潰瘍性結(jié)腸炎(UC)易復(fù)發(fā)，若治療后腸黏膜愈合則可降低住院率和手術(shù)相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。目前，臨床常通過(guò)評(píng)估腸道炎性反應(yīng)來(lái)判斷腸黏膜的愈合狀況，但存在一定的不足。UC活動(dòng)指數(shù)、Mayo評(píng)分及Truelove-Witts分級(jí)等臨床評(píng)分可反映UC患者的主觀癥狀和總體幸福感，此外，部分緩解期UC患者仍可能存在持續(xù)的黏膜炎性反應(yīng)[3]。部分血清學(xué)標(biāo)志物反映的是全身性的炎性反應(yīng)狀態(tài)，對(duì)腸道炎性反應(yīng)狀態(tài)的判斷缺乏特異性[4]。腸鏡是判斷UC患者腸道黏膜狀況的金標(biāo)準(zhǔn)[5]，但其屬于侵入性檢查，耗時(shí)較長(zhǎng)且不能實(shí)時(shí)評(píng)估UC患者的黏膜病變情況[6]。

UC相關(guān)黏膜發(fā)育異常(UC-DYS)是UC患者的遠(yuǎn)期并發(fā)癥，隨著UC患者的病程延長(zhǎng)，UC-DYS的發(fā)病率逐漸升高。目前臨床常用普通白光內(nèi)鏡檢查UC患者的黏膜病變情況，容易忽視多灶性損傷，致使UC-DYS的篩查率較低，隨著UC-DYS患者病程延長(zhǎng)易進(jìn)展為UC相關(guān)結(jié)直腸癌。微RNA(miRNA)是一類由20～25個(gè)核苷酸組成的非編碼RNA，主要負(fù)責(zé)調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移及凋亡等，參與機(jī)體多種生理活動(dòng)[7-8]。近年來(lái)有研究顯示，miR-200b-3p在UC-DYS組織中高表達(dá)，但并未闡明miR-200b-3p與UC內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)及嚴(yán)重程度的關(guān)系[9]。本研究通過(guò)比較UC患者與健康者血清miR-200b-3p的相對(duì)表達(dá)量，以期闡明miR-200b-3p與UC內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)、嚴(yán)重程度及UC-DYS的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年8月至2018年9月監(jiān)利縣人民醫(yī)院收治的92例UC患者(UC組)作為研究對(duì)象。根據(jù)《炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見(jiàn)(2012年·廣州)》[10]進(jìn)行UC診斷，并經(jīng)內(nèi)鏡及組織病理學(xué)檢查確診。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡18～70歲；(2)臨床資料完整；(3)簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并嚴(yán)重感染；(2)合并腫瘤及自身免疫性疾病；(3)嚴(yán)重肝、腎功能不全；(4)服用非甾體抗炎藥物。另?yè)?6例同期健康體檢者(對(duì)照組)及44例經(jīng)病理活組織檢查確診的UC-DYS患者(UC-DYS組)作為對(duì)照。UC組男性48例，女性44例，平均年齡(45.22±9.74)歲；內(nèi)鏡下緩解期患者35例，內(nèi)鏡下活動(dòng)期患者57例，其中輕、中度患者37例，重度患者20例。對(duì)照組男性22例，女性14例，平均年齡(46.07±9.16)歲。UC-DYS組男性25例，女性19例，平均年齡(47.30±10.28)歲；37例(84.09%)低度異型增生，7例(15.91%)高度異型增生。3組受試者在性別(χ2=0.896，P=0.639)、年齡(F=0.680，P=0.508)方面的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 信息收集 收集受試者的性別、年齡、內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)、疾病嚴(yán)重程度等信息。

1.2.2 內(nèi)鏡下活動(dòng)度分級(jí)及潰瘍性結(jié)腸炎內(nèi)鏡下嚴(yán)重度指數(shù) 采用潰瘍性結(jié)腸炎內(nèi)鏡下嚴(yán)重度指數(shù)(UCEIS評(píng)分)對(duì)UC患者受累腸段病變嚴(yán)重處進(jìn)行評(píng)分，從血管紋理、出血情況、糜爛和潰瘍這3個(gè)方面對(duì)受累腸段進(jìn)行評(píng)估。血管紋理評(píng)分范圍為0～2分，出血情況為0～3分，糜爛和潰瘍?yōu)?～3分，分?jǐn)?shù)越高代表越嚴(yán)重。內(nèi)鏡下緩解期UC患者的UCEIS評(píng)分為0～1分，0分為腸鏡下未見(jiàn)異常，表示黏膜愈合；1分為鏡下炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，表示黏膜病變。內(nèi)鏡下活動(dòng)期UC患者的UCEIS評(píng)分為2～8分，其中輕、中度患者的UCEIS評(píng)分為2～6分，重度患者的UCEIS評(píng)分為7～8分[11]。

1.2.3 RT-qPCR法檢測(cè)血清miR-200b-3p的相對(duì)表達(dá)量 抽取受試者肘靜脈血10 mL，3 500 r/min離心15 min，提取血清至EP管中，低溫環(huán)境下保存待檢。采用miRNAesy Kit試劑盒(購(gòu)自英國(guó)Qiagen公司)提取總RNA，若OD260/280范圍在1.75～1.95之間，則進(jìn)行后續(xù)操作。將2 μg總RNA置于逆轉(zhuǎn)錄試劑盒中合成cDNA。取cDNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件為90 ℃ 15 min預(yù)變性；95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 20 s，共40個(gè)循環(huán)?！鳌鰿t=(Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因)實(shí)驗(yàn)組-(Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因)對(duì)照組，采用2-△△Ct表示miR-200b-3p的相對(duì)表達(dá)量。引物序列見(jiàn)表1。

表1 引物序列

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 3組的血清miR-200b-3p表達(dá)

對(duì)照組、UC組和UC-DYS組血清miR-200b-3p的相對(duì)表達(dá)量分別為1.24±0.40、3.49±1.02和4.80±0.91，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。UC組的血清miR-200b-3p相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組，但低于UC-DYS組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。

2.2 不同UC內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)及嚴(yán)重程度的患者的血清miR-200b-3p表達(dá)

內(nèi)鏡下活動(dòng)期的UC患者血清miR-200b-3p的相對(duì)表達(dá)量為4.03±0.78，高于內(nèi)鏡下緩解期者(2.60±0.71)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-8.845，P<0.001)。在內(nèi)鏡下活動(dòng)期UC患者中，重度患者血清miR-200b-3p的相對(duì)表達(dá)量為4.73±0.47，高于輕、中度患者(3.65±0.64)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-6.619，P<0.001)。

2.3 miR-200b-3p與UCEIS的相關(guān)性分析

UC組患者血清miR-200b-3p的相對(duì)表達(dá)量與UCEIS呈正相關(guān)關(guān)系(rs=0.912，P<0.001)。見(jiàn)圖1。

圖1 血清miR-200b-3p的相對(duì)表達(dá)量與UCEIS的相關(guān)性分析

2.4 miR-200b-3p診斷UC內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)、嚴(yán)重程度及UC-DYS的效能

miR-200b-3p診斷UC內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)、嚴(yán)重程度及UC-DYS的ROC曲線下面積(AUC)分別為0.911(95%CI：0.834～0.961)、0.914(95%CI：0.809～0.972)和0.824(95%CI：0.750～0.884)。當(dāng)miR-200b-3p>3.57時(shí)診斷UC內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)有較高的準(zhǔn)確度，其敏感度和特異度分別為77.19%和88.57%。當(dāng)miR-200b-3p>4.08時(shí)診斷活動(dòng)期UC嚴(yán)重程度具有較高的準(zhǔn)確度，其敏感度和特異度分別為100.00%和72.97%。當(dāng)miR-200b-3p>3.81時(shí)診斷UC-DYS有較高的準(zhǔn)確度，其敏感度和特異度分別為95.45%和58.70%。見(jiàn)圖2和表2。

圖2miR-200b-3p診斷UC內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)、嚴(yán)重程度及UC-DYS的ROC曲線AUC內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)B活動(dòng)期UC嚴(yán)重程度CUC-DYS

表2 miR-200b-3p診斷UC內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)、嚴(yán)重程度及UC-DYS的效能

3 討論

miR-200b-3p參與機(jī)體多種生理活動(dòng)，有研究表明其可參與調(diào)節(jié)單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的分化[12]。此外，有多項(xiàng)研究表明miR-200b-3p與前列腺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌及膠質(zhì)瘤等發(fā)生有關(guān)[13-17]。miR-200b參與炎癥性腸病(IBD)腸上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，其在IBD病變的黏膜中表達(dá)量降低[18]。miR-200b-3p屬于miR-200b的一員，但有研究表明其在UC-DYS患者的病變黏膜中呈高表達(dá)[9]。本研究選取92例UC患者和44例UC-DYS患者作為研究對(duì)象，通過(guò)分析兩組患者血清miR-200b-3p的表達(dá)水平，以期闡明miR-200b-3p與UC發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

本研究結(jié)果顯示，對(duì)照組、UC組和UC-DYS組的血清miR-200b-3p相對(duì)表達(dá)量的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。UC組的血清miR-200b-3p相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組，但低于UC-DYS組。但Lewis等[9]的研究表明，UC患者與UC-DYS患者的血清miR-200b-3p表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與樣本量、人種及個(gè)體差異有關(guān)，需進(jìn)一步研究驗(yàn)證。此外，本研究比較了內(nèi)鏡下不同狀態(tài)及不同嚴(yán)重程度的UC患者血清miR-200b-3p的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果顯示內(nèi)鏡下活動(dòng)期UC患者的血清miR-200b-3p相對(duì)表達(dá)量高于內(nèi)鏡下緩解期者；而在內(nèi)鏡下活動(dòng)期UC患者中，重度患者的血清miR-200b-3p相對(duì)表達(dá)量高于輕、中度患者。上述結(jié)果表明miR-200b-3p與UC發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

目前臨床上常用Mayo內(nèi)鏡評(píng)分和UCEIS評(píng)分評(píng)價(jià)UC患者的黏膜病變程度，但由于Mayo內(nèi)鏡評(píng)分以黏膜脆性為分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，容易受到臨床醫(yī)師的主觀影響，致使各醫(yī)師對(duì)UC患者的評(píng)估結(jié)果并不一致[19]。而UCEIS主要從血管紋理、出血情況、糜爛和潰瘍這3個(gè)方面評(píng)價(jià)黏膜病變情況，對(duì)黏膜病變程度的評(píng)價(jià)更為細(xì)致、全面[20]。另有研究表明，UCEIS評(píng)分在評(píng)價(jià)UC患者臨床轉(zhuǎn)歸及遠(yuǎn)期預(yù)后方面的準(zhǔn)確度高于Mayo內(nèi)鏡評(píng)分[11]。此外，本研究表明miR-200b-3p評(píng)價(jià)UC內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)、嚴(yán)重程度及UC-DYS均有較高的臨床價(jià)值。本研究的樣本量偏小，且為單中心研究，可能因樣本量小及個(gè)體差異等原因?qū)е卵芯拷Y(jié)果出現(xiàn)偶然性和隨機(jī)性。后續(xù)需擴(kuò)大樣本量，進(jìn)行多中心研究，同時(shí)進(jìn)行多因素回歸分析以進(jìn)一步闡明miR-200b-3p與UC內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)、嚴(yán)重程度及UC-DYS的關(guān)系。

綜上所述，miR-200b-3p與UC的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。檢測(cè)UC患者血清miR-200b-3p的表達(dá)量有助于了解其UC內(nèi)鏡下?tīng)顟B(tài)、嚴(yán)重程度及UC-DYS的發(fā)生情況。