陳雪，孫麗娜，王媚，安冬，王淼，商超，吳春華

（大連市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)發(fā)展服務(wù)中心，遼寧大連 116030）

灑金柏（Sabina chinensis（ L.）Ant.cv.Aurea）為柏科側(cè)柏屬（Sambucus）多年生落葉灌木，是中國北方應(yīng)用最廣、栽培觀賞歷史最久的園林樹種，其樹冠渾圓豐滿，酷似綠球，葉色金黃，仿佛金沙籠罩，夏綠冬青，不遮光線，不礙視野，尤其在雪中更顯生機(jī)。灑金柏配植于草坪、花壇、山石、林下，可增加綠化層次，豐富觀賞美感。隨著城市綠化的發(fā)展，對灑金柏苗木的需求日益增多，傳統(tǒng)的灑金柏扦插繁殖受時(shí)間限制，且易受病害侵染，降低了苗木生產(chǎn)能力。鑒于植物組織培養(yǎng)快繁技術(shù)趨于成熟[2]，其繁殖的速度快，且不受地區(qū)、氣候的影響，能夠及時(shí)提供大量優(yōu)質(zhì)種苗。目前我國灑金柏快速繁殖技術(shù)方面還處于空白階段，該試驗(yàn)對灑金柏叢生芽誘導(dǎo)及增殖的激素配比進(jìn)行篩選，旨在為灑金柏快速繁殖奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料。供試材料為1年生灑金柏，選取健壯、無病蟲害的嫩枝莖段為外植體。

1.2 方法

取灑金柏莖段2 cm，流水沖洗30 min。75%酒精浸泡外植體30 s，無菌水沖洗3次，再用5%NaClO浸泡外植體5 min，無菌水沖洗3次。外植體接種到不同激素配比的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。接種后置于培養(yǎng)室內(nèi)光照培養(yǎng)，光照時(shí)間為10～12 h/d，光照強(qiáng)度為2 000 lx，培養(yǎng)室溫度（25±2）℃。

1.2.1 芽萌發(fā)誘導(dǎo)。每種處理接種30個(gè)外植體于芽萌發(fā)誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基均以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基（表1），培養(yǎng)35 d后，統(tǒng)計(jì)其萌芽率。

萌芽率 ＝（萌芽數(shù)/接種的外植體數(shù)）×100%成活率 ＝（成活數(shù)/萌芽數(shù)）×100%

表1 芽萌發(fā)誘導(dǎo)培養(yǎng)基激素水平

1.2.2 叢生芽誘導(dǎo)。經(jīng)過芽萌發(fā)培養(yǎng)后，切取脫毒嫩芽，接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)基均以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基（表2）。每種處理接種10個(gè)外植體；35 d后統(tǒng)計(jì)其平均株高、平均葉片數(shù)及增殖系數(shù)。

表2 叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基激素水平

平均株高=苗的總高度/苗的總數(shù)

平均葉片數(shù)=葉片總數(shù)/苗的總數(shù)

增殖系數(shù)=增殖后的幼芽數(shù)/接種的外植體數(shù)

1.2.3 生根誘導(dǎo)。叢生芽分切為單芽，接種到生根培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)基均以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基（表3）。每種處理接種30個(gè)外植體；35 d后統(tǒng)計(jì)其平均根數(shù)、平均根長、平均株高及生根率。

平均根數(shù)=生根總數(shù)/接種外植體數(shù)

平均根長=根的總長度/根的總數(shù)

生根率=（生根的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù)）×100%

表3 生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基激素水平

2 結(jié)果與分析

2.1 外源激素對灑金柏誘導(dǎo)芽萌發(fā)的影響

9種芽萌發(fā)誘導(dǎo)培養(yǎng)基對灑金柏芽萌發(fā)的影響差異較大。從表4可以看出，經(jīng)9種處理組合培養(yǎng)基誘導(dǎo)后，都能夠促使灑金柏初代外植體萌芽，但以M4處理的萌芽率最高，達(dá)到96.67%，且植株生長健壯、節(jié)間正常、葉片平展，幾乎不存在葉片變黃脫落的現(xiàn)象（圖1）。在M5處理中，其萌芽率雖然達(dá)到了80%，初期植株長勢較強(qiáng)，但是容易落葉從而影響植株后期生長，甚至導(dǎo)致植株死亡。在M6處理中，萌芽率相對較高，達(dá)到73.33%，卻伴有葉片黃化現(xiàn)象發(fā)生，后期植株生長勢逐漸變?nèi)?，甚至死亡。其他激素組合的培養(yǎng)基中，植株生長勢弱，伴有葉片細(xì)弱、卷曲及節(jié)間縮短，致使植株后期不能正常生長，未達(dá)到預(yù)期效果。因此，灑金柏最適的芽萌發(fā)誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為 MS＋6-BA（0.2 mg/L）＋NAA（0.1 mg/L）（圖 2）。

表4 外源激素對灑金柏芽萌發(fā)誘導(dǎo)的影響

圖1 灑金柏出芽萌發(fā)

圖2 灑金柏繼代培養(yǎng)

2.2 外源激素對灑金柏誘導(dǎo)叢生芽的影響

在MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑NAA、6-BA對灑金柏的帶芽莖段進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)35 d后的統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表5所示。

表5 外源激素對灑金柏叢生芽誘導(dǎo)的影響

2.3 外源激素對灑金柏誘導(dǎo)生根的影響

從表6可以看出，9種處理組合均可誘導(dǎo)灑金柏帶芽莖段生根，在1/2MS為基本培養(yǎng)基的處理組合中，綜合而言，在所有處理組合中以處理S6的效果最為顯著，其主根粗壯、須根較多，培養(yǎng)苗整體長勢較壯，葉片平展，生根率達(dá)到了93%。因此，灑金柏最適生根培養(yǎng)基的組成為1/2MS＋I(xiàn)BA（0.5 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）（圖 4）。

表6 外源激素對灑金柏生根誘導(dǎo)的影響

從表5可以看出，在加入 NAA（0.1 mg/L）和6-BA（0.5 mg/L）的Z5處理中，灑金柏的長勢最好，平均株高5.34 cm，平均葉片數(shù)6.74片，增殖系數(shù)達(dá)到6.8，顯著高于其他處理（圖3）。因此灑金柏的最佳增殖培養(yǎng)基組成為 1/2MS＋NAA（0.1 mg/L）+6-BA（0.5 mg/L）。

圖3 灑金柏增殖培養(yǎng)

圖4 灑金柏生根培養(yǎng)

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)中大量愈傷組織出現(xiàn)了褐化的現(xiàn)象，可能與培養(yǎng)基中各物質(zhì)的配比有關(guān)，或者是材料自身原因，仍需進(jìn)一步討論。該研究對影響灑金柏的離體快繁的激素進(jìn)行分析，初步篩選出芽萌發(fā)、叢生芽及生根誘導(dǎo)的培養(yǎng)基配方。最適芽萌發(fā)培養(yǎng)基為1/2MS＋6-BA（5.0 mg/L）＋NAA（0.1 mg/L）；叢生芽誘導(dǎo)最佳增殖培養(yǎng)基為 1/2MS＋NAA（0.1 mg/L）+6-BA（0.5 mg/L）；最適生根培養(yǎng)基為1/2MS＋I(xiàn)BA（0.5 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）。

不同植物種類和不同培養(yǎng)目標(biāo)對植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)有不同的要求，篩選出的激素配比為今后灑金柏的離體快繁奠定基礎(chǔ)。隨著園林綠化的普及，常綠小灌木灑金柏的需求量與日俱增，由于組培苗的生長環(huán)境限制性，因此灑金柏試管苗的馴化工作尤為重要。獲得無菌且生長力旺盛的苗木是園林綠化成本降低的根本，也是組培苗工廠化的關(guān)鍵和瓶頸。