趙景利/遼寧省大連市長?？h動物衛(wèi)生監(jiān)督所

豬細(xì)小病毒病又稱豬繁殖障礙病，臨床癥狀主要以懷孕母豬發(fā)生流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎為主，對生豬養(yǎng)殖造成重大危害。大連地區(qū)作為生豬養(yǎng)殖的重點(diǎn)區(qū)域，養(yǎng)殖數(shù)量大，種類多，雖然進(jìn)行了多年的疫苗免疫，但豬細(xì)小病毒病對大連地區(qū)養(yǎng)豬業(yè)的威脅依舊存在，而帶毒精液則是豬細(xì)小病毒傳播的重要途徑。

根據(jù)豬細(xì)小病毒精液傳播的特點(diǎn)，如何在傳播途徑上對豬細(xì)小病毒進(jìn)行控制，就成為豬細(xì)小病毒防控的另一種思路。基于這一觀點(diǎn)，大連市動物疫病預(yù)防控制中心對大連區(qū)域內(nèi)21家種豬場進(jìn)行了精液采集，對采集的精液進(jìn)行了豬細(xì)小病毒的病原檢測，現(xiàn)將檢測情況報告如下。

一、材料與方法

1.精液樣品。從大連地區(qū)21家種豬場采集了精液樣品750份，其中原精液450份，經(jīng)1：5稀釋16～18℃保存不超過3d的精液300份，均-70℃保存。

2.試劑。豬細(xì)小病毒核酸（PPV）檢測試劑盒（批號：20171114）：中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司；核酸提取試劑盒（產(chǎn)品批號20180503）：上海拜諾生物科技有限公司。

3.主要儀器。熒光定量PCR儀（型號QuantStudio5）：美國Thermo Fisher科技公司；高速冷凍離心機(jī)（型號3K-15）：德國SIGMA公司；核酸提取儀（型號King Fisher Flex）：美國Thermo公司。

4.試驗(yàn)過程

1）將采集的精液樣品放置在-70℃和37℃的環(huán)境中反復(fù)凍融3次，用高速冷凍離心機(jī)以13000r/min離心3min，取上清液。

2）按核酸提取盒中的操作說明進(jìn)行核酸提取。取50uL上清液加入到已經(jīng)配好試劑的sample板中，按順序放入到核酸提取儀中，提取完成后，取出elution板。板內(nèi)液體即為核酸。

表1 檢測結(jié)果

3）將提取的核酸按PPV核酸檢測試劑盒進(jìn)行熒光PCR檢測。

4）當(dāng)陰性質(zhì)控品FAM檢測通道無擴(kuò)增曲線，且陽性質(zhì)控品FAM檢測通道有擴(kuò)增曲線，同時Ct值≤32時，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。當(dāng)檢測樣品有典型擴(kuò)增曲線，并且Ct值≤38時，可判為樣品PPV核酸陽性，如樣品Ct值＞38或無Ct值時，可判為樣品PPV核酸陰性。

二、結(jié)果與分析

1.結(jié)果。對采集的750份精液進(jìn)行檢測其結(jié)果為：在450份原始精液中，檢出陽性樣品13份，陽性率為2.9%；在300份稀釋精液中，沒有檢出陽性樣品（見表1）。

2.分析。通過對采集的750份精液進(jìn)行免疫情況調(diào)查，了解到這21家種豬場豬細(xì)小病毒病免疫使用的都是豬細(xì)小病毒滅活苗，所以排除了因?yàn)橐呙缑庖叨斐傻募訇栃越Y(jié)果。經(jīng)分析出現(xiàn)這一結(jié)果的原因可能有以下幾點(diǎn)：1）在原精中的陽性檢出率較低，而在稀釋后的精液中沒有檢出陽性樣品。2）由于對豬細(xì)小病毒病的免疫較為重視，日常疫苗接種及時有效，免疫效果較好。3）在稀釋精液中，由于稀釋液中含有抑制或殺滅病原微生物的成分，所以在稀釋精液中，沒有檢出豬細(xì)小病毒病原陽性樣品。

三、討論與小結(jié)

大連地區(qū)長期以來對豬細(xì)小病毒病的防控采取以免疫為主，結(jié)合實(shí)驗(yàn)監(jiān)測、流行病學(xué)調(diào)查等措施，從而防止了豬細(xì)小病毒病大規(guī)模的暴發(fā)和流行?？墒怯捎谪i細(xì)小病毒病的流行和傳播特點(diǎn)，還是難以從根本上消除豬細(xì)小病毒病，但是隨著近幾年大連地區(qū)對養(yǎng)殖戶的宣傳教育，接種疫苗、自繁自養(yǎng)的理念被廣大養(yǎng)殖戶采納接受，通過實(shí)驗(yàn)可知，在種豬精液中攜帶豬細(xì)小病毒病的精液數(shù)量較少，豬細(xì)小病毒病通過精液傳播的風(fēng)險性大大降低。