吳佳遙 李磊 游海平

摘要? ? 為了研究植物精油對玉米黃曲霉毒素B1的脫毒效果，本試驗選用肉桂精油、山蒼子精油、羅勒精油作為脫毒物質(zhì)，采用酶聯(lián)免疫法測定黃曲霉毒素B1含量，研究3種精油用量為60 mg/20 g，熏蒸30 d的脫毒效果;研究3種精油用量為60 mg/20 g時的最佳熏蒸天數(shù);研究3種精油熏蒸30 d時的最佳精油用量。結(jié)果表明，肉桂精油、山蒼子精油、羅勒精油均對玉米黃曲霉毒素B1有一定的脫毒效果，且熏蒸天數(shù)不同、精油用量不同脫毒效果有差異。

關(guān)鍵詞? ? 玉米;黃曲霉毒素B1;肉桂精油;山蒼子精油;羅勒精油;脫毒率

中圖分類號? ? Q936? ? ? ? 文獻標識碼? ? A? ? ? ? 文章編號? ?1007-5739（2019）12-0215-01

黃曲霉毒素（AFT）是一類主要由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的真菌次級代謝產(chǎn)物，黃曲霉毒素B1（AFB1）是AFT中分布最廣、毒性最強的一種[1]。采食被AFB1污染的飼料可導(dǎo)致動物中毒，降低生產(chǎn)性能和免疫力。AFB1可增加自由基的產(chǎn)生，加劇氧化損傷和脂質(zhì)過氧化，導(dǎo)致細胞損傷和動物或人類死亡[2]。

精油是植物自身的一種次級代謝芳香物質(zhì)，具有揮發(fā)性高、穿透力強、分子量小等特點。相對沸點在70～300 ℃之間，相對密度在0.850～1.065之間[3-4]。因其天然無毒，很容易被吸收，廣泛應(yīng)用于美容、食品、農(nóng)業(yè)、醫(yī)療等行業(yè)。有研究表明，肉桂精油、山蒼子精油等對AFB1有一定的脫毒效果[5]，但不同用量及處理時間對AFB1的脫毒效果，以及與其他精油相比脫毒效果如何尚未進一步研究。本試驗選用肉桂精油、山蒼子精油與羅勒精油作為玉米AFB1脫毒物質(zhì)，研究3種精油不同用量及不同處理時間的脫毒效果，為玉米等作物AFB1脫毒處理提供參考。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗材料

1.1.1? ? 霉變玉米。水分含量為10.33%，由天津郊區(qū)某農(nóng)戶提供。粉碎霉變玉米并混合均勻，使95%以上的玉米粉通過20目篩，酶聯(lián)免疫法測定其AFB1含量為（8.87±1.20）μg/kg。

1.1.2? ? 主要試劑。肉桂精油、山蒼子精油、羅勒精油由江西省贛南天然香料油有限公司生產(chǎn);AgraQuantRAFB1檢測試劑盒為Romer Labs產(chǎn)品;無水甲醇購自天津永大化學(xué)試劑有限公司。

1.1.3? ? 儀器和設(shè)備。CMax Plus酶標儀（型號為SpectraMaxR Absorbance Reader），為Molecular Devices公司產(chǎn)品;Eppendorf移液槍（型號為20-200 μL）、振蕩器（型號為EMS—18C）、生化培養(yǎng)箱購自上海一恒科學(xué)儀器有限公司;電子天平（型號為AX224ZH/E）購自奧豪斯儀器有限公司;Whatman#1濾紙、槍頭、密封袋等購自天津晟佰昊生物技術(shù)有限公司。

1.2? ? 試驗設(shè)計

采用單因素設(shè)計，共27個處理（其中24個試驗處理，3個空白處理），每個處理4次重復(fù)。其中，3種植物精油脫毒率比較試驗設(shè)3個處理，依次為肉桂精油、山蒼子精油、羅勒精油用量60 mg/20 g密封熏蒸30 d;不同處理時間比較試驗，3種精油分別設(shè)3個處理，依次密封熏蒸25、30、35 d用量為60 mg/20 g;不同用量比較試驗中，3種精油分別設(shè)4個處理，依次用量為50 mg/20 g、60 mg/20 g、70 mg/20 g、80 mg/20 g，密封熏蒸30 d;3個空白處理依次密封熏蒸25、30、35 d。所有處理組均放置于30 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱。

1.3? ? 試驗方法

采用《飼料中黃曲霉毒素B1的測定酶聯(lián)免疫法》（GB/T 17480—2008）測定玉米AFB1，按試劑盒說明書檢測，最低檢出濃度為2 μg/kg。精確稱取20.000 0 g玉米粉樣品于250 mL錐形瓶中。剪取長3 cm、寬1 cm的滅菌濾紙用細繩系住一端，吸附植物精油，懸吊于錐形瓶中，不與玉米粉接觸，空白組不吸附植物精油。錐形瓶口用封口膜密封，并將錐形瓶放入密封袋中，置于30 ℃恒溫箱，試驗期間每天定時混合玉米粉，以確保玉米粉充分吸收植物精油氣體。試驗結(jié)束后玉米粉中加入100 mL 70%甲醇，振蕩或均質(zhì)3 min后靜置，用Whatman#1濾紙過濾獲得上清液，收集100 μL以上的濾液待檢。AFB1脫毒率計算公式如下：

1.4? ? 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用SPSS 20.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，試驗數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標準差”形式表示，采用單因素ANOVO方差分析和Duncan檢驗各組間差異顯著性，P<0.05表示差異顯著。

2? ? 結(jié)果與分析

2.1? ? 3種精油脫毒效果比較

3種精油用量均為60 mg/20 g、密封熏蒸30 d時，3種精油對AFB1的脫毒率如表1所示?？梢钥闯?，3種精油均對AFB1有脫毒效果，脫毒率由高到低依次為肉桂精油>山蒼子精油>羅勒精油。其中肉桂精油脫毒率與山蒼子精油脫毒率差異不顯著（P>0.05）;羅勒精油脫毒率與肉桂精油、山蒼子精油相比差異顯著（P<0.05）。

2.2? ? 3種精油不同熏蒸時間脫毒效果比較

3種精油用量為60 mg/20 g，分別密封熏蒸25、30、35 d時，3種精油對AFB1的脫毒率如表2所示?？梢钥闯?，肉桂精油熏蒸30 d時脫毒率最高，顯著高于25 d（P<0.05），再隨時間增加脫毒率差異不顯著（P>0.05）。山蒼子精油熏蒸30 d時脫毒率最高，顯著高于25 d與35 d（P<0.05），熏蒸25 d與35 d脫毒率差異不顯著（P>0.05）。羅勒精油熏蒸30 d時脫毒率最高，顯著高于35 d（P<0.05），熏蒸25 d與30 d脫毒率差異不顯著（P>0.05）。

2.3? ? 3種精油不同用量脫毒效果比較

3種精油用量分別為50 mg/20 g、60 mg/20 g、70 mg/20 g、80 mg/20 g，熏蒸30 d時，不同精油對AFB1的脫毒率如表3所示。可以看出，肉桂精油與山蒼子精油用量均為60 mg/20 g時對AFB1脫毒率最高，與50 mg/20 g差異顯著（P<0.05），隨用量的增加脫毒率略有下降，與70 mg/20 g、80 mg/20 g差異不顯著（P>0.05）。羅勒精油對AFB1的脫毒率隨用量的增加而提高，80 mg/20 g時脫毒率最高，與70 mg/20 g差異不顯著（P>0.05），與60 mg/20 g、50 mg/20 g差異顯著（P<0.05），60 mg/20 g與50 mg/20 g差異顯著（P<0.05）。

3? ? 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明，3種精油用量為60 mg/20 g、密封熏蒸30 d對AFB1均有脫毒作用，且肉桂精油的脫毒效果最佳，繼續(xù)增加用量脫毒率稍有下降，推測精油達到一定用量時，脫毒效果反而會降低。已有研究表明，肉桂精油對玉米AFB1脫毒效果好于山蒼子精油，肉桂精油用量30 mg/20 g、熏蒸28 d時脫毒率最好，用量大于30 mg/20 g脫毒率稍有下降;熏蒸時間在28 d內(nèi)，脫毒率隨時間增加而上升，28 d時脫毒率達71.79%，熏蒸時間延長脫毒率降低[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，肉桂精油對玉米AFB1脫毒效果好于山蒼子精油，但差異不顯著。肉桂精油對玉米AFB1的脫毒率較高（81.86%），推測可能與粉碎玉米后增加精油對玉米的接觸面積有關(guān)，且增加精油用量、延長熏蒸時間可提高脫毒率。羅勒精油熏蒸30 d、用量80 mg/20 g時對玉米AFB1脫毒率可達81.66%，繼續(xù)增加用量是否會提高AFB1脫毒率有待檢驗研究。

植物精油是綠色環(huán)保、符合生態(tài)發(fā)展的一種新型飼料添加劑[6]。已有研究表明，高濃度肉桂精油、山蒼子精油、丁香精油主要抑制黃曲霉的生長，低濃度主要抑制AFT的生物合成，肉桂醛、檸檬醛、丁香酚都能調(diào)控AFT生物合成的基因[7]。本研究可為植物精油作為AFB1脫毒物質(zhì)及應(yīng)用提供試驗依據(jù)，但其使用及作用機理尚待進一步研究。

4? ? 參考文獻

[1] 蔡俊，田爾諾，邵帥，等.黃曲霉毒素B1生物脫毒的研究進展[J].微生物學(xué)通報，2017，44（3）：726-731.

[2] RAJPUT S A，SUN L H，ZHANG N Y，et al.Ameliorative effects of grape seed proanthocyanidin extract on growth performance，immune function，antioxidant capacity，biochemical constituents，liver histopathology and aflatoxin residues in broilers exposed to aflatoxin B1[J].Toxins（Basel），2017，9（11）：371.

[3] 何鳳平，雷朝云，范建新，等.植物精油提取方法、組成成分及功能特性研究進展[J].食品工業(yè)科技，2018（24）：14.

[4] 王蘭，陳代文，余冰，等.植物精油對肉雞生長性能、抗氧化能力和免疫機能的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2018，30（12）：8.

[5] 袁媛.植物精油熏蒸控制玉米中真菌毒素的研究[D].北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2013.

[6] 李方方，楊晶晶，張瑞陽，等.植物精油對斷奶仔豬生長性能、血清生化指標及養(yǎng)分表觀消率的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2018，30（12）：6.

[7] 梁丹丹.三種植物精油抑制玉米中黃曲霉生長及產(chǎn)毒研究[D].北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2015.