楊應(yīng)松 楊梅 鐘志來

[摘要]目的 調(diào)查江門市新生兒的G6PD缺乏癥發(fā)病率，分析現(xiàn)有熒光定量法篩查G6PD缺乏癥的可靠性。方法 對(duì)2017年1月～2018年9月出生的73 183例新生兒進(jìn)行G6PD缺乏癥的熒光定量篩查，并對(duì)熒光定量篩查陽性者進(jìn)行召回并采用酶學(xué)或基因檢測(cè)法進(jìn)行二次診斷，并將三種診斷結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果 對(duì)73 183例（男性38 240例，女性34 943例）新生兒進(jìn)行篩查，共有3027例（男性2632例，女性395例）陽性，總體篩查陽性率為4.14%（3027/73 183），男女篩查陽性率分別為6.88%（2632/38 240）、1.13%（395/34 943）。熒光篩查與酶學(xué)檢測(cè)診斷符合率為96.57%（367/380），其中男女符合率分別為98.56%（343/348）、75.00%（24/32）。熒光定量法與基因檢測(cè)診斷的符合率為92.98%（212/228），男女符合率分別為96.23%（153/159）、85.51%（59/69）?；驒z測(cè)與酶活性檢測(cè)診斷的符合率為89.22%（149/167），男女符合率分別100.00%（112/112）、67.27%（37/55）。結(jié)論 我市是G6PD缺乏癥的高發(fā)地區(qū)，目前熒光定量篩查方法能篩查出絕大部分男性患者及女性純合子，但對(duì)女性雜合子敏感性不高。對(duì)篩查陽性的可疑患兒及臨床高度懷疑者，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行酶活性及基因檢測(cè)。

[關(guān)鍵詞]葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥;新生兒篩查;發(fā)生率;符合率

[中圖分類號(hào)] R729? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）6（a）-0138-04

[Abstract] Objective To investigate the incidence of G6PD deficiency in newborns in Jiangmen City， and to analyze the reliability of fluorescence quantitative method for screening G6PD deficiency. Methods Fluorescent quantitative screening of 73183 newborns born from January 2017 to September 2018 for G6PD deficiency was carried out. The patients who were positive for fluorescence quantitative screening were recalled and re-diagnosed by enzyme or gene detection， and the three diagnostic results were compared. Results A total of 73 183 newborns （38 240 males and 34 943 females） were screened， and 3027 cases （2632 males and 395 females） were positive. The overall screening positive rate was 4.14% （3027/73 183）. The positive rates of male and female screening were 6.88% （2632/38 240） and 1.13% （395/34943）， respectively. The coincidence rate between fluorescence screening and enzymatic diagnosis was 96.57% （367/380）， in which the coincident rates of male and female were 98.56% （343/348） and 75.00% （24/32） respectively. The coincidence rate between fluorescence quantitative method and gene detection was 92.98% （212/228）. The coincident rates of male and female were 96.23% （153/159） and 85.51% （59/69）， respectively. The coincidence rate of gene detection and enzyme activity was 89.22% （149/167）， and the coincidence rate of male and female was 100.00% （112/112） and 67.27%（37/55）， respectively. Conclusion Our city is a high incidence area of G6PD deficiency. At present， the fluorescence quantitative screening method can screen most male patients and female homozygotes， but the sensitivity to female heterozygotes is not high. Enzyme activity and gene detection should be carried out at the same time for suspicious children with positive screening and highly suspected clinically.

[Key words] Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency; Newborn screening; Incidence; Coincidence rate

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD）缺乏癥是由于基因突變導(dǎo)致紅細(xì)胞上G6PD酶活性降低，體內(nèi)還原性谷胱甘肽（GSH）不足以保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷[1-2]。G6PD缺乏癥在世界人口的患病率約為4.9%，本病與瘧疾的選擇性有關(guān)，主要分布于非洲、中東、東南亞、中國南方及地中海沿岸。我國G6PD缺乏癥的發(fā)病率為4%～20%，主要分布于廣東、廣西、海南及云南等地[3-4]。目前G6PD主要是檢測(cè)其酶活性，該方法簡便快速，但對(duì)女性雜合子檢出率不高。隨著遺傳學(xué)的快速發(fā)展，基因檢測(cè)的精準(zhǔn)、可靠性為診斷G6PD缺乏癥提供了有力的證據(jù)[5-6]。本研究主要通過對(duì)新生兒G6PD熒光定量篩查與酶學(xué)、基因檢測(cè)相對(duì)比，了解本市發(fā)病率及評(píng)價(jià)現(xiàn)有熒光定量分析法的可靠性。

1資料與方法

1.1一般資料

以江門市新生兒篩查中心2017年1月～2018年9月進(jìn)行G6PD缺乏癥篩查的73 183例新生兒作為研究對(duì)象，其中男38 240例，女34 943例。本研究已經(jīng)相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

73 183例新生兒均先采用熒光定量法進(jìn)行G6PD缺乏癥的篩查，并對(duì)G6PD缺乏癥熒光定量篩查結(jié)果陽性即G6PD<2.5 U/g Hb的新生兒進(jìn)行召回，分別采用G6PD缺乏癥酶學(xué)和G6PD基因熱點(diǎn)變異分析法診斷其酶活性及基因突變。

1.2.1 G6PD熒光定量篩查? 于新生兒出生后2～7 d采集足跟血，制成干血斑（DBS）后送新生兒篩查中心集中檢測(cè)。采用廣州豐華生物工程有限公司的G6PD熒光定量分析法對(duì)干血斑試劑盒進(jìn)行測(cè)定，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)操作說明書進(jìn)行。參考G6PD缺乏癥新生兒篩查診斷和治療專家共識(shí)以G6PD2.5 U/g Hb為切值[7]，對(duì)篩查陽性者采靜脈血進(jìn)行召回。

1.2.2 G6PD缺乏癥酶學(xué)診斷? 召回?zé)晒舛亢Y查結(jié)果為陽性的可疑患兒，采集靜脈血，采用速率法（北京利德曼生物有限公司生產(chǎn)的G6PD定量檢測(cè)試劑盒）或G6PD/6PGD比值法（廣州市米基醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的改良G6PD測(cè)定試劑盒）測(cè)定紅細(xì)胞G6PD酶活性，當(dāng)紅細(xì)胞G6PD<1300 U/L或G6PD/6PGD比值<1.1者視為診斷陽性。

1.2.3 G6PD基因熱點(diǎn)變異分析? 召回?zé)晒舛亢Y查結(jié)果為陽性的可疑患兒，采用廈門致善生物科技公司生產(chǎn)的G6PD基因突變檢測(cè)試劑盒（熒光PCR熔解曲線法），使用上海宏石的SLAN-48P型號(hào)的實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增儀對(duì)12種中國人熱點(diǎn)變異（c.95A>G，c.383T>C，c.392G>T，c.487G>A，c.517T>C，c.592C>T，c.871G>A，c.1004C>A，c.1024C>T，c.1360C>T，c.1376G>T，c.1388G>A）進(jìn)行定性檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)操作和結(jié)果判讀參照說明書進(jìn)行。

1.4觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)江門市新生兒的G6PD缺乏癥的熒光定量篩查結(jié)果情況，并將G6PD缺乏癥的熒光定量法、酶活性檢測(cè)或基因檢測(cè)法進(jìn)行比較，分析現(xiàn)有熒光定量法篩查G6PD缺乏癥的可靠性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，G6PD缺乏癥發(fā)生率采用百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 G6PD缺乏癥熒光定量篩查的總體情況分析

進(jìn)行G6PD缺乏癥篩查的73 183例新生兒中，男性38 240例，女性34 943例。以2.5 U/g Hb為陽性值，篩查陽性數(shù)3027例，篩查陽性率為4.14%（3027/73 183），其中男性篩查陽性數(shù)2632例，陽性率為6.88%（2632/38 240）;女性篩查陽性數(shù)395例，陽性率為1.13%（395/34 943）。男性的陽性率明顯高于女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1523，P<0.01）。江門市各區(qū)新生兒的G6PD熒光定量篩查陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.025，P>0.05）（表1）。

2.2 G6PD缺乏癥酶活性確診情況

在熒光定量篩查陽性召回的可疑患兒中，有380例（男性348例，女性32例）采用G6PD缺乏癥酶活性檢測(cè)法進(jìn)行確診，其中367例（男343例，女24例）確診為G6PD缺乏癥，13例（男5例，女8例）G6PD酶活性在正常參考值范圍。熒光篩查與酶學(xué)檢測(cè)診斷的符合率為96.57%（367/380），其中男性為98.56%（343/348），女性為75.00%（24/32）。

2.3 G6PD基因診斷分析

在熒光定量篩查陽性召回的可疑患兒中，有228例（男159例，女69例）采用基因熱點(diǎn)突變檢測(cè)法進(jìn)行確診，其中212例（男153例，女59例）確診為G6PD缺乏癥，總體符合率92.98%（212/228）。男性患兒中有153例檢出熱點(diǎn)突變，與熒光定量方法診斷符合率為96.23%（153/159）;女性患兒中有59例檢出熱點(diǎn)突變，與熒光定量篩查方法診斷符合率為85.51%（59/69）。

2.4 基因突變及酶活性同時(shí)診斷分析

在熒光定量篩查陽性召回的可疑患兒中，共有167例（男性112例，女性55例）同時(shí)檢測(cè)了基因突變及酶活性?；驒z測(cè)與酶活性符合率為89.22%（149/167），男性基因與酶活性的診斷符合率為100.00%（112/112），女性基因與酶活性符合率為67.27%（37/55）。55例女性基因檢測(cè)與酶活性檢測(cè)對(duì)照結(jié)果如表2。

3討論

G6PD是磷酸戊糖途徑中的關(guān)鍵酶之一，參與了調(diào)控體內(nèi)的氧化還原反應(yīng)，與人體最重要的還原性物質(zhì)還原型輔酶Ⅱ的產(chǎn)生有關(guān)。當(dāng)該基因發(fā)生致病性突變時(shí)，G6PD活性降低，GSH產(chǎn)生減少，在某些誘因（如蠶豆、外源性氧化物等）作用下，由于紅細(xì)胞GSH生成不足，難以抵抗氧化損傷，血紅蛋白變性形成變性珠蛋白小體，使紅細(xì)胞可塑性降低、細(xì)胞膜變硬導(dǎo)致溶血。其在臨床上常表現(xiàn)為急性溶血性貧血和高膽紅素血癥，嚴(yán)重時(shí)可有呼吸急速、心臟衰竭、休克等癥狀，在新生兒期容易導(dǎo)致核黃疸[8]。

該基因定位于Xq28，由13個(gè)外顯子和12個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成，編碼515種氨基酸。男性只有1條X染色體，故當(dāng)其突變時(shí)多表現(xiàn)為酶活性顯著缺乏;女性有2條X染色體，故存在純合缺失及雜合缺失。對(duì)于女性雜合者，在胚胎早期細(xì)胞中兩條X染色體中的一條處于失活狀態(tài)，且失活是隨機(jī)性的;一個(gè)細(xì)胞中某條X失活細(xì)胞，由其分裂產(chǎn)生的子細(xì)胞具有同一X染色體失活[9]。雜合子體內(nèi)其紅細(xì)胞分為兩群，G6PD活性正常及G6PD活性缺乏，而非在紅細(xì)胞內(nèi)平均分配。由于隨機(jī)性失活，理論上正常細(xì)胞與酶缺乏細(xì)胞應(yīng)該是1︰1的比例，但在不同的個(gè)體中隨機(jī)失活導(dǎo)致其比例不同，因此女性雜合子的表型可以是正常到顯著缺乏。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，G6PD缺乏癥目前在全球發(fā)病率達(dá)4.9%，各地發(fā)病率不一，中東及非洲個(gè)別地區(qū)發(fā)病率達(dá)15%～25%[10]，我國高發(fā)地區(qū)主要分布在廣東、廣西、海南等省份。有研究報(bào)道，廣東省的發(fā)病率為3.1%～16.1%，各地所報(bào)道的發(fā)病率不一，廣州、深圳、中山、順德的G6PD缺乏癥發(fā)病率分別為4.2%、2.3%、4.2%、4.0%[11]。本研究中，江門市新生兒G6PD缺乏癥熒光定量篩查陽性率為4.14%。江門市G6PD缺乏癥的發(fā)病率與廣州、中山、順德等地區(qū)相比無明顯差異，深圳外來人口密集，降低了發(fā)病率。

在不同性別新生兒G6PD檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，酶學(xué)檢測(cè)與熒光定量篩查的男女符合率分別為98.56%及75.00%;基因檢測(cè)與熒光定量篩查的男女符合率為96.23%及85.51%;酶學(xué)與基因檢測(cè)的男女符合率分別為100.00%及67.27%，結(jié)果顯示酶學(xué)、基因檢測(cè)與新生兒G6PD熒光定量篩查的符合率均在95.00%以上，因此通過新生兒熒光定量篩查能檢測(cè)出絕大部分男性患兒。對(duì)于女性患兒，由于基因的不完全顯性，女性雜合子表型范圍大，通過G6PD熒光定量篩查方法及酶學(xué)檢測(cè)僅能檢測(cè)出女性純合子及部分雜合子，因此需通過基因檢測(cè)來明確診斷。目前大部分實(shí)驗(yàn)室都是針對(duì)我國常見的突變熱點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)酶活性異?；驘晒舛亢Y查臨床高度懷疑陽性而基因熱點(diǎn)突變?yōu)殛幮詴r(shí)，應(yīng)進(jìn)行全面的基因測(cè)序，以明確診斷[12]。我實(shí)驗(yàn)室因條件不足，故未對(duì)1例酶活性陽性而基因熱點(diǎn)突變陰性的女性患兒進(jìn)行測(cè)序。G6PD酶學(xué)檢測(cè)快速、簡便，可直觀反映G6PD缺乏癥程度，但對(duì)女性雜合子敏感度不高[13]?；蛟\斷是確診G6PD缺乏癥的一個(gè)可靠性高的方法，但成本高、要求嚴(yán)格，因此，建議有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用酶活性與基因檢測(cè)聯(lián)合分析，避免造成假陰性，這符合目前關(guān)于G6PD缺乏癥的診治共識(shí)[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，通過新生兒G6PD缺乏癥的熒光定量篩查可篩查出絕大部分男性患兒，而女性患兒的敏感性和符合率較低，因此可適當(dāng)調(diào)高女性G6PD缺乏癥診斷的切值[15]。G6PD缺乏癥屬于預(yù)防發(fā)作性疾病，目前無根治辦法，本病最大的危害在于可造成新生兒核黃疸，未發(fā)作時(shí)無需特殊治療，當(dāng)發(fā)生溶血時(shí)，應(yīng)去除誘因?qū)ΠY治療，因此在本市轄區(qū)內(nèi)積極開展G6PD篩查、宣教，對(duì)確認(rèn)患兒發(fā)放攜帶卡，指導(dǎo)監(jiān)護(hù)人平時(shí)注意事項(xiàng)，避免因本病導(dǎo)致新生兒智力低下甚至危及生命，減輕因疾病給家庭帶來的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

綜上所述，我市是G6PD缺乏癥的高發(fā)地區(qū)，應(yīng)在本市轄區(qū)內(nèi)積極開展G6PD篩查，目前熒光定量篩查方法能篩查出絕大部分男性患者及女性純合子，但對(duì)女性雜合子敏感性不高。對(duì)篩查陽性的可疑患兒及臨床高度懷疑者，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行酶活性及基因檢測(cè)。

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（收稿日期：2019-01-17? 本文編輯：祁海文）