劉迎輝，李雙娣，隋永朋，李洪禹，劉愛東

(1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130017；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長春 130021； 3.長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三臨床醫(yī)院，長春 130117)

冠心病又被稱為缺血性心臟病，是因冠狀動脈粥樣硬化導(dǎo)致血管腔變窄或阻塞，或因為冠狀動脈發(fā)生功能性改變而導(dǎo)致心肌缺血、缺氧甚或壞死而引起的心臟病，屬于中醫(yī)學(xué)胸痹心痛范疇[1]。宣痹通瘀膠囊是國家級名中醫(yī)、著名心血管專家黃永生教授的臨床經(jīng)驗方,為治療氣滯血瘀型冠心病心絞痛的中藥復(fù)方制劑，其臨床療效顯著。本實驗通過腹腔注射大劑量異丙腎上腺素注射液(ISO)誘發(fā)大鼠心肌缺血模型，通過觀察大鼠心電圖ST段變化，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)活性變化及心肌組織超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量變化，評價宣痹通瘀膠囊抗心肌缺血的作用，為臨床治療缺血性心臟病提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

SPF級Wistar大鼠共計60只，雌雄各半，體質(zhì)量200～220 g，購自長春億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司(資格證號SCXK-(吉)2011-0004)。

1.2 藥物、主要試劑及儀器

宣痹通瘀膠囊由長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院實驗研究中心提供，每粒膠囊含生藥4.03 g(批號20141201)；通心絡(luò)膠囊由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，每粒膠囊含生藥0.26 g(批號國藥準(zhǔn)字Z19980015)；ISO注射液(上海禾豐，批號41140601)；AST測定試劑盒(批號151261)、CK測定試劑盒(批號150911)、LDH測定試劑盒(批號150211)均由中生北控有限公司生產(chǎn)；SOD酶聯(lián)免疫試劑盒(美國R&D Systems Inc，批號20160508 A)；MDA檢測試劑盒(南京建成，批號20141015)；生理信號采集系統(tǒng)(澳大利亞埃德)；全自動生化分析儀(荷蘭威圖)；酶標(biāo)儀(美國伯樂)；可調(diào)高速勻漿機(jī)(江蘇榮華)；臺式高速低溫離心機(jī)(德國賀利氏)。

2 方法

2.1 動物分組及給藥

實驗動物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、模型組、陽性對照組、宣痹通瘀高、中、低劑量組6組各10只，雌雄各半。給藥前將宣痹通瘀膠囊內(nèi)容物用0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC)配制成31.08 g/100 mL、15.54 g/100 mL和7.77 g/100 mL 3個濃度的懸液，通心絡(luò)膠囊內(nèi)容物用0.5%CMC配制成2.4 g/100 ml的懸液。對照組和宣痹通瘀各劑量組均按照10 ml/kg/次灌胃，每日1次，連續(xù)10 d。空白組和模型組均給予等體積的0.5%CMC懸液灌胃。

2.2 指標(biāo)檢測

末次給藥后1 h，將大鼠用20%烏來糖經(jīng)腹腔注射麻醉，固定于鼠板上，記錄一段正常標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖。隨后，除空白組動物腹腔注射生理鹽水4 ml/kg外，其余各組動物均腹腔注射ISO 2 mg(4ml)/kg。記錄各組注射后第1、3、5、10和30 min的肢體標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖。記錄心電圖后，經(jīng)腹主動脈取血，3000rmp離心10 min分離血清。按試劑盒說明書操作要求測定血清AST、CK和LDH活性；取心臟制作心肌組織勻漿，3000 rmp離心15 min取上清液，測定心肌組織中MDA含量及SOD活性[2-3]。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 大鼠心電圖ST段表達(dá)比較

表1顯示，在腹腔注射ISO前各組動物的心電圖ST段呈正態(tài)均勻分布，各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。注射ISO后，除空白組外其他各組心電圖ST段均有不同程度上移。在注射ISO后的各測試時間點，模型組大鼠心電圖ST段上移幅度均明顯高于空白組(P<0.05或P<0.01)，表明動物造模成功；宣痹通瘀高劑量組動物心電圖ST段上移幅度均明顯低于模型組(P<0.05或P<0.01)，表明用藥有效。宣痹通瘀中、低劑量組的起效時間分別為注射ISO后3 min，以及注射ISO后5 min和10 min。對照組在注射ISO 3 min以后的各測試時間點、心電圖ST段上移幅度明顯低于模型組(P<0.05或P<0.01)。

表1 大鼠心電圖ST段表達(dá)比較

注:與空白組比較：#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較:*P<0.05，**P<0.01

3.2 各組大鼠血清心肌三酶活性、心肌SOD活性及MDA含量表達(dá)比較

表2顯示，模型組動物血清心肌三酶(AST、CK、LDH)的釋放量明顯高于空白組(P<0.05或P<0.01)，而心肌組織中MDA含量明顯高于空白組(P<0.05)，SOD活性明顯低于空白組(P<0.01)，表明已經(jīng)形成心肌缺血性損傷。宣痹通瘀高、中劑量組和對照組大鼠血清心肌三酶AST、CK和LDH的活性均明顯低于模型組，心肌組織中MDA含量明顯低于模型組，SOD活性均高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)；宣痹通瘀低劑量組與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但有降低心肌三酶和MDA含量、增強(qiáng)SOD活性的趨勢。

4 討論

宣痹通瘀膠囊由6味中藥構(gòu)成，分別為延胡索(酒炙)、三七、川芎、郁金、人參、冰片。方中延胡索為君藥，能行血中之氣滯，氣中之血滯，具有活血行氣止痛之功[4]；三七、川芎、郁金三藥共為臣藥，助君藥活血行氣、化瘀止痛；方中人參有佐助和佐制之功，既可補氣生血又能固護(hù)正氣，還能防止君臣藥因行氣化瘀克伐太過而耗傷正氣[5]；冰片善于走散，在方中亦為佐藥，具有散氣、散血、散火、散滯、通竅等功效[6]。在傳統(tǒng)治療胸痹心痛的組方中，往往著重于活血行氣止痛，未兼顧到胸痹心痛實屬本虛標(biāo)實之證。而本方針對本病“虛氣留滯”的病機(jī)特點，取其“邪盛難掩本虛”之本義，治標(biāo)勿忘固本[7]。其組方優(yōu)勢，一是活血化瘀之藥與行氣導(dǎo)滯之品相配伍，可解血分、氣分之瘀滯；二是行氣之品與補氣之藥相伍，祛邪不忘扶正，使活血而不耗氣，行氣之又不傷及陰液；三是辛散有路,在活血行氣的同時給邪以出路，使氣機(jī)升降平和,氣血運行調(diào)順。本實驗研究所選用的對照藥物是與宣痹通瘀膠囊的功效、主治相近、藥物劑型及給藥途徑相似的通心絡(luò)膠囊，是吳以嶺院士在其脈絡(luò)學(xué)說理論指導(dǎo)下研制的治療冠心病心絞痛的臨床常用藥物，具有益氣活血、通絡(luò)止痛之功效[8]。本實驗結(jié)果顯示，宣痹通瘀膠囊高劑量組的治療效果優(yōu)于通心絡(luò)膠囊，宣痹通瘀膠囊中劑量組的治療效果與通心絡(luò)膠囊接近，宣痹通瘀膠囊低劑量組的治療效果不及通心絡(luò)膠囊。

表2 各組大鼠血清心肌三酶活性、心肌SOD活性及MDA含量表達(dá)比較

注:與空白組比較：#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較:*P<0.05；**P<0.01

本實驗采用腹腔注射 ISO誘發(fā)大鼠心肌缺血模型，這種造模方法與其他心肌缺血的動物造模方法比較，具有簡單有效、成本低、可重復(fù)性強(qiáng)的優(yōu)點，而且其病理改變非常類似人類急性心肌缺血的病變特征，是目前關(guān)于心肌缺血實驗研究中常用的造模方法[9]。心電圖ST段在等電位線上抬高程度與心肌缺血損傷程度呈正相關(guān)。同時在心肌缺血缺氧的情況下，細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)導(dǎo)致心肌酶外漏，其中AST、CK、LDH 3種心肌酶釋放最為明顯，其釋放量與心肌損傷、缺血缺氧程度呈正比。

研究表明，氧自由基增加是導(dǎo)致心肌發(fā)生缺血損傷的重要機(jī)制之一。SOD是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，是清除氧自由基的首要物質(zhì)。MDA可以反映脂質(zhì)過氧化的程度，心肌發(fā)生缺血性損傷后，SOD的活性下降，清除氧自由基的能力下降，引起心肌細(xì)胞內(nèi)氧自由基含量增多，導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)進(jìn)一步過氧化，過氧化代謝產(chǎn)物MDA含量增加，引起心肌細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重?fù)p傷[10-11]。此外相關(guān)研究表明，氧自由基可以激化細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。當(dāng)氧自由基處于低濃度時可以誘使細(xì)胞發(fā)生凋亡，而當(dāng)氧自由基處于高濃度時則可導(dǎo)致細(xì)胞壞死。心肌細(xì)胞凋亡參與心肌缺血梗死的各個階段，且細(xì)胞凋亡的程度直接決定心肌梗死的程度[12-16]。本實驗驗證了宣痹通瘀膠囊通過預(yù)防性給藥，能夠抑制動物心電圖ST段的異常抬高，減少血清心肌三酶釋放入血量，增強(qiáng) SOD活性，降低 MDA含量，減輕心肌損傷程度，其治療效果與用藥呈正相關(guān)的量效關(guān)系，其作用機(jī)制可能與其能夠調(diào)節(jié)能量代謝、減少自由基生成、進(jìn)而阻斷細(xì)胞凋亡有關(guān)，但具體的作用機(jī)制尚需進(jìn)一步的研究探索。