鱉體質(zhì)量為25～35 g，購(gòu)于南豐。中草藥購(gòu)于天貓旗艦店，烘干后過(guò)200目篩。基礎(chǔ)日糧組成見(jiàn)表1。采用單因素濃度梯度法，在基礎(chǔ)飼料中添加復(fù)合組方（芹菜籽粉∶葡萄籽粉∶薏仁粉=1：1：1），質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0%（對(duì)照組）、1%、3%和5%。復(fù)方中草藥制劑充分混勻，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)用中華鱉幼鱉飼養(yǎng)在水泥池中。試驗(yàn)開(kāi)始前投喂豬肝、肉糜和基礎(chǔ)飼料的混合料馴養(yǎng)2周。完全攝食試驗(yàn)飼料后，為控制應(yīng)激對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，直接將同一體質(zhì)量的健康、活躍、體表無(wú)傷的中華鱉隨機(jī)分為4組，不再測(cè)量體長(zhǎng)和體重。分別飼喂上述3種試驗(yàn)飼料和基礎(chǔ)飼料，每組2個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只，養(yǎng)殖于 8 個(gè)水泥池（1 m×0.8 m×0.8 m）中，池底鋪10 cm細(xì)沙，用石棉瓦做曬背臺(tái)和食臺(tái)，水深40 cm。 試驗(yàn)開(kāi)始后每日 5：00～6：00和17：00～18：00投喂面團(tuán)狀飼料，日投喂量為體質(zhì)量的3%～5%，固定地點(diǎn)投喂。投喂后2 h清理殘餌。養(yǎng)殖試驗(yàn)進(jìn)行60 d。養(yǎng)殖期間，水體pH 7.0～8.0，用增氧泵不間斷增氧，水溫為27～29℃，每周換水一次，每次換1／3的水。

1.3 血清相關(guān)指標(biāo) 每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取4只中華鱉，作為一個(gè)混合樣，另外每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取2只，合在一起作為第三個(gè)混合樣，采用斷頸采血，抽取的血液注入用肝素鈉潤(rùn)洗過(guò)的2 mL離心管中，制備成抗凝血樣品，抽取血清樣品，送至南京建成生物技術(shù)研究所進(jìn)行血液測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì) 試驗(yàn)結(jié)果以 “平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用 Duncan’s法進(jìn)行組間多重比較，顯著水平為 P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 中草藥對(duì)中華鱉幼鱉抗氧化功能的影響 由表2可知，各試驗(yàn)組血清超氧化物歧化酶（SOD）與對(duì)照組差異不顯著 （P＞0.05），5%組平均值最大，為 520.33 U/mL，較 3%組顯著提高 13.0%（P＜0.05）；血清過(guò)氧化氫酶（CAT）1%組平均值最大，為15.40 U/mL，且顯著高于其他各組，但3%組和5%組與對(duì)照組差異均不顯著（P＞0.05）；各試驗(yàn)組血清谷胱甘肽活性（GSH-Px）均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），5%組平均值最大；3%和5%組血清總抗氧化能力（T-AOC）顯著高于對(duì)照組（P ＜ 0.05），5%組平均值最大，為12.80 mL，但1%組與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）；各試驗(yàn)組血清丙二醛（MDA）含量均顯著低于對(duì)照組 （P＜0.05），5%組平均值最小，為 3.43 nmol/mL。

2.2 中草藥對(duì)中華鱉幼鱉營(yíng)養(yǎng)免疫功能的影響由表3可知，與對(duì)照組相比，1%、3%、5%組中華鱉幼鱉血清總蛋白（TP）含量均顯著升高，而尿素氮（BUN）除了添加1%中草藥組與對(duì)照組差異不顯著外，其他組均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。各組間溶菌酶活性和IgD含量差異均不顯著。添加3%和5%中草藥組中華鱉幼鱉血清IgM含量均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），而添加1%中草藥組較對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。添加3%中草藥組IL-2顯著小于對(duì)照組，而添加1%和5%中草藥組較對(duì)照組差異不顯著。對(duì)于IL-6，添加3%和5%中草藥組均顯著低于對(duì)照組，添加1%中草藥組與對(duì)照組相比差異不顯著。

3 討論

MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物之一，MDA的含量既反映了機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，也間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。SOD是清除超氧陰離子自由基的主要酶類，GSH-Px是特異的催化還原型谷胱甘肽（GSH），是催化 H2O2分解的酶。CAT也是催化 H2O2分解的酶。朱道玉（2009）研究表明，一定劑量的板藍(lán)根多糖具有提高中華鱉腎臟抗氧化酶活性、降低脂質(zhì)過(guò)氧化水平的作用。李建良（2000）采用中草藥飼喂中華鱉發(fā)現(xiàn)，鱉的食欲明顯增強(qiáng)，體質(zhì)量增加，發(fā)病率下降，有顯著的促生長(zhǎng)作用。黃文慶等（2012）研究表明，在基礎(chǔ)飼料中添加黃芪、金銀花、苦參、紫花地丁等多種中草藥可以有效提高羅非魚(yú)幼魚(yú)的增重率、特定生長(zhǎng)率、蛋白質(zhì)含量，降低飼料系數(shù)和粗脂肪含量。汪愈超等（2018）采用月桂酸單甘油酯飼喂中華鱉幼鱉發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組中華鱉血清中尿素氮含量及堿性磷酸酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶活性顯著高于對(duì)照組。本試驗(yàn)結(jié)果表明，1%、3%和5%中草藥組血清MDA含量均顯著低于對(duì)照組，表明添加該中草藥復(fù)方不同程度地降低了中華鱉幼鱉血清MDA含量，原因可能是中草藥可促進(jìn)中華鱉幼鱉血清GSH-Px、CAT以及T-AOC顯著升高，減少了自由基的含量，保護(hù)了機(jī)體免受氧化損傷。值得特別關(guān)注的是，1%、3%和5%中草藥組血清SOD活性與對(duì)照組差異均不顯著，但5%中草藥組顯著高于3%組。1%中草藥組血清CAT活性顯著高于3%和5%組。表明該復(fù)方中草藥對(duì)特定抗氧化酶活性可能存在兩重性，即一定濃度復(fù)方中草藥促進(jìn)其活性，而另一濃度其促進(jìn)能力下降，甚至抑制。綜上所述，從中華鱉幼鱉血清T-AOC以及MDA含量來(lái)看，該復(fù)方中草藥添加量以3%較為適宜。

表3 中草藥添加劑對(duì)中華鱉幼鱉營(yíng)養(yǎng)免疫的影響

血清BUN水平一定程度地反映了動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸平衡關(guān)系。當(dāng)營(yíng)養(yǎng)失衡時(shí)，蛋白質(zhì)等含氮有機(jī)物分解代謝增多，導(dǎo)致尿素量增加，反之，蛋白質(zhì)等含氮有機(jī)物合成轉(zhuǎn)化效率高，則血清 BUN水平降低。因此，血清 BUN水平可以表征機(jī)體蛋白質(zhì)合成轉(zhuǎn)化效率高低（桂琳等，2015；翟少偉等，2015）。 本試驗(yàn)證明，該復(fù)方中草藥能顯著降低中華鱉幼鱉的BUN水平，表明中草藥可提高蛋白質(zhì)的利用效率。劉行彪等（2010）指出，血清蛋白成分及其含量變化與機(jī)體健康、營(yíng)養(yǎng)和疾病等狀況密切相關(guān)，是衡量免疫功能及機(jī)體狀態(tài)的指標(biāo)，良好的營(yíng)養(yǎng)狀況可使血清蛋白維持在較高水平。本試驗(yàn)結(jié)果表明，該中草藥復(fù)方能顯著提高中華鱉幼鱉血清總蛋白，促進(jìn)中華鱉對(duì)飼料蛋白質(zhì)的吸收與利用。張鵬等（2012）指出，溶菌酶能使細(xì)胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽而導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂，逸出內(nèi)容物，使細(xì)菌溶解，是體液免疫的主要參與者。郭瓊林（2001）指出，IL-2的產(chǎn)生與活性是直接導(dǎo)致抗體反應(yīng)高低的重要原因之一。Zhang等（2015）指出，中華鱉IL-6沒(méi)有信號(hào)肽，在細(xì)菌攻毒 24 h，腸道IL-6的mRNA表達(dá)量顯著高于對(duì)照組，提示IL-6在腸道內(nèi)發(fā)揮了免疫功能。徐鎮(zhèn)（2009）指出，免疫球蛋白通常也被稱為抗體，是脊椎動(dòng)物獲得性免疫或特異性免疫的重要組成成分，在抵抗病原入侵以及再感染中具有重要的作用。到目前為止，在爬行動(dòng)物中只報(bào)道了三種免疫球蛋白分子IgM、IgD和IgA。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加該復(fù)方中草藥對(duì)溶菌酶、IgA和IgD沒(méi)有顯著影響。添加3%和5%中草藥組IgM含量顯著低于對(duì)照組，而添加1%中草藥組與對(duì)照組差異不顯著。添加3%中草藥組IL-2顯著低于對(duì)照組，而添加1%和5%中草藥組與對(duì)照組差異不顯著。對(duì)于IL-6，添加3%和5%中草藥組均顯著低于對(duì)照組，而添加1%中草藥組與對(duì)照組差異不顯著。吳瓊等（2017）指出，注射植物凝集素在爬行動(dòng)物中應(yīng)用較多，但注射植物凝集素的結(jié)果作為一項(xiàng)免疫指標(biāo)并不適合中華鱉來(lái)反映其免疫能力的強(qiáng)弱。胡廣洲等（2010）指出，中華鱉天生膽小喜靜，對(duì)于外界環(huán)境變化較為敏感，這也使得中華鱉在養(yǎng)殖過(guò)程中容易處于應(yīng)激狀態(tài)；中華鱉體表和體內(nèi)菌群多樣性較強(qiáng)。由此推測(cè)，該復(fù)方中草藥對(duì)于中華鱉幼鱉整個(gè)機(jī)體的免疫狀態(tài)的作用規(guī)律不明顯，可能主要是通過(guò)影響其體表和體內(nèi)菌群的多樣性，特別是促進(jìn)益生菌的生長(zhǎng)，而益生菌又具有促生長(zhǎng)、增強(qiáng)免疫力和抗應(yīng)激能力等作用 。該復(fù)方中草藥對(duì)于中華鱉幼鱉營(yíng)養(yǎng)免疫及抗氧化功能影響的內(nèi)在分子機(jī)制，特別是對(duì)其細(xì)胞免疫和體液免疫功能作用的內(nèi)在機(jī)制有待深入研究。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加該中草藥可以提高中華鱉幼鱉的抗氧化能力和和幼鱉對(duì)蛋白質(zhì)的利用效率。結(jié)合經(jīng)濟(jì)性原則，該中草藥復(fù)方添加量以3%較為適宜。另外，該中草藥復(fù)方對(duì)于中華鱉幼鱉整個(gè)機(jī)體免疫狀態(tài)的影響規(guī)律不明顯，改善中華鱉的抵抗力的內(nèi)在機(jī)制還有待深入研究。