涂嬌　劉枝華　胡雄　鄧佩儀　陳江鳳　邵儉

摘 要：為探究不同脅迫條件下?；撬幔ˋ）、維生素C（B）、葡萄糖（C）、潑灑姜-芳草（D）、應(yīng)激寶（E）和漁精元（F）6種藥品對羅非魚存活率及行為的影響。本研究以羅非魚（17.03±5.21）g為實驗對象，觀測其在缺氧、二氧化氯及氨氮脅迫條件下6種藥品對羅非魚的存活情況及影響。結(jié)果表明：在缺氧脅迫下，144 min后E組的羅非魚存活率最高為33.33%，其它各組存活率均為0%;360 min后各組的存活率均為0%;在二氧化氯的脅迫下，B組與其它各組差異顯著（P<0.05），75 min后B組的存活率最高（100%），其它組存活率均為0%;在氨氮的脅迫下，F(xiàn)組與各組差異顯著（P<0.05），360 min后F組的存活率（93.33%）最高。

關(guān)鍵詞：缺氧;二氧化氯;氨氮;存活率;行為變化

中圖分類號：S965.1

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1008-0457（2019）05-0075-05 國際DOI編碼：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2019.05.013

Effects of 6 Drugs on Livability of Tilapia under Different Stress Conditions

TU Jiao1，LIU Zhi-hua1，HU Xiong2，DENG Pei-yi2，CHEN Jiang-feng1，SHAO Jian1*

（1. College of animal science，GuiZhou University， Guiyang， GuiZhou 550025，China;2.Foshan Live Treasure Source Bio Technology Co.LTD， Foshan， GuangDong 528300，China）

Abstract：To explore the influence of 6 kinds of drugs including taurine（A）， Vitamin C （B）， glucose （C）， Posajiang-Fangcao（D）， Yingjibao（E） and Yujingyuan （F） on survival rate and behavior of tilapia under different stress. Tilapia （17.03±5.21） g was used in this study， and the survival and behavioral responses of tilapia to six drugs were observed under hypoxia， chlorine dioxide and ammonia nitrogen stress， respectively. The results showed that the highest survival rate of tilapia was 33.33% in group E while 0% in other groups after 144 min of exposure to hypoxia stress; and 0% in each group after 360 min of exposure. Under the stress of chlorine dioxide， group B was significantly different from the other groups （P<0.05）， and the survival rate of group B was the highest （100%） while other groups was 0% after 75min of exposure. Under the stress of ammonia nitrogen， the difference between group F and each group was significant （P<0.05）， and the survival rate of group F was the highest （93.33%） after 360min of exposure.

Key words：hypoxia; chlorine dioxide; ammonia nitrogen; survival rate; behavior change

羅非魚（Tilapia），是一種熱帶淡水中小型魚類，原產(chǎn)于非洲，為雜食性動物，通常隨水溫變化或魚體大小改變棲息水層，適應(yīng)能力和繁殖能力較強[1]，是我國主要養(yǎng)殖魚類。因其具有生長速度快、味道鮮美等特點，深受廣大消費者的喜愛[2]，羅非魚現(xiàn)已成為我國最重要的出口淡水養(yǎng)殖對象之一[3]。近年來，隨著羅非魚養(yǎng)殖規(guī)模的逐漸擴大，養(yǎng)殖者為提高產(chǎn)量，增加放養(yǎng)密度和投餌量，導(dǎo)致殘餌糞便蓄積，水質(zhì)惡化，同時運輸過程中的各種操作等環(huán)節(jié)，這些都會使魚類產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng);而應(yīng)激可使魚類發(fā)生生理和行為改變，過度應(yīng)激不僅影響魚類生產(chǎn)性能，而且會誘發(fā)多種疾病，甚至死亡[4]。有研究表明，在魚類養(yǎng)殖生產(chǎn)和運輸過程中通過加入化學(xué)藥物增氧劑、降低溫度等方法可以有效減少應(yīng)激反應(yīng)，提高存活率和養(yǎng)殖效益[5]。在魚類運輸過程中，適量的苯唑卡因有助于維持魚類生化指標(biāo)的穩(wěn)定，可以使魚體降低應(yīng)激反應(yīng)強度，對運輸應(yīng)激反應(yīng)有很好的緩解作用[6]。陳靜怡等[7]研究發(fā)現(xiàn)，低溫可緩解低氧對魚體造成的氧化損傷和肝功能損傷，以此提高魚類應(yīng)對低氧脅迫的能力。此外，魚類養(yǎng)殖產(chǎn)品的安全性問題也成為人們?nèi)找骊P(guān)注的重點，而選用無公害藥品投入養(yǎng)殖生產(chǎn)及運輸環(huán)節(jié)是未來的發(fā)展趨勢。本研究選用6種藥品開展試驗，觀測不同藥品在同一濃度下對不同脅迫條件下羅非魚應(yīng)激反應(yīng)情況，旨在為羅非魚養(yǎng)殖生產(chǎn)中減少應(yīng)激反應(yīng)對策，進一步為提高養(yǎng)殖產(chǎn)品質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

實驗用魚為羅非魚，平均體重（17.03±5.21）g。實驗前在塑料桶中暫養(yǎng)24 h，選擇健康、體質(zhì)量均勻的個體在塑料瓶（1 L、5 L）中進行實驗。實驗周期為360 min。

6種實驗藥品分別為：牛磺酸（A）、維生素C（B）、葡萄糖（C）、潑灑姜-芳草（D）、應(yīng)激寶（E）、漁精元（F），主要成分及產(chǎn)地見表1。

1.2 實驗方法

1.2.1 缺氧應(yīng)激實驗

向塑料瓶中注入1 L經(jīng)曝氣處理的蒸餾水，再加入20 mg/L的藥品，每種藥品設(shè)置3個平行，并設(shè)1個對照（CK），然后隨機放入5尾羅非魚并將瓶口擰緊隔絕外界空氣，實驗開始后連續(xù)360 min觀測不同組別羅非魚的存活率及行為反應(yīng)情況。

1.2.2 二氧化氯應(yīng)激實驗

向5 L塑料瓶中注入濃度約為150 mg/L的二氧化氯溶液（用池塘水為基礎(chǔ)水體進行配制），再加入20 mg/L的藥品，每種藥品設(shè)置3個平行，并設(shè)1個對照，然后隨機放入5尾羅非魚，試驗開始后連續(xù)360 min觀測不同組別羅非魚的存活率及行為反應(yīng)情況。

1.2.3 氨氮應(yīng)激實驗

向5 L塑料瓶中注入濃度約為80 mg/L的NH4CL溶液（用池塘水為基礎(chǔ)水體進行配制），再加入20 mg/L的藥品，混合均勻。每種藥品設(shè)置3個平行，并設(shè)置1個對照，然后隨機放入5尾羅非魚，實驗開始后連續(xù)360 min觀測不同組別羅非魚的存活率及行為反應(yīng)情況。

三種應(yīng)激實驗中，以觀察魚呼吸停止后，即腮蓋停止運動，并用玻璃棒敲擊魚體無任何反應(yīng)作為死亡判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS19.0軟件對所有數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（One-Way ANOVA）和Duncan檢驗法統(tǒng)計分析（P<0.05）。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 三種應(yīng)激實驗中羅非魚的存活率變化

2.1.1 缺氧脅迫下羅非魚存活率

由表2可知，各組之間的差異不明顯，84 min后存活率最高組為F組（86.67%），最低組為D組（53.33%）;104 min后存活率最高組為B組（53.33%），D組全部死亡;124 min后存活率最高組為E組（33.33%），A、C、D、CK組均死亡;144 min后存活率最高組為E組（33.33%），其余各組均死亡;360 min后各組均全死亡。

2.1.2 二氧化氯脅迫下羅非魚存活率 在15 min時，B組與A組差異顯著，兩組均與其它組差異不顯著。在30 min時，B組與E組差異不顯著，與其它各組差異顯著，C組和D組均與A組、F組、CK組差異顯著，與E組差異不顯著，A組的存活率最低，B組存活率最高。在45 min時，B組與各組差異均顯著，B組存活率最高。60 min后B組與C組差異顯著。75 min時，各組無顯著差異，B組的存活率最高（100%），其余各組均死亡（表3）。

2.1.3 氨氮脅迫下羅非魚存活率 在30 min時，A組與E組差異不顯著

，A組和E組均與其它各組差異顯著;180 min后，B組與F組差異不顯著，B組和F組與其它各組差異顯著;300 min后F組與各組差異顯著

，存活率最高，E組存活率最低為0;360 min后，B組與各組差異顯著

，F(xiàn)組與各組差異顯著，F(xiàn)組的存活率（93.33%）在360 min內(nèi)為最高（表4）。

2.2 三種脅迫下羅非魚的行為反應(yīng)

2.2.1 缺氧脅迫下羅非魚的行為反應(yīng)

實驗開始時羅非魚游動正常，隨后逐漸游動緩慢，魚體失去平衡，部分羅非魚集中于瓶口快速呼吸，個別上下急速竄動，接著出現(xiàn)游動無力的現(xiàn)象，僅有口鰓不斷閉合，最終上浮后，墜入水底，反復(fù)幾次，直到死亡。死亡魚口張開，魚體僵硬，鰓蓋軟化受損，鰭條伸直展開。D組反應(yīng)最劇烈，E組反應(yīng)較其余各組弱。

2.2.2 二氧化氯脅迫下羅非魚的行為反應(yīng)

實驗進行15 min后開始出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，表現(xiàn)為失去平衡，浮頭、沉入水底、上下激烈竄動，反應(yīng)遲鈍，側(cè)躺水底不動，伴有側(cè)游、轉(zhuǎn)圈游動等現(xiàn)象，直接垂直緩落到瓶底，反復(fù)幾次后死亡。A組反應(yīng)最劇烈，B組無明顯反應(yīng)。

2.2.3 氨氮脅迫下羅非魚的行為反應(yīng)

實驗進行30 min后開始出現(xiàn)應(yīng)激現(xiàn)象，表現(xiàn)為上下竄游、水中急速跳躍、轉(zhuǎn)圈，直接游出水面急促呼吸，接著腹部上翻，腹面朝上斜游，活力減弱，反復(fù)數(shù)次后腹面朝上死亡。E組反應(yīng)最劇烈，F(xiàn)組反應(yīng)較其余各組弱。

3 結(jié)論與討論

3.1 缺氧脅迫下對羅非魚行為反應(yīng)及存活率的影響

生產(chǎn)中造成魚類缺氧浮頭的主要原因有養(yǎng)殖過程中放養(yǎng)密度過大、池水過肥、施肥不當(dāng)、水質(zhì)污染、投飼過量、天氣突變等[8]，以及在魚類的運輸中，密閉的箱體和高密度的群體也極易造成魚類缺氧，使魚類出現(xiàn)浮頭，長時間的缺氧會使魚類出現(xiàn)死亡。當(dāng)魚類在受到外界環(huán)境因素的不良刺激后會引發(fā)體內(nèi)的保護屏障，而使魚體內(nèi)產(chǎn)生一系列生理變化，即應(yīng)激反應(yīng)[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，羅非魚在缺氧脅迫下各組中的存活率無顯著差異，在同一缺氧環(huán)境下，E組較其它各組的存活時間長，抗應(yīng)激的能力較強。60 min后羅非魚表現(xiàn)出應(yīng)激反應(yīng)，即游動緩慢、無力，反應(yīng)遲鈍，失去平衡，最后靜臥水底死亡。在同一缺氧環(huán)境脅迫下，D組的反應(yīng)最為強烈，存活率最低，A、B、C、F組次之，E組的反應(yīng)最不強烈。

應(yīng)激寶中的主要成分是免疫多糖，免疫多糖中富含具有免疫功能的β-葡聚糖和功能性的寡糖，β-葡聚糖作為免疫增強劑廣泛應(yīng)用于畜禽與水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)[10]。有研究表明，β-葡聚糖能夠提高齊口裂腹魚腸道分泌性抗體的產(chǎn)生，增強腸道免疫功能，進而提高魚體的抗病、抗應(yīng)激功能[11]。本研究中，應(yīng)激寶的使用增加了羅非魚的非特異性免疫功能，提高了羅非魚的抗缺氧能力，推測藥品應(yīng)激寶對羅非魚在缺氧脅迫下有較好的緩解應(yīng)激作用。

3.2 二氧化氯脅迫下對羅非魚行為反應(yīng)及存活率的影響

二氧化氯是水產(chǎn)養(yǎng)殖中的常用消毒劑，對細(xì)菌、芽孢和真菌等微生物具有很好的殺滅作用，且在低濃度下對水產(chǎn)動物無不良反應(yīng)，同時二氧化氯作為強氧化劑，幾乎可以分解水中所有還原性污染物質(zhì)，如殘剩餌料、排泄物等，極大程度地改善養(yǎng)殖水體[12];但高濃度下會對魚類造成嚴(yán)重的傷害，產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，并致死。本研究發(fā)現(xiàn)，羅非魚在同一質(zhì)量濃度的二氧化氯脅迫下各組之間差異顯著，B組的存活率最高（100%），有較好的抗二氧化氯脅迫能力。當(dāng)水體中二氧化氯濃度為150 mg/L時，羅非魚15 min后即表現(xiàn)出焦躁不安、上下竄動、浮頭、反應(yīng)遲鈍等癥狀，最后呆滯于水底，失去平衡后死亡，這與唐洪玉等[13]研究的二氧化氯對湘云鯽的急性毒性試驗中的中毒癥狀相似。在同一質(zhì)量濃度的二氧化氯溶液中，A組的反應(yīng)最為強烈，死亡率最高，C、D、E、F組的反應(yīng)次之，B組的反應(yīng)最不強烈。

VC，又稱L-抗壞血酸，在動物生長發(fā)育、抗應(yīng)激、免疫等方面均具有促進作用[14];宋學(xué)宏等[15]研究表明，在飼料中添加適量的VC可顯著提高異育銀鯽的免疫力，進而提高魚體的抗病力;李志輝等[16]認(rèn)為在飼料中添加VC可促進錦鯉的生長發(fā)育和增強其機體非特異性免疫能力。本研究中，在360 min后，B組的存活率最高（100%），其它各組均死亡，VC顯著提高了魚體的免疫力，增強了魚體的抗病力和抗應(yīng)激能力，有研究表明，VC還可通過神經(jīng)調(diào)節(jié)因子，調(diào)節(jié)腦部的多巴胺和去甲腎上腺素的水平，從而控制魚類的行為，增強其抗應(yīng)激能力[17]。本研究證明，VC在羅非魚抗二氧化氯脅迫中有較好的緩解應(yīng)激作用。

3.3 氨氮脅迫下對羅非魚行為表現(xiàn)及存活率的影響

本研究結(jié)果表明，羅非魚在同一質(zhì)量濃度的氨氮脅迫下，F(xiàn)組的抗應(yīng)激能力較強，存活率最高。氨氮是養(yǎng)殖和運輸水體中一種常見的毒性物質(zhì)[18]，主要是由餌料的殘留，動物的排泄物等產(chǎn)生的。氨氮對魚類的毒害作用主要歸因于其所包含的非離子氨的毒性[19]，當(dāng)水體中離子氨的濃度較高時，會使魚類發(fā)生氨中毒，出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)。本研究中，羅非魚剛開始表現(xiàn)出上下急速竄游、轉(zhuǎn)圈，后表現(xiàn)為失去平衡，腹部朝上游動，最后側(cè)臥瓶底，腹部朝上死亡，癥狀與樊海平等[20]研究的大刺鰍幼魚在氨氮脅迫下的中毒癥狀相似。在同一質(zhì)量濃度的氨氮溶液中，E組的應(yīng)激反應(yīng)比其它幾組的要強烈，F(xiàn)組的反應(yīng)最不強烈。

漁精元的主要成分是N-氨甲酰谷氨酸（NCG），有研究表明，大菱鲆幼魚中添加適量NCG有助于促進機體內(nèi)源精氨酸合成，提高肌肉中精氨酸的含量，進而促進蛋白質(zhì)合成及提高機體免疫功能[21];NCG還具有修復(fù)腸道，提高魚蝦的抗應(yīng)激能力和免疫力，從而抵抗外界的各種刺激。本研究中，360 min后存活率最高組為F組，漁精元與同濃度的另外5種藥品相比顯著提高了羅非魚的免疫力和抗病能力，對氨氮脅迫有較好的緩解應(yīng)激作用。

參 考 文 獻：

[1] 馬成光.二氧化氯和三氯異氰尿酸對羅非魚的毒性試驗[D].長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013.

[2] 韓春艷，鄭清梅，陳桂丹，等.氨氮脅迫對奧尼羅非魚非特異性免疫的影響[J].南方水產(chǎn)科學(xué)，2014，10（03）：47-52.

[3] 徐 楊.尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）對氨氮和亞硝酸鹽氮脅迫的生理響應(yīng)[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2015.

[4] 劉慧慧，鄒榮婕，劉小靜，等.丁香酚對降低羅非魚捕捉應(yīng)激的作用[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2019，35（08）：141-145.

[5] 王昊龍，徐 弘，安 苗，等.MS-222對雜交鱘幼魚的麻醉效果及模擬運輸試驗[J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報，2016，35（01）：40-44，50.

[6] 杜 浩，危起偉，甘 芳，等.苯唑卡因?qū)γ乐搛堖\輸應(yīng)激的緩解作用研究[J].中國水產(chǎn)科學(xué)，2006（05）：787-793.

[7] 陳靜怡，王曉雯，朱 華，等.不同水溫下低氧脅迫對西伯利亞鱘生理狀態(tài)的影響[J].水產(chǎn)科技情報，2018，45（02）：70-76.

[8] 何紹鵬.池塘養(yǎng)殖魚類浮頭原因及對策[J].科學(xué)養(yǎng)魚，2004（3）：47-47.

[9] Yagi A，Makinoi，Nishioka，et al. Aloe mannan polysaccharides from Aloe arborescence var. nataensis[J].Planta Medica，1977，31 ：18.

[10] 李富東，葉繼丹，王 琨，等.長時間連續(xù)投喂β-葡聚糖對鯉生長性能及非特異性免疫功能的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2009，21（04）：499-505.

[11] 張 遼，溫安祥.β-葡聚糖對齊口裂腹魚生長及免疫功能的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2009，21（05）：688-694.

[12] 許寶紅，肖調(diào)義，符貴紅，等.二氧化氯對錦鯉的急性毒性試驗[J].內(nèi)陸水產(chǎn)，2006（05）：52-54.

[13] 唐洪玉，巢 磊，卓 林.二氧化氯制劑對湘云鯽的急性毒性試驗[J].淡水漁業(yè)，2003（01）：11-12.

[14] 郝甜甜，王麗麗，王際英，等.維生素C對急性低溫脅迫下珍珠龍膽石斑魚HPI軸及生理生化的調(diào)控[J].水產(chǎn)學(xué)報，2017，41（03）：428-437.

[15] 宋學(xué)宏，蔡春芳，潘新法，等.用生長和非特異性免疫力評定異育銀鯽維生素C需要量[J].水產(chǎn)學(xué)報，2002（04）：351-356.

[16] 李志輝，楊志強，李瀟軒，等.維生素C對錦鯉生長性能、非特異性免疫及其組織中維生素C含量的影響[J].漁業(yè)研究，2018，40（05）：386-392.

[17] Johnston W L，MacDonald E，Hilton J W.Relationships between dietary ascorbic acid status and deficiency，weight gain and bain neurotransmitter levels in juvenile rainbow trout，Salmo gairdneri[J].Fish Physiology Biochemistry，1989（6）：353-365.

[18] 李勇男.水中添加維生素C緩解鯉魚運輸應(yīng)激的研究[D].無錫：江南大學(xué)，2016.

[19] 高亞峰，孫洪杰.氨氮對魚類的危害[J].河北漁業(yè)，2014（08）：62-63，67.

[20] 樊海平，薛凌展，陳玉紅，等.氨氮及亞硝酸鹽對大刺鰍幼魚的急性毒性[J].水產(chǎn)學(xué)雜志，2018，31（03）：25-28.

[21] 尚曉迪，陳春秀，賈 磊，等.N-氨甲酰谷氨酸對大菱鲆幼魚營養(yǎng)組成及免疫功能的影響[J].飼料工業(yè)，2017，38（18）：5-9，7.