屈 睿，胡紅心，朱紅勝

(蘇州市立醫(yī)院檢驗科,江蘇蘇州 215000)

目前乳腺癌早期篩查和輔助診斷最具特異性的血清學生物標志物為糖鏈抗原153(CA153)，但僅30%-50%的乳腺癌患者CA153水平出現(xiàn)明顯升高，而且結(jié)腸癌、肺癌、子宮頸癌和胰腺癌等疾病的患者也可出現(xiàn)CA153水平的升高，故CA153在乳腺癌的輔助診斷應用中具有一定的局限性[1]。乳腺癌臨床治療中亟待解決的問題為早期診斷困難和術(shù)后易復發(fā)轉(zhuǎn)移[2]。因此，尋找預測乳腺癌發(fā)病的血清學標記物成為提高乳腺癌早期診斷率和尋找臨床分子治療靶點的研究熱點。有大量研究表明表皮生長因子受體(EGFR)與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，是乳腺癌早期診斷、預后評估和分子治療靶點[3-4]。血管生成素樣蛋白-2(ANGPTL-2)是類似于血管生成素的糖蛋白，有研究表明其與癌癥存在密切相關(guān)性，可作為癌癥的預后或者預測性生物標志物以及極有可能作為癌癥治療的新靶點[5]。目前，國內(nèi)外關(guān)于ANGPTL-2對乳腺癌患者的臨床價值研究報道較少，故本研究擬通過檢測乳腺癌患者EGFR和ANGPTL-2水平的變化，探討這兩項指標在乳腺癌診斷中的價值及相關(guān)性，以期為乳腺癌的輔助診斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2017年10月至2018年10月本院經(jīng)組織病理學確診為初診乳腺癌的患者120例納入研究并作為乳腺癌組，年齡25～62歲，平均年齡(35.75±7.61)歲，其中浸潤性導管癌87例，浸潤性小葉癌8例，導管內(nèi)原位癌25例。根據(jù)乳腺癌TNM分期(第7版)[6]進行臨床分期，Ⅰ期患者12例，Ⅱ期患者55例，Ⅲ期患者53例。選取同時期本院收治的可手術(shù)切除治療的乳腺良性病變患者120例作為良性組，年齡24～61歲，平均年齡(36.11±6.93)歲，其中導管內(nèi)乳頭狀瘤37例，乳腺纖維腺瘤83例。另外，選取同期于本院進行健康體檢的健康女性80例作為對照組，年齡23～63歲，平均年齡(34.81±7.52)歲。3組人群年齡、基礎(chǔ)疾病等一般資料方面具有可比性(P>0.05)。所有納入研究者知情且愿意參與本研究，簽署知情同意書。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會知情并審核批準。

1.2納入與排除標準 乳腺癌組和良性組納入標準：(1)所有患者均為初診并經(jīng)病理組織學確診；(2)所有患者術(shù)前均未進行藥物治療、化療或放療等；(3)所有患者的臨床病歷資料完整。排除標準：(1)患有結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌等其他惡性腫瘤和其他腫瘤并發(fā)乳腺轉(zhuǎn)移者；(2)心、肺、肝、腎功能、血脂、血糖異常者；(3)患有自身免疫性疾病者、甲狀腺疾病和妊娠者；(4)病理資料和病歷資料不完善者。

1.3方法 (1)收集患者的臨床及病理資料，分析統(tǒng)計患者的臨床和病理特征。(2)所有受試者均于治療前或者體檢當日清晨空腹采集靜脈血5 mL，置于不含抗凝劑的紅帽真空采血管中，3 000 r/min離心10 min后，取上清進行各指標檢測。EGFR檢測采用ELISA法，試劑盒購于美國R&D公司，操作嚴格按照試劑盒說明書進行。ANGPTL-2檢測采用化學發(fā)光法，儀器使用德國羅氏Cobas e601全自動電化學發(fā)光分析儀及其配套試劑進行。

2 結(jié) 果

2.13組患者EGFR和ANGPTL-2水平的比較 3組患者血清EGFR和ANGPTL-2平均水平由高到低均依次為乳腺癌組、良性組、對照組，3組間血清ANGPTL-2水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，良性組和乳腺癌組血清EGFR水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 3組患者EGFR和ANGPTL-2水平的比較

注：與對照組比較,*P<0.05；與良性組比較,△P<0.05

2.2乳腺癌患者EGFR和ANGPTL-2水平與臨床病理特征的關(guān)系 腫瘤直徑≥5 cm患者血清ANGPTL-2水平明顯高于腫瘤直徑<5 cm的患者(P<0.05)，而EGFR水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；血清EGFR和ANGPTL-2水平隨著TNM分期的增加而呈升高趨勢，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；腫瘤有轉(zhuǎn)移患者的血清EGFR和ANGPTL-2水平顯著高于腫瘤無轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，見表2。

表2 乳腺癌患者EGFR和ANGPTL-2水平與臨床病理特征的關(guān)系

注：與腫瘤直徑<5 cm比較,*P<0.05；，與TNMⅠ期比較,△P<0.05；與TNM分期Ⅱ期比較,▲P<0.05；與腫瘤無轉(zhuǎn)移組比較,#P<0.05

2.3血清EGFR和ANGPTL-2水平對乳腺癌的診斷價值分析 繪制ROC曲線分析得出血清EGFR、ANGPTL-2以及二者聯(lián)合檢測對乳腺癌診斷的曲線下面積(AUC)分別為0.841、0.897、0.936，敏感度分別為：85.6%、80.2%、82.3%，特異度分別為62.5%、85.0%、90.2%，見圖1。

圖1 血清EGFR、ANGPTL-2以及二者聯(lián)合檢測對乳腺癌診斷的ROC曲線

2.4血清EGFR和ANGPTL-2水平在乳腺癌患者中的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析顯示，乳腺癌患者血清EGFR和ANGPTL-2水平呈正相關(guān)(r=0.52，P<0.001)，見圖2。

圖2 相關(guān)性分析

3 討 論

乳腺癌是一種發(fā)生發(fā)展機制涉及多種因素的高度異質(zhì)性惡性腫瘤，是世界范圍內(nèi)最常見的女性癌癥，也是女性癌癥死亡的最主要原因[7]。隨著人口老齡化、環(huán)境的變化和診斷技術(shù)的改進，乳腺癌的發(fā)病率近年來呈升高趨勢，發(fā)病人群也呈年輕化，但其發(fā)病早期癥狀和體征不典型，易誤診和漏診[8]。故尋求新的檢測指標用于乳腺癌的早期診斷和病情判斷有著重要意義。

腫瘤細胞或者腫瘤微環(huán)境的細胞分泌因子表達的改變是癌癥發(fā)生和進展的關(guān)鍵事件。有研究報道，ANGPTL蛋白家族成員在細胞癌變和轉(zhuǎn)移發(fā)展等不同階段通過自分泌或者旁分泌等形式進行活性調(diào)節(jié)[9]。ENDO等[10]發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移性乳腺癌者血清ANGPTL-2水平顯著高于健康人或?qū)Ч茉话┗蚍寝D(zhuǎn)移性浸潤性導管癌患者，雌激素受體和孕激素受體陰性患者血清ANGPTL-2水平可反映組織學分級，尤其是“三陰”患者。而且，ENDO等[11]還檢測了攜帶MDA-MB231細胞的體內(nèi)乳腺癌移植免疫缺陷雌性小鼠血清ANGPTL-2水平的變化，結(jié)果顯示乳腺癌細胞分泌ANGPTL-2的水平隨著細胞增殖和腫瘤進展而增加，驗證了乳腺癌患者血清ANGPTL-2水平的變化趨勢。MASUDA等[12]發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞源性ANGPTL-2可能通過上調(diào)腫瘤細胞CXCR4的表達來增強乳腺癌細胞對CXCL12信號轉(zhuǎn)導的應答，從而增加骨轉(zhuǎn)移，提示這可能為治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌提供了新的治療方法。本課題組發(fā)現(xiàn)乳腺癌組患者血清ANGPTL-2水平明顯高于良性組和對照組，腫瘤直徑≥5 cm患者血清ANGPTL-2水平明顯高于腫瘤直徑<5 cm患者，血清ANGPTL-2水平隨著TNM分期的增加而呈升高趨勢，腫瘤有轉(zhuǎn)移患者的血清ANGPTL-2水平顯著高于腫瘤無轉(zhuǎn)移患者。這與李峻[13]等的研究結(jié)果相符合，提示血清ANGPTL-2水平與乳腺癌的臨床病理特征存在相關(guān)性，可作為判斷乳腺癌腫瘤大小、臨床分期和轉(zhuǎn)移的潛在標志物，為乳腺癌的臨床治療效果評估和預后判斷提供實驗室依據(jù)。

EGFR為單鏈跨膜糖蛋白，可通過MAPK/EPK、PI3K-Akt和PLC-IP3/DAG等信號通路而產(chǎn)生Ras、PARP和Raf等細胞效應因子而參與調(diào)控乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移和治療[14]。張功學等[15]的研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌癌組織中EGFR陽性表達和組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，組織學分級越高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者,其EGFR陽性表達率越高。本研究結(jié)果顯示乳腺癌組患者血清EGFR水平明顯高于良性組和對照組，且其水平隨著TNM分期的增加而呈升高趨勢，腫瘤有轉(zhuǎn)移患者的血清EGFR水平顯著高于腫瘤無轉(zhuǎn)移患者。這表明血清EGFR水平與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展存在密切相關(guān)性。

目前尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)血清EGFR和ANGPTL-2在乳腺癌患者中的相關(guān)性以及二者聯(lián)合對乳腺癌的診斷價值的文獻報道。本研究探討了血清EGFR和ANGPTL-2聯(lián)合檢測對乳腺癌的診斷價值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清EGFR和ANGPTL-2對乳腺癌的診斷均具有較高的診斷價值，ANGPTL-2對乳腺癌的單獨診斷效價高于EGFR，二者聯(lián)合可明顯提高診斷效能。本研究還首次報道了乳腺癌患者血清EGFR和ANGPTL-2水平呈正相關(guān)性，這表明二者間具有某種關(guān)聯(lián)或者分子機制的聯(lián)系。

本研究雖然檢測了血清EGFR和ANGPTL-2在乳腺癌患者中的變化及其與臨床病理特征的關(guān)系，并探討了其單獨及聯(lián)合對乳腺癌的診斷價值，以及分析了二者間的關(guān)系，但仍存在不足之處，如存在樣本量較少，未進行組織水平含量檢測以及進行二者間相互關(guān)聯(lián)的分子機制研究，這些將在后續(xù)的研究中逐一進行完善。

4 結(jié) 論

乳腺癌患者血清EGFR和ANGPTL-2水平升高，與臨床病理特征存在密切聯(lián)系，且二者間呈正相關(guān)性，對乳腺癌具有較高的診斷價值，聯(lián)合檢測可提高對乳腺癌的診斷效能。