尹姣姣　池晶晶　李富強(qiáng)　譚世旭　任衛(wèi)科　田向?qū)W　路超　鄢明華

摘 ? ?要：為了解天津及周邊地區(qū)養(yǎng)豬場飼料中霉菌毒素含量及污染情況，筆者于2016年9月—2017年8月從天津市9個區(qū)縣及周邊的河北部分地區(qū)采集265份豬飼料及飼料原料，利用直接競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法分別對樣品中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、嘔吐毒素含量進(jìn)行測定。結(jié)果顯示：豬飼料及飼料原料中霉菌毒素檢出率為23.77%～96.98%，且96.98%的豬飼料及飼料原料受到2種及以上霉菌毒素污染。4種霉菌毒素中，嘔吐毒素污染最為嚴(yán)重，超標(biāo)率為29.81%;其次為玉米赤霉烯酮，超標(biāo)率為2.26%;黃曲霉毒素B1污染較輕，超標(biāo)率僅1.13%;樣品中未檢出T-2毒素超標(biāo)。

關(guān)鍵詞：豬飼料;飼料原料;霉菌毒素;污染

中圖分類號：S816 ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A ? ? ? ? ?DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2019.05.007

Investigation of Mycotoxin Contamination in Pig Feed Ingredients in Tianjin

YIN Jiaojiao1，2， CHI Jingjing1，2， LI Fuqiang1，2， TAN Shixu1，2， REN Weike1.2， TIAN Xiangxue1，2， LU Chao1，2， YAN Minghua1，2

（1.Tianjin Animal Science and Veterinary Research Institute， Tianjin 300381， China; 2.Tianjin Livestock and Poultry Health Breeding Technology Engineering Center， Tianjin 300381，China）

Abstract：In order to understand the content and pollution of mycotoxin in feed of the pig farms in Tianjin and its surrounding areas，265 samples were collected in Tianjin and its surrounding areas from September 2016 to August 2017. The content of aflatoxin B1，zearalenone，T-2 toxin ?and deoxynivalenol were determined by direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay （ ELISA ）. The results showed that the detection rate of mycotoxins in pig feed and feedstuff was 23.77%～96.98%， and 96.98% of feed and raw materials were contaminated by two or more mycotoxins. Among the four mycotoxins， the vomit toxin was the most polluted， the ratio above the standard rate was 29.81%; the zearalenone was the second， exceeding the standard rate was 2.26%; the aflatoxin B1 was light relatively in pollution and the overshooting was only 1.13%; and T-2 toxin was not detected in the samples.

Key words： pig feed; raw materials of feedstuff; mycotoxin; contamination

霉菌毒素可抑制蛋白質(zhì)和DNA合成，誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡，間接抑制免疫系統(tǒng)，造成豬對傳染病的易感性增加，降低生產(chǎn)效率[1]。有些霉菌毒素還會在畜禽的肉、蛋、奶等產(chǎn)品中蓄積和殘留，威脅人類食品安全[2]。在多種霉菌毒素中，黃曲霉毒素B1（AFB1）毒性最強(qiáng)，可造成人和動物急性和慢性中毒，引起生長遲緩、肝臟腫大、肝壞死、免疫機(jī)能下降等癥狀[3];且其具有蓄積性，長期攝入低劑量的黃曲霉毒素B1會引起動物的慢性中毒，導(dǎo)致動物出現(xiàn)生長緩慢、飼料利用率降低、生產(chǎn)性能下降[4]以及免疫力低下。玉米赤霉烯酮（ZEN）具有類似雌激素的作用，主要影響動物的繁殖性能[5-6]，使雌性小豬及母豬陰道紅腫。妊娠期的動物食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流產(chǎn)、死胎和畸胎。Muthulakshmi等[7]研究發(fā)現(xiàn)，玉米赤霉烯酮除造成斑馬魚心臟受損、脊柱彎曲外，還會引起受精胚胎DNA損傷、凋亡和組織學(xué)變化。T-2 毒素可抑制蛋白質(zhì)合成，并影響活細(xì)胞分化;中毒后表現(xiàn)為拒食、嘔吐，主要表現(xiàn)為胃腸道、肝和腎的壞死性損害和出血，嚴(yán)重中毒時可見口腔黏膜壞死。嘔吐毒素（DON）的毒性效應(yīng)包括嘔吐、不想進(jìn)食、胃腸炎、腹瀉和免疫抑制，豬是對嘔吐毒素最敏感的動物，當(dāng)飼料嘔吐毒素含量≥1 mg·kg^-1，豬只拒絕進(jìn)食[8]。

由于飼料及原料霉菌毒素污染對畜禽養(yǎng)殖業(yè)及飼料工業(yè)的發(fā)展影響嚴(yán)重，隨著我國現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展，人們對飼料原料中霉菌毒素的污染日益重視。研究表明，我國飼料及原料霉菌毒素污染相當(dāng)普遍，對畜牧業(yè)生產(chǎn)造成了不可忽視的影響，制約了養(yǎng)殖生產(chǎn)的效益[9]。本研究對天津及河北部分地區(qū)豬飼料及飼料原料中4種霉菌毒素的含量進(jìn)行調(diào)查，以便了解該地區(qū)霉菌毒素污染情況，為養(yǎng)豬生產(chǎn)提供咨詢和指導(dǎo)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用豬飼料及飼料原料樣品，于2016年9月—2017年8月采集于天津市（武清、寶坻、靜海、寧河、薊州、北辰、津南、西青和東麗）9個區(qū)縣及周邊河北部分地區(qū)，樣品包括玉米、豆粕、麩皮和豬飼料（表1）。

1.2 儀器與試劑

酶標(biāo)儀（美國BioTeK-ELx800）;洗板機(jī)（美國BioTeK-405LS）;離心機(jī)（美國Thermo-FRESCO17）;粉碎機(jī)（永康市老本行多功能粉碎機(jī)）。

霉菌毒素ELISA檢測試劑盒：黃曲霉毒素B1檢測試劑盒、玉米赤霉烯酮檢測試劑盒、T-2毒素檢測試劑盒和嘔吐毒素檢測試劑盒，均購自ROMER國際貿(mào)易（北京）有限公司。

鹽酸、氫氧化鈉、甲醇均為分析純，購自天津風(fēng)船化學(xué)公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 溶液配制 70%甲醇溶液：取2 100 mL純水，加入甲醇4 900 mL混勻。

1.3.2 樣品前處理 樣品采集方法按GB/T 14699.1-2005《飼料采樣方法》[10]進(jìn)行，從可能受污染的區(qū)域多次、多點(diǎn)采集具有代表性的樣品。每份樣品不少于500 g，粉碎過0.90 mm篩網(wǎng)?；旌虾蠓盅b封樣，一包作為檢測樣，一包留樣，各占50%。樣品在測定前密封保存于-20 ℃冰箱。

1.3.3 提取 黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和T-2毒素稱取5 g（精確至0.01 g）粉碎的樣品于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入25 mL 70%甲醇溶液，振蕩萃取3 min，靜置樣品，濾紙過濾上清液，收集濾液待測。

嘔吐毒素稱取5 g（精確至0.01 g）粉碎的樣品于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入25 mL蒸餾水，振蕩萃取3 min，靜置樣品，濾紙過濾上清液，收集濾液待測。

1.3.4 霉菌毒素含量檢測 按照ELISA檢測試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.5 判定標(biāo)準(zhǔn) 各種霉菌毒素限量值及參考標(biāo)準(zhǔn)見表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 霉菌毒素在不同飼料中的檢測結(jié)果

2.1.1 玉米 從表3可見，玉米中4種霉菌毒素均有檢出。其中，嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮污染比較嚴(yán)重，檢出率分別為91.07%和82.14%，超標(biāo)率分別為30.36%和7.14%，嘔吐毒素最高含量2 520.00 μg·kg^-1，是污染最為嚴(yán)重的毒素。黃曲霉毒素B1檢出率為19.64%，超標(biāo)率為5.36%;T-2毒素檢出率為48.21%，但均未超標(biāo)。

2.1.2 豆粕 從表4可見，豆粕中黃曲霉毒素B1未檢出，其他3種霉菌毒素均有不同程度污染。玉米赤霉烯酮和T-2毒素檢出率很高，分別為100.00%和97.06%，但均未超標(biāo)。嘔吐毒素檢出率為100.00%，超標(biāo)率為47.06%，污染嚴(yán)重，詳見表4。

2.1.3 麩皮 從表5可見，嘔吐毒素污染嚴(yán)重，檢出率94.59%，平均含量1 200.00 μg·kg^-1，最高含量為3 160.00 μg·kg-1，超過國家規(guī)定的飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，超標(biāo)率達(dá)45.95%。玉米赤霉烯酮、T-2毒素和黃曲霉毒素B1檢出率依次為97.30%，94.59%和27.03%，但含量均未超標(biāo)。

2.1.4 豬飼料 從表6可見，豬飼料中4種霉菌毒素均被檢出，其中，玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、T-2毒素和黃曲霉毒素B1檢出率分別為100.00%，99.28%，78.24%和30.43%;黃曲霉毒素B1和T-2毒素均未超標(biāo)，而嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮超標(biāo)率分別為21.01%和0.72%;嘔吐毒素的超標(biāo)率最高，含量的平均值為750 ?μg·kg^-1，接近國家規(guī)定的飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)最高限量，污染相對嚴(yán)重。

2.2 不同霉菌毒素污染情況

從檢測結(jié)果看，不同種類樣品中均出現(xiàn)高檢出率，表明這4種霉菌毒素在當(dāng)前豬飼料及飼料原料中的污染很普遍。在送檢樣品中，未檢出毒素的樣品1份（0.38%）;檢測到1種、2種和3種及以上毒素的樣品分別為7份（3.02%），43份（15.85%）和214份（80.75%）（圖1）。

在送檢的豬飼料和飼料原料樣品中，嘔吐毒素污染最嚴(yán)重，檢出率為96.98%，超標(biāo)率為29.81%;其次是玉米赤霉烯酮檢出率為95.85%，超標(biāo)率為2.26%;T-2毒素檢出率為76.98%，超標(biāo)率為0.00%; 黃曲霉毒素B1檢出率為23.77%，超標(biāo)率為1.13%（表7）。

2.3 不同季節(jié)霉菌毒素污染情況

從表8～表11可見，一年四季4種霉菌毒素均有污染，其中秋季污染最為嚴(yán)重。4種霉菌毒素中，黃曲霉毒素B1污染最輕，其中豆粕在四季中均未檢出;玉米赤酶烯酮在秋季和冬季污染嚴(yán)重，夏季污染相對較輕，其中以豬飼料和玉米含量較高，檢測平均值分別為111.96 μg·kg^-1和116.59 μg·kg^-1;T-2毒素在秋季污染嚴(yán)重，其后依次為夏季、冬季和秋季，以豆粕和麩皮含量較高，檢測平均值分別為37.60 μg·kg^-1和41.91 μg·kg^-1;嘔吐毒素在秋季污染最為突出，其中豆粕和麩皮最為嚴(yán)重，檢測平均值分別為980 μg·kg^-1和1 160 μg·kg^-1。

3 討 論

從檢測結(jié)果來看，天津及周邊地區(qū)豬飼料及飼料原料中霉菌毒素污染情況比較嚴(yán)重，超過99.00%以上的豬飼料及飼料原料受到霉菌毒素污染，這與朱風(fēng)華等[11]、王國強(qiáng)和杜妮[12]、曹偉[13]的報道基本一致，說明我國不同地區(qū)豬飼料及飼料原料均存在霉菌毒素的污染。此外，調(diào)查結(jié)果顯示，高達(dá)96.98%的豬飼料及飼料原料受到2種及以上霉菌毒素污染，表明本地區(qū)多種霉菌毒素在同一豬飼料或飼料原料樣品中共存現(xiàn)象很普遍，這比高新等[14]研究報道無論在豬成品飼料中或玉米、麩皮、豆粕等常見典型飼料原料中，2種霉菌毒素的共存現(xiàn)象均超過50.00%的結(jié)果還要嚴(yán)重。

黃俊恒等[15]研究報道，2015年嘔吐毒素超標(biāo)情況相對嚴(yán)重，樣品超標(biāo)率為38.7%，檢測平均值為1 896.8 ?μg·kg^-1。敖志剛和陳代文[16]研究報道，2006—2007年我國飼料原料和全價飼料中超標(biāo)率和檢出水平最高的霉菌毒素是嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和煙曲霉毒素，超標(biāo)率分別為53.5%，46.9%和38.1%。匈牙利Tima等[17]報道的鐮刀菌毒素和嘔吐毒素在豬飼料中的含量最高，T-2毒素和玉米赤霉烯酮含量較低。本研究結(jié)果顯示，嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素B1和T-2毒素的超標(biāo)率分別為29.81%，2.26%，1.13%和0.00%，其趨勢和以上報道基本相同。但超標(biāo)率明顯低于以上報道的數(shù)據(jù)，表明天津及周邊地區(qū)的霉菌毒素污染程度相對較輕，同時，嘔吐毒素仍是近幾年該地區(qū)豬飼料及飼料原料中霉菌毒素超標(biāo)的主要毒素。

對不同的霉菌毒素檢測結(jié)果表明，4種毒素中嘔吐毒素的超標(biāo)率明顯高于其他3種毒素，尤其是在豆粕和麩皮中，其中豆粕中超標(biāo)率為47.06%，最高含量為1 250.00 ?μg·kg^-1，麩皮中超標(biāo)率為45.95%，最高含量為3 160.00 ?μg·kg^-1。而以往備受關(guān)注的黃曲霉毒素B1的超標(biāo)率則僅為1.13%。此結(jié)果與杜妮[18-19]、黃俊恒和黃廣明[20]及謝文梅等[21]報道的檢測結(jié)果均一致;表明近年來我國豬飼料及飼料原料中嘔吐毒素的超標(biāo)率呈上升趨勢，而黃曲霉毒素B1的污染率呈下降趨勢。

以上結(jié)果顯示，天津及周邊地區(qū)豬飼料及飼料原料中霉菌毒素污染情況仍然比較嚴(yán)重，且一年四季均有污染。嘔吐毒素是當(dāng)前飼料中污染最為嚴(yán)重的毒素，應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測和防控。飼料廠和養(yǎng)殖企業(yè)對霉菌毒素的污染應(yīng)引起高度重視，加強(qiáng)對飼料及飼料原料的儲存方式、溫度和濕度等因素的管理和控制，以降低養(yǎng)殖風(fēng)險。

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