賈博爽

摘? ?要：國(guó)內(nèi)對(duì)椰棗早期性別鑒定的研究較少，筆者查閱了相關(guān)外文文獻(xiàn)，對(duì)椰棗進(jìn)行了簡(jiǎn)單概述，并對(duì)國(guó)外關(guān)于椰棗早期性別鑒定的方法進(jìn)行了簡(jiǎn)短論述，最后對(duì)未來椰棗早期性別鑒定的研究方向進(jìn)行了展望。

關(guān)鍵詞：椰棗;早期;性別;鑒定

文章編號(hào)： 1005-2690（2019）06-0161-01? ? ? ?中圖分類號(hào)： S665.1? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

椰棗（英文名Date palm ，拉丁學(xué)名Phoenix dactylifera L.），是棕櫚科刺葵屬植物，《本草綱目》稱無漏子，是中東和北非地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)作物。其經(jīng)濟(jì)重要性在于雌株所結(jié)果實(shí)具有較高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，富含果糖、礦物質(zhì)、氨基酸和維生素，自古以來被人們視為良好的滋補(bǔ)營(yíng)養(yǎng)食品。椰棗也可用于許多工業(yè)用途，如木材、家具、繩索、包裝材料[1]等。目前，椰棗在我國(guó)福建、廣西、云南、廣東、海南等地有種植。椰棗是多年生雌雄異株植物，生長(zhǎng)速率緩慢，直到繁殖階段才能辨別雌雄，這個(gè)時(shí)間一般需要5～10年[2]。因此對(duì)早期椰棗進(jìn)行性別鑒定，對(duì)提高土地合理利用率和增加椰棗經(jīng)濟(jì)、種植價(jià)值尤為重要。

1? ?雄性特異序列擴(kuò)增區(qū)標(biāo)記（SCAR）

Kharb Pushpa 和Mitra Charu利用雄性特異性序列特征擴(kuò)增區(qū)（SCAR）標(biāo)記對(duì)椰棗樹進(jìn)行早期性別鑒定[3]，試驗(yàn)中，依次進(jìn)行了DNA的提取與分離、DNA的定性和定量估計(jì)、用SCAR引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增和對(duì)擴(kuò)增得到的DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳的試驗(yàn)步驟。用SCAR引物擴(kuò)增雄性和雌性椰棗基因組DNA所得的電泳圖譜顯示，在雌性和雄性樣本中均發(fā)現(xiàn)了406 bp的擴(kuò)增片段，但354 bp的擴(kuò)增片段僅在雄性樣本中發(fā)現(xiàn)，因此基于此擴(kuò)增模式，椰棗在幼苗期的性別得以預(yù)測(cè)。

2? ?微衛(wèi)星DNA（ISSR）

ISSR（inter-simple sequence repeat）是Zietkeiwitcz等于1994年發(fā)展起來的一種基于微衛(wèi)星基礎(chǔ)上的分子標(biāo)記。Abdulhafed A. Al-Ameri，F(xiàn)ahad Al-Qurainy，Abdel-Rhman Z. Gaafar，Salim Khan和 M. Nadeem利用ISSR標(biāo)記對(duì)椰棗的性別進(jìn)行了分子鑒定，試驗(yàn)中，從雌雄椰棗樹植物中共篩選出200個(gè)ISSR引物，其中只有2個(gè)引物與性別有關(guān)，分別為IS_A02和IS_A71，其中引物IS_A02僅在所有雌性植株中產(chǎn)生了獨(dú)特的390 bp的條帶，與此相反，引物IS_A71僅在所有雄性植株中產(chǎn)生了清晰的380 bp的條帶。這些特定片段被切除、純化和測(cè)序，可進(jìn)一步用于椰棗的早期性別鑒定。

3? ?熒光原位雜交（FISH）

近年來，熒光原位雜交技術(shù)已經(jīng)成為直接測(cè)定基因組特定DNA片段的強(qiáng)大而有力工具，其使得核酸探針在靶染色體、細(xì)胞核、細(xì)胞和組織中清晰可見。Mohamed A.M. Atia，Sami S. Adawy和 Hanaiya A. El-Itriby研究基于熒光原位雜交的椰棗性別鑒定，即利用熒光原位雜交技術(shù)定位45S and 5S rDNA標(biāo)記在椰棗染色體上的位置，以此來鑒別椰棗樹的性別。

Jamal S.M. Sabir等人探討了ISSR和AFLP分子標(biāo)記檢測(cè)沙特阿拉伯10個(gè)椰棗品種的特性，其標(biāo)記確實(shí)提供了足夠的變異來識(shí)別沙特阿拉伯的椰棗，產(chǎn)生的一些AFLP標(biāo)記可以用于今后椰棗育種計(jì)劃。Atia A. M. Mohamed和Adawy S. Sami采用了一種有效的3個(gè)新基因靶向標(biāo)記方法（SCoT、CDDP and ITAP）作為AFLP的補(bǔ)充，試圖開發(fā)一種新的基于性別特異性PCR的標(biāo)記物，有助于埃及椰棗的早期性別鑒定[4]。Eman K Al-Dous等人研究椰棗的從頭基因組測(cè)序和比較基因組測(cè)序，確立了一個(gè)與性別相關(guān)的基因組區(qū)域，并發(fā)現(xiàn)了椰棗采用XY性別遺傳系統(tǒng)的證據(jù)。

綜上所述，椰棗是中東和北非最重要的植物，近10年來研究的性別特異標(biāo)記往往只適用于某一或某些品種，目前尚未有適用于大多數(shù)椰棗品種性別鑒定的分子標(biāo)記方法。不久的將來，結(jié)合已有的分子標(biāo)記方法和相應(yīng)手段研究一種適用于大多數(shù)椰棗品種性別鑒定的分子標(biāo)記，將對(duì)椰棗育種工作產(chǎn)生重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[ 1 ] Jamal S.M. Sabir，Salah Abo-Aba，Sameera Bafeel，et al. Char-acterization of ten date palm （ Phoenix dactylifera L.） cultivars from Saudi Arabia using AFLP and ISSR markers[J]. Comptes rendus - Biologies，2013（11）：6-18.

[ 2 ] Al-Ameri Abdulhafed A，Al-Qurainy Fahad，Gaafar Abdel-Rhman Z，et al. Molecular Identification of Sex in Phoenix dactylifera Using Inter Simple Sequence Repeat Markers[J]. BioMed research international，2016（6）.

[ 3 ] Kharb Pushpa，Mitra Charu. Early Sex Identification in Date Palm by Male-Specific Sequence-Characterized Amplified Region （SCAR）Markers[J]. Methods in molecular biology （Clifton，N.J.），2017（7）：199-207.

[ 4 ] Atia Mohamed A M，Adawy Sami S，El-Itriby Hanaiya A. Date Palm Sex Differentiation Based on Fluorescence In Situ Hybridiza-tion （FISH）[J]. Methods in molecular biol-ogy （Clifton， N.J.），2017（5）：245-246.

（收稿日期：2019-05-15）