袁曉春

（錦州市農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務(wù)中心，遼寧 錦州 121000）

測量不確定度是與測量結(jié)果關(guān)聯(lián)的一個(gè)參數(shù)，用于表征合理賦予被測量值的分散性。測量不確定度越大，表示測量能力越差，反之，表示測量能力越強(qiáng)。不過，不管測量不確定度多小，測量不確定度范圍必須包括真值（一般用約定真值代替），否則表示測量過程已經(jīng)失效。隨著實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可和資質(zhì)認(rèn)定對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測能力要求的逐漸提高，測量不確定度已成為一個(gè)完整的定量分析結(jié)果的重要組成部分[1]。本文以紫外分光光度法測定恩諾沙星可溶性粉為例，按照2017 年版《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》化學(xué)卷檢測方法進(jìn)行測量，依據(jù)《JJF1059.1-2012 測量不確定度評(píng)定與表示》，并參考相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)測量過程中產(chǎn)生的不確定度分量進(jìn)行分析和評(píng)估，從而評(píng)定其不確定度[2-8]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-1800紫外分光光度計(jì)（日本島津）；AG285電子天平（梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司）；250 mL、100 mL 容量瓶（天玻牌A 級(jí)）；5 mL 移液管（天玻牌A級(jí)）。

1.2 試劑

恩諾沙星對(duì)照品（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、批號(hào)：H0081505）；恩諾沙星可溶性粉（10%、100 g規(guī)格，某獸藥廠提供）；氫氧化鈉（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司、分析純）。

2 試驗(yàn)方法

取本品適量（約相當(dāng)于恩諾沙星25 mg），精密稱定，置250 mL容量瓶中，加0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液10 mL，振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置100 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。按照紫外-可見分光光度法（中國獸藥典附錄0401），用1 cm比色池，在271 nm的波長處測定吸光度；另取恩諾沙星對(duì)照品，同法測定。

按照2017 年版《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》化學(xué)卷檢測恩諾沙星可溶性粉含量方法，計(jì)算公式見式1。

式中：A供為供試品吸光度；A對(duì)為對(duì)照品吸光度；W對(duì)為試樣質(zhì)量（g）；W供為對(duì)照品質(zhì)量（g）；對(duì)照品濃度為99.6%；供試品標(biāo)示量為10%；對(duì)照品稀釋倍數(shù)為10 000；供試品稀釋倍數(shù)為10 000。

3 不確定度傳播

3.1 分析不確定度來源

本試驗(yàn)中，不確定度來源于稱量、定容、量取和樣品比色測定引入的不確定度。

3.2 量化不確定度分量

3.2.1 稱量的不確定度

對(duì)照品質(zhì)量稱定的不確定度Ums來源包括天平的示值不確定度UmS1、天平重復(fù)性不確定度UmS2及其天平偏載誤差UmS3。

十萬分之一天平的示值不確定度UmS1，根據(jù)天平附帶資料，天平稱量允許誤差為±0.04 mg。US1=0.04/=0.023 1 mg。

由天平重復(fù)性帶入的不確定度UmS2，根據(jù)天平附帶資料，天平稱量重復(fù)性0.04 mg。US2=0.04/=0.023 1 mg。

天平偏載誤差帶入的不確定度UmS3，根據(jù)天平附帶資料，天平偏載誤差0.05 mg。US2=0.05/=0.028 9 mg。

由于恩諾沙星對(duì)照品稱量25.1 mg，則對(duì)照品稱量引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Us。

樣品質(zhì)量稱定的不確定度UmY來源包括天平的示值不確定度UmY1、天平重復(fù)性不確定度UmY2及其天平偏載誤差UmY3。

萬分之一天平的示值不確定度UmY1，根據(jù)天平附帶資料，天平稱量允許誤差為±0.2 mg。UY1=0.2/=0.115 5 mg。

由天平重復(fù)性帶入的不確定度UmY2，根據(jù)天平附帶資料，天平稱量重復(fù)性0.1 mg。UY2=0.1mg/=0.057 7 mg。

天平偏載誤差帶入的不確定度UmY3，根據(jù)天平附帶資料，天平偏載誤差0.3 mg。0.173 2 mg。

由于樣品稱量平均重量250.1 mg，則樣品稱量引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度UY。

3.2.2 對(duì)照品的定容與稀釋的不確定度

250 mL 容量瓶A 級(jí)容量允許誤差為0.15 mL，；容量瓶和溶液溫度與校正溫度不同起因的不確定度。250 mL容量在20 ℃下校準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為21.5 ℃，水的膨脹體積系數(shù)為2.1×10-4，按矩形分布計(jì)算，為2.1×10-4×（21.5-20）×250/3= 0.045 5 mL，250 mL容量瓶引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為。

100 mL 容量瓶A 級(jí)容量允許誤差為0.10 mL，；容量瓶和溶液溫度與校正溫度不同起因的不確定度。100 mL 容量在20 ℃下校準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為21.5 ℃，水膨脹體積系數(shù)為2.1×10-4，按矩形分布計(jì)算，UV4/3=2.1×10-4×（21.5-20）×100=0.018 2 mL，100 mL 容量瓶引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為。

5 mL 移液管容量允許誤差為0.015 mL，UV3=0.015/=0.008 7 mL；移液管和溶液溫度與校正溫度不同起因的不確定度。5 mL 容量在20 ℃下校準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為21.5℃，水的膨脹體積系數(shù)為2.1×10-4，按矩形分布計(jì)算，UV4=2.1×10-4×

3.2.3 樣品的定容與稀釋的不確定度

計(jì)算同3.2.2，UV樣=0.189%

3.2.4 儀器比色的不確定度

影響比色的主要因素是分光光度計(jì)的準(zhǔn)確性。儀器的影響采用B 類評(píng)定。檢定證書給出的UV-1800 分光光度計(jì)的透射比準(zhǔn)確度為0.5%，按均勻分布UT。

3.2.5 重復(fù)測定

重復(fù)測定引入的不確定度UR采用A類評(píng)定，重復(fù)6次測量，結(jié)果如表1所示。用貝塞爾公式計(jì)算單次測量的標(biāo)準(zhǔn)偏差S(x)，n=6按照貝塞爾法算出。

4 合成不確定度與擴(kuò)展不確定度

取k=2，U=2U合=0.92%。

報(bào)告按2017 年版《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》化學(xué)卷檢測恩諾沙星可溶性粉含量，其結(jié)果為：C=108.24%±0.92%=107.32%～109.16%，k=2。

表1 樣品重復(fù)測定結(jié)果數(shù)據(jù)

表2 紫外分光光度法測定恩諾沙星可溶性粉的不確定度分量

5 討 論

本文分析了紫外分光光度法測定恩諾沙星可溶性粉的測定過程中不確定度的各個(gè)分量的來源，由分析結(jié)果可知，儀器比色，溶解與定容、對(duì)照品的稱量和重復(fù)性測定對(duì)不確定度有較大貢獻(xiàn)，而樣品的稱量對(duì)不確定度貢獻(xiàn)較小。由此可見，日常應(yīng)注意儀器的維護(hù)和保養(yǎng)，在測量過程中應(yīng)選擇精密度高的儀器，使用經(jīng)校正合格的容量儀器進(jìn)行稀釋，必要時(shí)可適當(dāng)增加測定次數(shù)，進(jìn)一步降低引入的不確定度。

在評(píng)估不確定度中有很多因素需要考慮，要抓住主要分量，避免漏項(xiàng)。以本試驗(yàn)為例，在進(jìn)行測量不確定度評(píng)估前首先要對(duì)測量過程進(jìn)行分析，然后對(duì)不確定度分量逐一進(jìn)行評(píng)估。不確定度評(píng)估過程中避免重復(fù)評(píng)估。如當(dāng)評(píng)估了測量的重復(fù)性分量，就不必在評(píng)估如稱量、體積、儀器的重復(fù)性分量了。一些非輸入量不應(yīng)將其作為分量進(jìn)行評(píng)估，其對(duì)測量結(jié)果的影響已經(jīng)反映在測量重復(fù)性中。